Изменение экспрессии Toll-подобных рецепторов, цитокинов и хемокинов в клетках слизистой оболочки ротоглотки у детей при COVID-19

Резюме

Введение. COVID-19 - тяжелое респираторное заболевание, вызванное р-корона-вирусом SARS-CoV-2, которое характеризуется иммуноопосредованным повреждением тканей и органов. Доказано, что у детей заболевание протекает относительно легко по сравнению со взрослыми и механизмы врожденного иммунитета играют в этом важную роль.

Цель исследования - изучение экспрессии генов, кодирующих рецепторы врожденного иммунитета TLR4, TLR7, а также анализ изменения экспрессии провоспалительных цитокинов: интерлейкина(ИЛ)-1β, фактора некроза опухолей (ФНО)α и интерферона(ИФН)-α - на уровне гена и белка у детей с COVID-19 в зависимости от тяжести течения заболевания.

Материал и методы. В исследование включены 55 детей с подтвержденным диагнозом COVID-19. Группы пациентов формировали на основании жалоб и клинических проявлений. 1-я группа детей с бессимптомным течением включала 9 человек. Во 2-ю группу входили дети с легкой формой течения - 36 человек, в 3-ю группу - со среднетяжелой формой течения (10 человек). Группу сравнения составили 25 здоровых детей. Из полученного материала выделяли РНК и методом полимеразной цепной реакции в реальном времени определяли уровень экспрессии генов, а также методом мультиплексного иммунофлуоресцентного анализа определяли уровень содержания цитокинов в надосадочной жидкости.

Результаты. Показано статистически достоверное увеличение экспрессии генов рецепторов врожденного иммунитета (TLR4, TLR7) в клетках слизистой оболочки ротоглотки у детей с COVID-19. Экспрессия TLR4 и TLR7 была, соответственно, в 2,6 и 7,2 раза выше у детей со среднетяжелым течением по сравнению с группой здоровых. Вместе с этим выявлено повышение уровня экспрессии провоспалительных цитокинов (ИЛ-1β, ФНОα, ИФН-α) на уровне гена и белка, ассоциированное с тяжестью течения COVID-19. Также было показано увеличение продукции хемокинов, которое коррелировало с тяжестью течения заболевания.

Обсуждение. Увеличение уровня экспрессии генов TLR4 и TLR7 клетками слизистой ротоглотки у детей с COVID-19 указывает на их роль в патогенезе заболевания. Основная функция TLR4 и TLR7 заключается в распознавании патоген-ассоциированных молекулярных паттернов, а именно гликопротеина шипа, участвующего в проникновении вируса в клетки-мишени и одноцепочечной РНК вируса. Активация TLR4 и TLR7 приводит к Toll-индуцируемой экспрессии генов провоспалительных цитокинов (ИЛ-1β, ФНОα, ИФН-α) и хемокинов, достоверное увеличение экспрессии генов и продукции белка которых были нами продемонстрированы. Это играет огромную роль в развитии воспалительной реакции и говорит об изменениях во врожденном иммунитете слизистых оболочек при COVID-19.

Заключение. Полученные нами данные могут быть использованы для дальнейшего изучения и определения молекулярно-генетических маркеров, ассоциированных с COVID-19 у детей, что позволит в будущем подобрать оптимальный вариант терапии.

Ключевые слова:врожденный иммунитет; COVID-19; Toll-подобные рецепторы; провоспалительные цитокины; хемокины

Для цитирования: Ганковская Л.В., Зинина Е.В., Ганковский В.А., Семушкин А.Р. Изменение экспрессии Toll-подобных рецепторов, цитокинов и хемокинов в клетках слизистой оболочки ротоглотки у детей при COVID-19. Иммунология. 2021; 42 (3): 222-231. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-3-222-231

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствие конфликта интересов.

Введение

COVID-19 - это инфекционное заболевание, вызываемое оболочечным одноцепочечным (+) РНК-вирусом, относящимся к семейству β-коронавирусов (SARS-CoV-2). В первую очередь вирус поражает дыхательную систему, вызывая гриппоподобное заболевание, а в более тяжелых случаях может привести к развитию острого респираторного дистресс-синдрома, сепсиса и полиорганной недостаточности [1]. Проникновение вируса в клетки человека опосредуется взаимодействием гликопротеина шипа (S-белок) вируса с ангиотензин-превращающим ферментом-2 (АСЕ2), который является функциональным рецептором SARS-CoV-2 [2].

