Эффективность густого экстракта суммы флавоноидов в виде мази при лечении контактного аллергического дерматита в эксперименте

Резюме

Цель работы - исследование специфической активности препарата наружного действия густого экстракта суммы флавоноидов из череды.

Материал и методы. Авторами разработано новое лекарственное средство - густой экстракт суммы флавоноидов в виде мази, получаемых из череды трехраздельной (лат. Bidens tripartita), которое использовалось для лечения контактного аллергического дерматита, вызванного 2,4-динитрохлорбензолом в эксперименте у морских свинок.

Результаты исследования показали, что 5 % мазевое лекарственное средство на основе густого экстракта суммы флавоноидов визуально более эффективно действовало на воспалительный процесс кожных покровов морских свинок по сравнению 1 и 3 % мазями на основе густого экстракта суммы флавоноидов, антигистаминного средства Псило-Бальзам® и глюкокортикостероидной мази Целестодерм В®.

Заключение. Изучаемые 1, 3 и 5 % мази густого экстракта суммы флавоноидов обладают выраженным действием на экспериментальный контактный дерматит у морских свинок. Наибольшим терапевтическим эффектом обладает 5 % мазь густого экстракта суммы флавоноидов на местной основе при контактном аллергическом дерматите. При этом индекс уменьшения тяжести кожных проявлений (Ind) был наибольшим по сравнению с другими исследуемыми группами - 37,9 %.

Ключевые слова:1 %, 3 % и 5 % мазь густого экстракта суммы флавоноидов; экспериментальный контактный аллергический дерматит; 2,4-динитрохлорбензол

Для цитирования: Хатамов Х.М., Суяров А. А., Киреев В.В., Зиядуллаев Ш.Х., Мухторов Ш.М., Алимжанова Л.И. Эффективность густого экстракта суммы флавоноидов в виде мази при лечении контактного аллергического дерматита в эксперименте. Иммунология. 2020; 41 (3): 269-273. DOI: 10.33029/0206-4952-2020-41-3-269-273

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Введение

Конец ХХ и начало XXI в. ознаменовались значительным ростом распространенности аллергической патологии среди взрослого и детского населения во всех странах мира. По последним данным, аллергические заболевания кожи в структуре дерматологической патологии занимают 20-40 %, причем эта цифра неуклонно растет [1, 2]. При лечении аллергического дерматита современная медицина использует большой арсенал синтетических лекарственных средств в виде мазей. Сам подход к расширению спектра лекарственных агентов за счет биологических активных соединений представляется чрезвычайно перспективным [3, 4].

Цель данного исследования - изучение специфической активности препарата наружного действия - густого экстракта суммы флавоноидов из травы череды трехраздельной (лат. Bidens tripartita) и ее сравнение с референс-препаратами - антигистаминной мазью Псило-Бальзам® и глюкокортикоидной мазью Целестодерм В®.

Материал и методы

Разработано новое лекарственное средство - густой экстракт суммы флавоноидов в виде мази из череды трехраздельной (лат. Bidens tripartita). Был изучен процесс получения гидрофобной основы для мазей с помощью ферментативной переэтерификации растительных масел и животных жиров из местного сырья, а также изучены ее физико-химические свойства.

С использованием суммы флавоноидов череды трехраздельной, растительных масел и животных жиров биотехнологическим методом была получена новая мазь и разработана технология ее производства в различных процентных соотношениях. В процессе изготовления мазей сумму флавоноидов череды трехраздельной растворяли в 70 % этиловом спирте и добавляли небольшими количествами при постоянном перемешивании в мазевую основу до получения однородной массы. Получены 1, 3 и 5 % мази густого экстракта суммы флавоноидов. Цвет мази был от светло- до темно-серого. Физико-химические свойства готовой мази, а также ее дисперсность, рН, коллоидная стабильность, число кислотности, йодное число и вязкость были определены по требованиям Международной фармакопеи ВОЗ, 4-я редакция (International pharmacopoeia vol. 4, 2006). Содержание биологически активных веществ в составе мази определяли спектрофотометрическим методом [5, 6].