Изучение механизмов иммунопатогенеза заболевания является актуальной задачей. Ведущую роль в развитии воспалительной реакции играют механизмы врожденного иммунитета. При помощи паттерн-распознающих рецепторов врожденного иммунитета (PRR -pattern recognition receptors), особенно Toll-подобных рецепторов (TLR), происходит распознавание патоген-ассоциированных молекулярных паттернов (PAMP - pathogen-associated molecular pattern) вируса, а также эндогенных сигналов, связанных с повреждением (DAMP - damage-associated molecular pattern) [3]. При распознавании SARS-CoV-2 наибольшую роль имеют TLR4 и TLR7. Лигандом для TLR4 в условиях инфекции, вызванной SARS-CoV-2, является гликопротеин шипа вируса (S-белок). Y. Zhao и соавт. с помощью метода поверхностного плазмонного резонанса было выявлено, что S-белок обладает большим сродством к TLR4 [4]. Белки теплого шока, фибриноген и фосфолипиды, высвобождаемые во время повреждения клеток вирусом, также являются лигандами для TLR4. Активация TLR4 приводит к повышению экспрессии АСЕ2, что способствует проникновению вируса, а также индуцирует экспрессию генов интерферонов (ИФН) I типа (ИФН-α и ИФН-β). ИФН I типа представляют собой цитокины, обеспечивающие 1-ю линию защиты от вирусных инфекций. Помимо ИФН, происходит повышение экспрессии хемокинов, благодаря которым происходит привлечение клеток в очаг воспаления [5, 6].

TLR7 расположен на мембране эндосомы и участвует в распознавании одноцепочечной РНК SARS-CoV-2 после его проникновения в клетку-мишень. Активация TLR7 в большой степени индуцирует продукцию интерлейкина(ИЛ)-1β, фактора некроза опухолей (ФНО) α, моноцитарного хемоаттрактантного белка (MCP)-1. Повышение экспрессии TLR7 при вирусных инфекциях может вызвать более высокий провоспалительный ответ у пациентов и привести к острому повреждению легких [7].

Было выявлено, что у детей наблюдаются более низкие показатели заражения SARS-CoV-2 по сравнению со взрослыми. Также у детей в большинстве случаев заболевание протекает в более легкой форме [8]. К настоящему времени не проведено исследований, позволяющих оценить врожденный иммунитет в слизистой ротоглотки у детей с COVID-19 в зависимости от тяжести течения заболевания. Исследование молекулярных механизмов функционирования системы врожденного иммунитета на уровне слизистых оболочек позволит выявить маркеры тяжелого течения заболевания и предложить оптимальный вариант терапии.

В связи с вышесказанным цели данной работы - изучение экспрессии генов, кодирующих рецепторы врожденного иммунитета TLR4, TLR7, а также анализ изменения экспрессии провоспалительных цитокинов - ИЛ-1β, ФНОα и ИФН-α - на уровне гена и белка у детей с COVID-19 в зависимости от тяжести течения заболевания.

Материал и методы

В исследование были включены 55 детей с подтвержденным диагнозом COVID-19 (средний возраст -9 ± 5 лет). Группы пациентов формировали на основании жалоб и клинических проявлений. 1-я группа включала 9 детей с бессимптомным течение COVID-19, у данных детей отсутствовали клинические признаки заболевания при положительном результате лабораторного исследования на наличие РНК SARS-CoV-2. Большинство обследованных детей были с легкой формой течения, которая характеризуется легкими симптомами интоксикации (лихорадка < 38,5 °С, слабость и боль в горле). Они были включены во 2-ю группу (36 человек). 3-я группа состояла из детей со среднетяжелой формой течения заболевания (10 человек). У них наблюдались лихорадка > 38,5 °С и бронхит. Группу сравнения составили 25 здоровых детей (средний возраст 10 ± 5 лет). Набор материала осуществлялся на базе Государственного бюджетного учреждения здравоохранения "Городская поликлиника № 212 Департамента здравоохранения города Москвы" филиал № 5 (заведующий филиалом № 5 - Е.Л. Савостьянова).