Аллергический контактный дерматит (АКД) вызывали двукратной аппликацией 5 % спиртово-ацетонового раствора 2,4-динитрохлорбензола (ДНХБ) на взрослых морских свинках массой 300-400 г по методу Е.Я. Ивлевой и П.М. Залкан (1965) [7]. Животные содержались в стандартных условиях вивария и имели свободный доступ к пище и воде. Все манипуляции проводились согласно Хельсинкской конвенции по защите прав животных. Очаг сенсибилизации создавали на участке спины животных размером 3 х 3 см, с которого предварительно удаляли шерстный покров. На участок кожи наносили ДНХБ в дозе 0,1 мл 5 % спиртово-ацетонового раствора (2 : 1). Животным с АКД через сутки после второй аппликации аллергена наносили мазь густого экстракта суммы флавоноидов.

Данная модель соответствует аллергической реакции, которая развивается по замедленному типу и, в отличие от других типов аллергических реакций, в ней не принимают участие антитела, которые при взаимодействии с антигеном приводят к высвобождению медиаторов воспаления (гистамин, лейкотриены, цитокины и др.).

При АКД ткани повреждаются в результате инфильтрации Т-лимфоцитами и продуктами активированных макрофагов (гидролитические ферменты, провоспалительные цитокины и пр.). ДНХБ - это сильный аллерген, имеющий высокую проникающую способность при нанесении на кожу и провоцирующий у экспериментальных животных развитие выраженной воспалительной реакции аллергического характера, которая по клиническим признакам является аналогом аллергического дерматита у человека.

Для эксперимента использовали 36 морских свинок массой 300-400 г. Экспериментальных животных разделили на 6 групп по 6 животных. Животным каждой группы наносили различные дозы мази: 1-я группа -интактный контроль; 2-я группа - 1 % мазь густого экстракта суммы флавоноидов; 3-я группа - 3 % мазь густого экстракта суммы флавоноидов; 4-я группа - 5 % мазь густого экстракта суммы флавоноидов; 5-я группа -Псило-Бальзам®; 6-я группа - мазь Целестодерм В®. За развитием дерматита наблюдали в динамике на 1, 3, 5, 7, 9 и 11-е сутки эксперимента. Тяжесть воспалительных проявлений кожи оценивали в баллах по И.В. Кутузову (1996): 0 баллов - отсутствие реакции; 0,5 балла - проявление изолированных красных пятен; 1 балл - диффузно-умеренная гиперемия; 2 балл - четкая гиперемия и отечность; 3 балла - резкое покраснение и значительный отек; 4 балла - образование геморрагических корок; 5 баллов - образование обширных язв.

Индекс уменьшения тяжести кожных проявлений (Ind) рассчитывали по отношению к контрольной группе животных по формуле в процентах:

Ind = 100 (Sk - So)/Sk,

где Sk - суммы баллов в контрольной группе; So - сумма баллов в опытной группе [3, 5].

Одновременно регистрировали кожную температуру морских свинок с аллергическим дерматитом с помощью электронного термометра и величину кожной складки с помощью микрометра. Животным с АКД через сутки после второй аппликации аллергена (на 3-и сутки эксперимента) наносили мазь 1 раз в сутки течение 11 сут.

Характер изменения кожных покровов оценивали на 1, 3, 5, 7, 9 и 11-е сутки после последней аппликации аллергена. О тяжести развития АКД судили по общему состоянию и поведению животных.

1. Тяжесть аллергического процесса (частота реакции воспаления, ее титр и генерализация реакции воспаления у леченных животных в сравнении с соответствующими показателями у животных контрольной группы).

2. Интенсивность воспалительной реакции (отек, гиперемия, инфильтрация кожи).

3. Оценка тяжести местных кожных проявлений: толщина кожной складки и температура.

Результаты и обсуждение

Проведенные исследования (см. табл.) показали образование на 1-е сутки у животных контрольной группы изолированных красных пятен, а у некоторых - диффузной умеренной гиперемии, оцениваемой в среднем в 0,6 ± 0,1 балла. К 3-м суткам эксперимента наблюдали резкое покраснение, значительный отек, образование геморрагической корки, которые оценивали в 4,6 ± 0,2 балла. Состояние животных на 5-е сутки было почти таким же, как и на 3-и сутки, и оценивалось в 4,3 ± 0,3 балла. Такое состояние держалось до 7, 10 и 13-х суток наблюдения и оценивалось соответственно в 4,4 ± 0,4, 4 ± 0,4 и 4,0 ± 0,4 балла. Общая сумма баллов этой группы составила 21,9 (см. табл.).

В 1-е сутки эксперимента у 2-й группы животных на кожных покровах наблюдали изолированные красные пятна и некоторую диффузную умеренную гиперемию, оцениваемую в 0,6 ± 0,1 балла. К 3-м суткам наблюдались резкое покраснение и значительный отек, геморрагические корки и обширные язвы, оцениваемые в 4,2 ± 0,3 балла. На 5-е сутки на кожных покровах животных появились резкое покраснение и значительный отек, геморрагические корки и образование обширных язв, оцениваемые в 4,6 ± 0,3 балла. К 7-м суткам эксперимента отек остался, покраснение уменьшилось, отпала геморрагическая корка и началось восстановвление кожного покрова, которое оценивалось в 4,0 ± 0,2 балла. К 9-м суткам наблюдения у животных уменьшились покраснение и отек по сравнению с группой контроля, показатели тяжести воспалительных проявлений оценивались в 2,9 ± 0,2* балла (снижение по сравнению с показателями в контрольной группе было достоверным). На 11-е сутки эксперимента остались лишь изолированные красные пятна, диффузно-умеренная гиперемия и у некоторых животных - четкая гиперемия и отечность. Оценка тяжести воспалительных проявлений составила 1,9 ± 0,2* балла, общая сумма баллов составила 18,2 и Ind - 16,9 %.

В 1-е сутки эксперимента в 3-й группе животных измения кожных покровов были такими же, как и в предыдущих группах, и оценивались в 0,6 ± 0,1 балла. К 3-м суткам наблюдения возникали резкое покраснение, отек, геморрагические корки, у некоторых животных наблюдались обширные язвы. Степень тяжести кожных проявлений оценивалась в 4,6 ± 0,3 балла. На 5-е сутки эксперимента воспалительный процесс начал уменьшаться, степень тяжести кожных проявлений составила 4,0 ± 0 балла. К 7-м суткам эксперимента процесс воспаления продолжал достоверно уменьшаться по сравнению с контрольной группой, при этом степень тяжести кожных проявлений составила 3,2 ± 0,2* балла.

Изменение тяжести кожных процессов в баллах при лечении экспериментального кожного дерматита

Группа

(n = 6)

Тяжесть кожных процессов в баллах, сут исследования (M ± m)

Сумма баллов

Ind, %

1

3

5

7

9

11

1-я (контроль)

0,6 ± 0,1

4,6 ± 0,2

4,3 ± 0,3

4,4 ± 0,4

4 ± 0,4

4,0 ± 0,4

21,9

2-я - 1 % мазь суммы флавоноидов

0,6 ± 0,1

4,2 ± 0,3

4,6 ± 0,3

4,0 ± 0,2

2,9 ± 0,2*

1,9 ± 0,2*

18,2

16,9

3-я - 3 % мазь суммы флавоноидов

0,6 ± 0,1

4,6 ± 0,3

4,0 ± 0

3,2 ± 0,2*

2,5 ± 0,1*

1,5 ± 0,1*

16,4

25,1

4-я - 5 % мазь суммы флавоноидов

0,6 ± 0,1

4,6 ± 0,3

3,8 ± 0,1

2,8 ± 0,1*

1,5 ± 0,2*

0,36 ± 0,2*

13,6

37,9

5-я - Псило-Бальзам®

0,7 ± 0,1

4,8±0,2

5 ± 0

4,4 ± 0,2

3,2 ± 0,2*

2,3 ± 0,2*

20,4

6,84

6-я - мазь Целестодерм В®

0,7 ± 0,1

4,7±0,2

4,5 ± 0,2

3,2 ± 0,2*

2,4 ± 0,2*

1,5 ± 0,3*

17,0

22,4

Примечание. Здесь и по всему тексту: * - р ≤ 0,005 достоверно по сравнению с контрольной группой.