Критерии включения: положительный результат лабораторного исследования на наличие РНК SARS-CoV-2; длительность заболевания 3 дня; письменное согласие пациентов на участие в исследовании.

Критерии исключения: длительность заболевания более 3 дней.

Исследование проводилось в соответствии с Хельсинской декларацией Всемирной медицинской ассоциации "Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека" (WMA Declaration of Helsinki - Ethical Principles for Medical Research Involving Human Subjects, 2013). В установленном порядке было получено информированное согласие на участие в исследовании в соответствии с протоколом, одобренным локальным этическим комитетом ФГАОУ ВО "РНИМУ им. Н.И. Пирогова" Минздрава России.

В ходе работы определяли уровень экспрессии генов рецепторов врожденного иммунитета (TLR4 и TLR7), генов провоспалительных цитокинов (IL1B, TNFA, IFNA) в клетках слизистой оболочки ротоглотки у детей при COVID-19 с разной тяжестью течения. Также было изучено содержание ИЛ-1β, ФНОα, ИФН-α и хемокинов в надосадочной жидкости. Взятие материала производили путем осторожного соскоба со слизистой оболочки ротоглотки стерильными зондами с тампоном типа А2. После взятия один зонд погружали в лизирующий буфер, а другой зонд - в физиологический раствор. Взятие материала зондом обеспечивает содержание в образце эпителиальных клеток [9].

Из полученных образцов, находящихся в лизирующем буфере, выделяли РНК с использованием набора для выделения ДНК/РНК методом аффинной сорбции на частицах силикагеля "Рибосорб" (ИнтерЛабСервис, Россия) по протоколу производителя. Полученную РНК хранили при -70 °С. Далее с помощью набора для проведения реакции обратной транскрипции (ОТ) (Синтол, Россия) проводили реакцию ОТ для получения кДНК на основе выделенной РНК. После этого кДНК использовали для постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (ПЦР-РВ). Реакцию проводили с применением набора реагентов для ПЦР-РВ в присутствие SYBR Green I (Синтол, Россия) [10]. В качестве эндогенного контроля был использован ген "домашнего хозяйства" (housekeeping gene), который представляет собой конститутивно экспрессируемый ген (ACTB - ген, кодирующий β-актин) [11]. ПЦР-РВ проводили с использованием праймеров, приведенных в табл. 1.

Таблица 1. Панель праймеров для проведения полимеразной цепной реакции в реальном времени

Экспрессию генов оценивали методом измерений по ΔΔСt, получая результаты в виде относительных единиц, показывающих во сколько раз больше или меньше экспрессия исследуемого гена в образце по отношению к гену домашнего хозяйства (ACTB). Расчет результатов производился по формуле:

R=2-[ΔСt(исследуемого гена)-ΔСt(гена ACTB)],

где С - порог насыщения реакции (cycle threshold), R - относительная экспрессия.

В образцах, находящихся в физиологическом растворе, определяли содержание цитокинов методом мультиплексного иммунофлуоресцентного анализа на панели Bio-Plex Pro Human Cytokine Screening 48-plex (Bio-Rad, США) в соответствии с протоколом производителя. При помощи устройства Bio-Plex MAGPIX Multiplex Reader получали данные, представленные в виде концентрации исследуемого аналита (пг/мл) [12]. Для нормализации результатов мультиплексного иммунофлуоресцентного анализа содержание цитокинов рассчитывали в пересчете на мг общего белка. Концентрация цитокинов представлена в пг/мг общего белка.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием программного обеспечения Microsoft Excel 2016 и программного пакета GraphPad Prism 8 (США). В связи с разным количеством значений в группах и ненормальным распределением были выбраны непараметрические методы анализа. Данные на графиках представлены с указанием медианы, 10-90-го процентилей и крайних значений.

Результаты

На первом этапе были исследованы уровни экспрессии генов TLR4 и TLR7 у детей с COVID-19 с разной тяжестью течения заболевания и проведено сравнение с соответствующим показателем в соскобах со слизистой ротоглотки у детей группы сравнения. Выбор генов данных рецепторов связан с тем, что при инфекции, вызванной SARS-CoV-2, TLR4 и TLR7 обладают наибольшим сродством к РАМР вируса (спайковый гликопротеин и одноцепочечная РНК вируса, соответственно) [13]. Взаимодействие данных рецепторов с этими лигандами индуцирует экспрессию провоспалительных цитокинов и хемокинов.

Было выявлено, что экспрессия генов TLR4 и TLR7 в клетках слизистой ротоглотки у детей со среднетяжелым течением COVID-19 значимо выше, чем в клетках здоровых детей группы сравнения в 2,6 = 0,0053) и в 7,2 раза = 0,0253) соответственно. Также был проведен сравнительный анализ экспрессии генов TLR4 и TLR7 в клетках слизистой ротоглотки у детей с легким течением заболевания и у детей группы сравнения. В клетках слизистой ротоглотки у детей с легким течением отмечается достоверное повышение экспрессии гена TLR7 в 3,4 раза (р = 0,0122). Также отмечается увеличение в 2 раза экспрессии гена TLR7 у детей с бессимптомным течением инфекции. При этом не выявлено достоверного увеличения экспрессии гена TLR4 у детей с бессимптомным и легким течением = 0,0568), что говорит об отсутствии различий между группами (рис. 1).

Рис. 1. Экспрессия генов TLR4 и TLR7 в клетках слизистой оболочки ротоглотки детей с COVID-19 c разной тяжестью течения и группы сравнения

Активация TLRs индуцирует выработку провоспалительных цитокинов, поэтому далее мы изучали экспрессию провоспалительных цитокинов ИЛ-1β, ФНОα, ИФН-α на уровне гена и белка у детей с COVID-19 с разной тяжестью течения (среднетяжелое, легкое и бессимптомное). Мы обнаружили достоверное повышение уровня экспрессии гена IL1B в клетках слизистой ротоглотки у детей со среднетяжелым течением заболевания в 6,5 раз = 0,05) и в 4,2 раза у детей с легкой формой течения = 0,001). Также наблюдалось достоверное повышение содержания ИЛ-1β у детей со среднетяжелым течением COVID-19 в 4,7 раз = 0,007) по сравнению со здоровыми детьми. Его содержание составило 15,77 пг/мг общего белка (рис. 2).

Рис. 2. Экспрессия ИЛ-1β на уровне гена (А) и белка в смывах со слизистой оболочки ротоглотки (Б) детей с COVID-19 разной степени тяжести

Кроме того, в 2,3 раза увеличивалась экспрессия гена IFNA в клетках слизистой ротоглотки у детей со среднетяжелым течением по отношению к группе сравнения (р=0,045). При исследовании уровня продукции ИФН-а у детей со среднетяжелым течением было замечено увеличение продукции цитокина в 1,4 раза (р=0,0059) (рис. 3).

Рис. 3. Экспрессия ИФН-α на уровне гена (А) и белка в смывах со слизистой оболочки ротоглотки (Б) у детей с COVID-19 c разной тяжестью течения

Далее мы исследовали уровень экспрессии гена TNFA в клетках слизистой ротоглотки у детей с COVID-19. Так, у пациентов со среднетяжелым течением наблюдалось повышение уровня экспрессии гена TNFA в 5,2 раза = 0,0343), а у детей с легкой формой - в 4,3 раза = 0,0115) по отношению к группе сравнения. Также было выявлено повышение уровня продукции ФНОα в 1,2 раза = 0,009) у детей со средней тяжестью COVID-19 относительно группы сравнения. Его содержание составило 20,34 пг/мг общего белка (рис. 4).

Рис. 4. Экспрессия ФНОα на уровне гена (А) и белка в смывах со слизистой оболочки ротоглотки (Б) у детей с COVID-19 c разной тяжестью течения

У пациентов уровень экспрессии генов IFNA и TNFA более выражен по сравнению с синтезом этих молекул. Данный результат можно объяснить тем, что при действии SARS-CoV-2 на клетки могут нарушаться процессы трансляции белка. Недавними исследованиями было показано, что гены вируса, кодирующие неструктурные белки (NSP1-NSP16), способны подавлять сплайсинг мРНК в клетках, что может привести к ингибированию трансляции [14].