С этого дня эксперимента показатели продолжали достоверно уменьшаться по сравнению с групой контроля соответственно (9-й день - 2,5 ± 0,1* балла, 11-день -1,5 ± 0,1* балла). Общая сумма баллов была равна 16,4, а Ind составил 25,1 %.

У животных 4-й группы в 1-е сутки эксперимента на кожных покровах наблюдались изолированные красные пятна и некоторая диффузная умеренная гиперемия, которая оценивалась в 0,6 ± 0,1 балла. К 3-м суткам эксперимента наблюдали отек, геморрагические корки и образование обширных язв, которые оценивали в 4,6 ± 0,3 балла. К 5-м суткам исчезли геморрагические корки, остались только гиперемия, отек и резкое покраснение, они оценивались в 3,8 ± 0,1* балла. С этих суток показатели достоверно уменьщались по сравнению с группой контроля. К 7-м суткам у 1 животного была отмечена умеренная гиперемия, а у 5 - четко выраженные гиперемия и отечность, которые оценивали в 2,8 ± 0,1* балла. К 9-м суткам у 1 животного не было кожной реакции, у 1 животного наблюдались изолированные красные пятна, а у 4 животных - умеренная гиперемия, оцениваемые в среднем в 1,5 ± 0,2* балла.

К 11-м суткам эксперимента у 4 животных не обнаруживалось реакции кожных покровов, которые полностью восстановились, у 1 животного наблюдались изолированные красные пятна и у 1 - диффузная гиперемия, степень тяжести кожных проявлений составила 0,36 ± 0,2* балла. Общая сумма баллов была 13,6, а Ind составил 37,9 %.

В 5-й группе животных в 1-е сутки эксперимента наблюдались изолированные красные пятна и гиперемия, степень тяжести кожных проявлений составила 0,7 ± 0,1 балла. На 3-и сутки развилась четкая гиперемия и отечность, резкое покраснение, отек, геморрагические корки и обширных язвы, оцениваемые в 4,8 ± 0,2 балла. К 5-м суткам наблюдения у всех животных отмечались отек, геморрагические корки и обширные язвы, оценка которых составила 5,0 ± 0 балла. К 7-м суткам начало уменьшаться воспаление кожных покровов, но наблюдались умеренная гиперемия, отек, геморрагические корки и маленькие язвы, степень тяжести кожных проявлений составила 4,4 ± 0,2 балла.

К 9-м суткам воспалительный процесс продолжал уменьшаться, но были выявлены резкая гиперемия, отек, геморрагические корки, степень тяжести кожных проявлений составила 3,2 ± 0,2* балла. С этих суток показатели данной группы продолжали достоверно уменьшаться по сравнению с группой контроля, степень тяжести кожных проявлений составила 2,5 ± 0,1* балла. К 11-м суткам наблюдения у 2 животных сохранялась диффузная гиперемия, у 2 - четкая гиперемия и отек, у 2 - резкое покраснение и значительный отек, показатели степени тяжести кожных проявлений оценивали в 2,3 ± 0,2* балла. Общая сумма баллов составила 20,4, а Ind - 6,84 %.

В кожных покровах в 6-й группе животных в 1-е сутки наблюдения, как и в других группах животных, обнаруживались изолированные красные пятна и гиперемия, степень тяжести кожных проявлений была оценена в 0,7 ± 0,1 балла. К 3-м суткам выявлялись четкая гиперемия и отечность, резкое покраснение, отек, геморрагические корки и обширные язвы, оцениваемые в 4,7 ± 0,2 балла. К 5-м суткам эксперимента состояние было почти аналогичным наблюдаемому на 3-и сутки, сумма балов составила 4,5 ± 0,2. К 7-м суткам воспаление начало уменьшаться, на кожных покровах сохранялись покраснение, отек, геморрагические корки, степень тяжести кожных проявлений составляла 3,2 ± 0,2* балла. С этих суток в этой группе показатели были достоверно снижены по сравнению с группой контроля. На 9-е сутки наблюдались покраснение, отек продолжал уменьшаться, степень тяжести кожных проявлений была оценена в 2,4 ± 0,2* балла. На 11-е сутки у 1 животного не обнаружено реакции кожных покровов, у 3 наблюдалась диффузная гиперемия, у 2 - четкая гиперемия и отечность, оцениваемые в 1,5 ± 0,3* балла. Общая сумма баллов составила 17,0, а Ind - 22,4%.