Также было обнаружено, что уровень экспрессии провоспалительных цитокинов у детей с бессимптомным течением практически не изменялся по сравнению со здоровыми детьми. Различия были статистически недостоверными > 0,05). Сравнение уровня цитокинов в смывах со слизистой оболочки ротоглотки у детей с легким течением заболевания и здоровой группы не выявило статистически значимых различий.

Известно, что активация TLR4 и TLR7 запускает также продукцию хемокинов, в том числе эотаксина (CCL11), MCP-1, фактора стромального происхождения-1 (SDF-1 - хемокин подсемейства СХС) и фактора, ингибирующего миграцию макрофагов (MIF), что приводит к привлечению клеток иммунной системы в очаг воспаления [15]. Поэтому целесообразно было оценить содержание хемокинов в смывах со слизистой оболочки ротоглотки у детей с COVID-19 с различной тяжестью течения заболевания и у здоровых детей.

При исследовании концентрации хемокинов было выявлено достоверное повышение их содержания в группе больных детей со среднетяжелой степенью COVID-19 относительно группы здоровых детей. При сравнении концентраций хемокинов внутри выборки больных COVID-19 прослеживается тенденция к повышению их концентрации с ростом степени тяжести заболевания. Так, нами обнаружено увеличение концентрации эотаксина в 1,5 раз (р = 0,0028), МСР-1 - в 1,3 раза = 0,0380), SDF-1a - в 1,8 раз = 0,0349) и MIF - в 5 раз = 0,0071) у детей со среднетяжелым течением по сравнению со здоровыми детьми. Также определено, что содержание MIF было наибольшим относительно других хемокинов и составило 6741,57 пг/мг общего белка (рис. 5). Помимо этого, нами проанализирована продукция МСР-3, макрофагального воспалительного белка-1а (MIP-1a) и ИЛ-8, который играет ключевую роль в привлечении нейтрофилов в очаг воспаления. При различных формах течения заболевания у детей продукция данных хемокинов не изменялась и определялась в следовых количествах (< 2 пг/мг общего белка).

Рис. 5. Содержание хемокинов (CCL11, MCP-1, SDF-1α, MIF) в смывах со слизистой ротоглотки у детей с COVID-19 разной степени тяжести

Обсуждение

Система врожденного иммунитета является 1-й линией защиты от вирусной инфекции, и характер иммунного ответа может существенно влиять на течение заболевания [16]. Известно, что у детей COVID-19 протекает более в легкой форме по сравнению со взрослыми. Существует несколько причин такого явления. Показано, что у детей снижена экспрессия гена АСЕ2 в эпителиальных клетках слизистых оболочек, это приводит к замедлению проникновения вируса в клетки-мишени [17]. Также для детей характерен более ранний ответ на патоген, в частности за счет выработки ИФН I типа в очаге воспаления, которые оказывают противовирусную защиту путем снижения экспрессии вирусной мРНК [18]. Однако до настоящего времени не проведено исследований, позволяющих оценить функционирование системы врожденного иммунитета локально, в месте проникновения вируса. Поэтому мы исследовали рецепторы врожденного иммунитета, провоспалительные цитокины и хемокины в слизистой оболочке ротоглотки у детей с заболеванием разной степени тяжести.

Увеличение уровня экспрессии генов рецепторов врожденного иммунитета доказывает их огромную роль в патогенезе коронавирусного заболевания. При активации TLR4, расположенного на поверхности клетки, и TLR7, расположенного на эндосомах, происходит активация адаптерной молекулы МуD88, которая в свою очередь приводит к активации ядерных факторов транскрипции, таких, как NF-kB (Nuclear factor кВ) и AP-1 (Activator protein-1), которые обеспечивают выработку провоспалительных цитокинов и хемокинов [19]. Повышение уровня Toll-индуцированной продукции провоспалительных цитокинов, в особенности ИЛ-1β, ФНОα, ИФН-α, зависит от тяжести заболевания и может служить прогностическим критерием его развития и исхода [20, 21].

Помимо выработки провоспалительных цитокинов, активация рецепторов врожденного иммунитета, в большей степени TLR4, индуцирует экспрессию хемокинов, таких как МСР-1, SDF-1α, MIF. Кроме того, повышенная продукция ИЛ-1β и ФНОα также может индуцировать экспрессию хемокинов (CCL11, CCL8), связанных с вирусной инфекцией. Это ведет к привлечению клеток врожденного иммунитета в очаг воспаления [22, 23]. Недавно была показана роль MIF в воспалительной реакции - при инфицировании SARS-CoV-2 происходит привлечение макрофагов в очаг воспаления и значительное повышение секреции MIF эпителиальными клетками, который в свою очередь увеличивает секрецию ИЛ-1β и ФНОα, что приводит к более тяжелому течению инфекции, вплоть до развития острого респираторного дистресс-синдрома [24]. Нами также продемонстрировано значительное увеличение уровня MIF у детей при среднетяжелой форме течения COVID-19.

Также выявлена значимая роль SDF-1α в развитии повреждения клеток при инфицировании SARS-CoV-2. При повышении уровня ФНОα происходит активация продукции молекул адгезии и хемокинов, в значительной степени - SDF-1α. Благодаря этому увеличивается адгезия Т-лимфоцитов к эндотелиальным клеткам, что способствует повреждению сосудов микроциркуляторного русла слизистой оболочки ротоглотки у детей со среднетяжелым течением COVID-19 и приводит к длительному воспалению [25].

Было показано, что наибольшую роль в воспалении у детей играет ИЛ-1Р при незначительном увеличении уровня других провоспалительных цитокинов, именно поэтому у детей в очень редких случаях наблюдается развитие "цитокинового шторма", в отличие от взрослых [26]. Это позволяет предположить, что повышение уровня ИЛ-1β может быть предиктором развития клинических симптомов у детей.

Нами также выявлены незначительные изменения экспрессии и продукции провоспалительных цитокинов и хемокинов у детей с бессимптомным и легким течением. У детей с легким и бессимптомным течением наблюдается увеличение уровня ИФН-α и некоторых хемокинов (эотаксина и SDF-1α) относительно группы сравнения. Ранний интерфероновый ответ в инкубационный период SARS-CoV-2 может ограничить вирусную репликацию и способствовать бессимптомному течению заболевания [10].

Считается, что при инфицировании клеток SARS-CoV-2 наибольшую роль играют такие хемокины, как MIP-1α и ИЛ-8, увеличение содержания которых происходит при прогрессировании заболевания. Повышение уровня ИЛ-8 может даже использоваться в качестве биомаркера различных стадий заболевания [27]. При исследовании продукции этих хемокинов у детей с COVID-19 нами не замечено увеличения их содержания, что также может свидетельствовать о более легком течение заболевания у детей по сравнению со взрослыми.

Заключение

Проведенное нами исследование экспрессии цитокинов на уровне гена и белка в слизистой ротоглотки у детей с COVID-19 позволяет лучше понять роль врожденного иммунитета в патогенезе заболевания. Полученные данные объясняют механизм течения заболевания у детей с разной степенью тяжести, что может помочь в дальнейшей разработке эффективной терапии.

Вклад авторов

Концепция и дизайн исследования, руководство написанием статьи, редактирование - Ганковская Л.В.; составление карты обследования пациентов, их клиническая характеристика и анализ данных - Ганков-ский В. А.; сбор и обработка биологического материала -Семушкин А.Р.; отработка методики, статистическая обработка, написание текста - Зинина Е.В.

Литература

1. Гудима Г.О., Хаитов Р.М., Кудлай Д.А., Хаитов М.Р. Молекулярно-иммунологические аспекты диагностики, профилактики и лечения коронавирусной инфекции. Иммунология. 2021; 42 (3): 198-210. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-3-198-210

2. Brooke G.N., Prischi F. Structural and functional modelling of SARS-CoV-2 entry in animal models. Sci Rep. 2020; 10 (1): 15-7. DOI: 10.1038/s41598-020-72528-z

3. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Мешкова Р.Я. Клиническая иммунология и аллергология с основами общей иммунологии: учебник. Москва : ГЭОТАР-Медиа, 2011. 640 с.