Как показали результаты экспериментального исследования, на кожных покровах в 1-й группе (группа контроля) в 1-е сутки наблюдались легкие симптомы АКД, к 3-м суткам развилось резкое повреждение кожных покровов, а к 5-м суткам появилось небольшое улучшение, но это состояние сохранялось до конца эксперимента. В 1-е сутки во 2-й группе животных отмечены легкие симптомы АКД, а на 3-и и 5-е сутки эксперимента развивалось резкое повреждение кожных покровов, к 7-м суткам наблюдалось небольшое улучшение, только с 9-х суток показатели воспаления начали достоверно уменьшаться по сравнению с контрольной группой, Ind был равен 16,9 %. В 1-е сутки в 3-й группе животных, как и в других экспериментальных группах, отмечались легкие симптомы АКД, к 3-м суткам развивались резкие кожные проявления, к 5-м суткам симптомы повреждения уменьшались, а с 7-х суток показатели кожных проявлений стали достоверно улучшаться по сравнению с группой контроля, Ind составил 25,1 %. В 4-й группе животных в 1-е сутки выявлены легкие симптомы АКД, с 3-х суток - резкое ухудшение кожных проявлений, а с 5-х суток они стали достоверно уменьшаться, Ind составил 37,9 %.

Выводы

Проведенные исследования густого экстракта суммы флавоноидов в виде мази на местной основе позволили сделать следующие выводы.

1. Изученные 1, 3 и 5 % мази густого экстракта суммы флавоноидов для наружного применения основе обладают выраженным действием на экспериментальный контактный дерматит у морских свинок.

2. Наибольшим терапевтическим эффектом обладает 5 % мазь густого экстракта суммы флавоноидов для наружного применения при аллергическом контактном дерматите. При этом индекс уменьшения тяжести кожных проявлений (Ind) был наибольшим по сравнению с другими исследуемыми группами - 37,9 %.

Литература

1. Прошутинская Д.В., Чикин В.В., Знаменская Л.Ф., Монахов К.Н. Заславский Д.В., Менеева А.А. Федеральные клинические рекомендации по ведению больных атопическим дерматитом. Российское общество дерматовенерологов и косметологов. Москва, 2015.

2. Kalsy J., Puri K.J. Erythnoderma in children: clinico-etiological study from Punja Indian. J. Pediatr. Dermatol. 2013; 14 (1): 9-12.

3. Суяров А.А., Жапаров О.К., Хатамов Х.М., Батырбеков А.А. Перспективы использования "Аллергодаф", полученного из череды трехраздельной, в качестве противоаллергического средство. Методические рекомендации. Ташкент, 2018.

4. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Хабриев Р.У. (ред.). Москва, 2005: 832 с.

5. Филатова А.В., Выпова Н.Л., Джурабаев Д.Т., Зиявутдинов Ж.Ф., Тураев А.С. Исследование специфической активности противоаллергенного препарата наружного действия "Флудигель". Фармацевтический журнал Узбекистана. 2016; 2: 40-4.

6. Фозилжонова М.Ш., Пулатова Ф.О., Тожиева О.Ж., Комилов Х.М. Получение гидрофобной основы для производства мазей из местного сырья. Инфекция, иммунитет и фармакология. 2017; 3: 212-5.

7. Залкан П.М., Иевлиева Е.А. Влияние синтетических моющих вешеств на реактивность кожи у морских свинок. В кн.: Актуальные вопросы профессиональной дерматологии. Москва, 1965: 106-13.


Журналы «ГЭОТАР-Медиа»