4. Zhao Y., Kuang M., Li J., Zhu L., Jia Z., Guo X., Hu Y., Kong J., Yin H., Wang X. SARS-CoV-2 spike protein interacts with activates TLR4. Cell Research. 2021. DOI: 10.1038/s41422-021-00495-9

5. Aboudounya M.M., Heads R.J. COVID-19 and Toll-Like Receptor 4 (TLR4): SARS-CoV-2 May Bind and Activate TLR4 to Increase ACE2 Expression, Facilitating Entry and Causing Hyperin flammation. Mediators of Inflammation. 2021; 2021 (12): 1-18. DOI: 10.1155/2021/8874339

6. Gankovskaya L.V., Bykova V.P., Namasova-Baranova L.S., Karaulov A.V., Rahmanova I.V., Gankovskii V.A., Merkushova C.D., Svitich O.A. Innate immunity gene expression by epithelial cells of upper respiratory tract in children with adenoid hypertrophy. Auris Nasus Larynx. 2018; 45 (4): 753-9. DOI: 10.1016/j.anl.2017.11.011

7. Khanmohammadi S., Rezaei N. Role of Toll-like receptors in the pathogenesis of COVID-19. J Med Virol. 2021; 93 (5): 2735-9. DOI: 10.1002/jmv.26826

8. Yasuhara J., Kuno T., Takagi H., Sumitomo N. Clinical characteristics of COVID-19 in children: A systematic review. Pediatric Pulmonology. 2020; 55 (10): 2565-75. DOI: 10.1002/ppul.24991

9. Страмбовская Н.Н., Дутова А.А., Дагбаева С.Д. Взятие, хранение, транспортировка клинического материала для ПЦР-диагностики: методические указания. РИЦ ГБОУ ВПО ЧГМА, 2013. 21 с.

10. Меркушова Е.Д. Гиперэкспрессия генов инфламмасом-ного комплекса NLRP1 и цитокинов ИЛ-1Р, ИЛ-18 в биоптатах пораженной и непораженной кожи больных с псориазом. Иммунология. 2021; 42 (1): 21-8. DOI: 10.33029/0206-4952-2021-42-1-21-28

11. Ребриков Д.В. ПЦР "в реальном времени". Москва : Бином. Лаборатория знаний, 2009. 223 с. ISbM: 978-5-00101-085-2

12. Bio-Rad: Bio-Plex Pro Human Cytokine Assays. Instruction Manual. 23 c.

13. Brandao S.C.S., Ramos J.O.X., Dompieri L.T., Godoi E.T.A.M., Figueiredo J.L., Sarinho E.S.C., Chelvanambi S., Aikawa M. Is Toll-like receptor 4 involved in the severity of COVID-19 pathology in patients with cardiometabolic comorbidities? Cytokine & Growth Factor Reviews. 2020; 58: 102-10. DOI: 10.1016/j.cytogfr. 2020.09.002

14. Banerjee A.K., Blanco M.R., Bruce E.A, Honson D.D, Chen L.M., Chow A., Bhat P., Ollikainen M., Quinodoz S.A., Loney C., Thai J., Miller Z.D., Lin A.E., Schmidt M.M., Stewart D.G., Goldfab D., Lorenzo G., Rihn S.J. Guttman M. SARS-CoV-2 Disrupts Splicing, Translation, and Protein Trafficking to Suppress Host Defenses. Cell. 2020; 183 (5): 1325 -39. DOI: 10.1016/j.cell.2020.10.004

15. Gu Q., Shi Q., Yang H. The Role of TLR and Chemokine in Wear Particle-Induced Aseptic Loosening. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012; 1-9. DOI: 10.1155/2012/596870

16. Пащенков М.В., Хаитов М.Р. Иммунный ответ против эпидемических коронавирусов. Иммунология. 2020; 41 (1): 5-18 DOI: 10.33029/0206-4952-2020-41-1-5-18

17. Buonsenso D., Sali M., Pata D., De Rose C., Sanguinetti M., Valentini P., Delogu G. Children and COVID-19: Microbiological and immunological insights. Pediatric Pulmonology. 2020; 55 (10): 254755. DOI: 10.1002/ppul.24978

18. Fialkowski A., Gernez Y., Arya P., Weinacht K., Kinane T.B., Yonker L. Insight into the pediatric and adult dichotomy of COVID-19: Age-related differences in the immune response to SARS-CoV-2 infection. Pediatric Pulmonology. 2020; 55 (10): 2556-64. DOI: 10.1002/ppul.24981

19. Cuevas A.M., Clark J.M., Potter J.J. Increased TLR/MyD88 signaling in patients with obesity: is there a link to COVID-19 disease severity? Int J Obes. 2021; 26: 1-3. DOI: 10.1038/s41366-021-00768-8

20. Sherwani S., Khan M.W.A. Cytokine Response in SARS-CoV-2 Infection in the Elderly. Journal of Inflammation Research. 2020; 13: 737-747. DOI: 10.2147/JIR.S276091

21. Болдырева М.Н. Вирус SARS-CoV-2 и другие эпидемические коронавирусы: патогенетические и генетические факторы развития инфекций. Иммунология. 2020; 41 (3): 197-205. DOI: 10.33029/0206-4952-2020-41-3-197-205

22. Schaefer T.M., Desouza K., Fahey J.V., Beagley K.W., Wira C.R.. Toll-like receptor (TLR) expression and TLR-medi-ated cytokine/chemokine production by human uterine epithelial cells. Immunology. 2004; 112 (3): 428-36. DOI: 10.1111/j.1365-2567.2004.01898.x

23. Khalil B.A., Elemam N.M., Maghazachi A.A. Chemokines and chemokine receptors during COVID-19 infection. Computational and Structural Biotechnology Journal. 2021; 19: 976-988. DOI: 10.1016/j.csbj.2021.01.034

24. Lai K.N., Leung J.C.K., Metz C.N., Lai F.M., Bucala R., Lan H.Y. Role for macrophage migration inhibitory factor in acute respiratory distress syndrome. J. Pathol. 2003; 199 (4): 496-508. DOI: 10.1002/path.1291

25. Ackermann M., Mentzer S.J., Kolb M., Jonigk D. Inflammation and intussusceptive angiogenesis in COVID-19 everything in and out of flow. European Respiratory journal. 2020; 56 (5). DOI: 10.1183/13993003.03147-2020

26. Wong L.S.Y, Loo E.X.L., Kang A.Y.H., Lau H.X., Tambyah P.A., Tham E.H. Age-Related Differences in Immunological Responses to SARS-CoV-2. The Journal of Allergy and Clinical Immunology: In Practice. 2020; 8 (10): 3251-8. DOI: 10.1016/j.jaip.2020.08.026

27. Li L., Li J., Gao M., Fan H., Wang Y., Xu X., Chen C., Liu J., Kim J., Aliyari R., Zhang J., Jin Y., Li X., Ma F., Shi M., Cheng G., Yang H. Interleukin-8 as a Biomarker for Disease Prognosis of Coronavirus Disease-2019 Patients. Frontiers in Immunology. 2021; 11: 602395. DOI: 10.3389/fimmu.2020.602395

Главный редактор
ГЛАВНЫЙ РЕДАКТОР
Хаитов Рахим Мусаевич
Академик РАН, доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки Российской Федерации, научный руководитель ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России, главный аллерголог-иммунолог Минздрава России
РОСМЕДОБР 2021
Вскрытие
Медицина сегодня
Пост-релиз "Молекулярная диагностика"

Молекулярная диагностика на страже "биопорядка": как современные технологии позволяют выжить в век эпидемий Новые технологии молекулярной диагностики в эпоху COVID-19/пандемий Обеспечение массового экспресс-тестирования населения - приоритетная задача, которая поможет...

"Муковисцидоз: из детства во взрослую жизнь"

Всероссийская школа по Муковисцидозу с международным участием "Муковисцидоз: из детства во взрослую жизнь" С 24 по 25 ноября 2021 года профессионалы в области педиатрии, терапии, пульмонологии, гастроэнтерологии, эндокринологии, генетики, диетологии, микробиологии,...

Амбулаторный прием 24 ноября.

Коморбидность - бич современного общества и головная боль для каждого терапевта. Как минимизировать комбинации препаратов и, как следствие, побочных эффектов у больных с сочетанной патологией? Именно этот злободневный вопрос мы задали ведущим экспертам российского...


Журналы «ГЭОТАР-Медиа»