NMDA-рецепторы регулируют гены ключевых иммунных функций в лимфоцитах больных рассеянным склерозом

Резюме

Рассеянный склероз (РС) - аутоиммунное демиелинизирующее воспалительное заболевание центральной нервной системы. Помимо аутоиммунных механизмов, значительная роль в разрушении миелина, гибели нейронов и олигодендроцитов отводится нейромедиатору глутамату. Показано, что глутамат, продуцируемый активированными макрофагами и микроглией, посредством метабо- и ионотропных рецепторов запускает эксайтотоксические программы, что, как полагают, вносит вклад в формирование и поддержание нейродегенерации при РС. В последнее время стали появляться данные о том, что глутамат может выступать в роли иммуномодулятора, участвуя в контроле функций инфильтрованных в очаг воспаления Т-клеток. Кроме того, иммуномодуляция может осуществляться на уровне периферических Т-лимфоцитов при связывании глутамата с ионотропными рецепторами, в частности NMDA-подтипа. С целью установления роли NMDA-рецепторов в регуляции функций иммунокомпетентных клеток в данной работе проведен анализ экспрессионного профиля мононуклеаров, полученных из периферической крови пациентов с РС на фоне блокады NMDA-рецепторов с использованием коммерческого набора Human Signal Transduction Pathway Finder PCR Array. Показано, что действие антагониста NMDA-рецепторов (+)-МК801 в иммунных клетках, полученных от больных РС, приводит к изменению экспрессии генов, которые объединяются в 3 тесно взаимосвязанные и перекрывающиеся кластера: апоптоз, фосфорилирование, система цитокинов и хемокинов. Полученные данные позволяют предположить, что NMDA-рецепторы глутамата на уровне транс-криптома могут участвовать в модуляции ключевых функций мононуклеаров, а также в регуляции процессов хемотаксиса иммунных клеток у больных РС.

Ключевые слова:рассеянный склероз; NMDA-рецепторы; анализ транскриптома; мононуклеары периферической крови

Статья поступила 19.04.2018. Принята в печать 16.05.2018.

Для цитирования: Кузьмина УШ., Зайнуллина Л.Ф., Садовников С.В., Вахитов В.А., Бахтиярова К.З., Вахитова Ю.В. NMDA-рецепторы регулируют гены ключевых иммунных функций в лимфоцитах больных рассеянным склерозом. Иммунология. 2019; 40 (1): 27-34. doi: doi: 10.24411/0206-4952-2019-11003.

Финансирование. Работа выполнена в рамках госзадания Института биохимии и генетики - обособленного структурного подразделения ФГБНУ "Уфимский федеральный исследовательский центр РАН" (№ АААА-А16-116020350033-8). Исследования выполнены с использованием оборудования ЦКП "Биомика" (Отделение биохимических методов исследований и нанобиотехнологии РЦКП "Агидель", Уфа, Россия).

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Введение

Рассеянный склероз (PC) - хроническое прогрессирующее аутоиммунное демиелинизирующее нейродегенеративное заболевание центральной нервной системы (ЦНС), поражающее преимущественно лиц молодого трудоспособного возраста и неизбежно ведущее к их инвалидизации. Существующие на сегодняшний день знания о РС позволяют рассматривать его патогенез как сложный многокомпонентный процесс, ведущую роль в котором играют аутоиммунные механизмы, обусловливающие развитие воспаления в ЦНС и последующую демиелинизацию нервных волокон, гибель нейронов и олигодендроцитов [1]. Согласно современным представлениям, нейродегенерация присутствует уже на ранних стадиях РС и может протекать параллельно с развитием воспаления и приводить к атрофии нервных волокон и нейронов, обусловливая нарастающую инвалидизацию больных [2]. Развитие нейродегенеративных процессов при РС (аксональной дегенерации и гибели нейронов) может быть обусловлено также продукцией иммунокомпетентными клетками крови и ЦНС таких токсичных молекул, как глутамат, активные формы кислорода и азота [3]. Глутамат, продуцирующийся в избытке различными клетками нервной и иммунной систем при РС, в настоящее время рассматривается в качестве одной из основных причин повреждения аксонов, нейронов и олигодендроцитов [4]. Имеющиеся литературные данные свидетельствуют об участии глутамата в механизмах нейровоспаления, осуществляемом, в том числе за счет регуляции функций как поступивших в мозг аутореактивных T-клеток, так и периферических T- лимфоцитов [5].

Посредством ионотропных рецепторов, главным образом NMDA-подтипа, глутамат запускает эксай-тотоксические программы, что, как полагают, вносит вклад в формирование и поддержание нейродегена-рации при PC [6]. Отметим, однако, что функциональное значение рецепторов глутамата в патогенезе PC практически не исследовано. По данным ряда авторов, антагонисты NMDA-рецепторов мемантин и (+)-МК801 снижают выраженность неврологических нарушений у животных с экспериментальным аутоиммунным энцефаломиелитом (ЭАЭ), не препятствуя при этом развитию демиелинизации, однако уменьшают воспаление в ЦНС вследствие ограничения проницаемости гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) для цитокинов и T-лимфоцитов [7, 8]. В то же время антагонисты AMPA-рецепторов более эффективно, чем антагонисты NMDA-рецепторов, устраняют неврологический дефицит, но не оказывают влияния на развитие воспаления в ЦНС [9]. Кроме того, на модели ЭАЭ показано существование протективного иммунного механизма, опосредованного периферическими T-клетками, направленного, как полагают, на снижение токсического действия глутамата в ЦНС [5].

К настоящему времени доказана экспрессия ионотропных рецепторов глутамата на поверхности T- клеток человека, а также установлена их роль в регуляции ключевых функций иммунокомпетентных клеток. Так, показано, что рецепторы глутамата участвуют в регуляции секреции цитокинов и механизмов дифференцировки субпопуляций CD4+ T-лимфоцитов, контроле клеточного цикла, пролиферации и апоптоза, изменений мембранного потенциала клеток, модуляции активности ионных каналов, экспрессии генов, усилении образования свободных радикалов, интегрин-опосредованной адгезии к гликопротеинам экстраклеточного матрикса [10, 11]. Важно отметить, что в настоящий момент в доступной литературе имеются лишь единичные работы, посвященные изучению роли NMDA-рецепторов, экспрессированных на клетках иммунной системы, в функционировании T-лимфоцитов больных с РС. С целью установления значения NMDA-рецепторов в регуляции функций иммунокомпетентных клеток в данной работе проведен сравнительный анализ экспрессионного профиля мононуклеаров периферической крови, полученных от пациентов с РС на фоне блокады NMDA-рецепторов.

Методы

Доноры. В исследование было включено 9 больных с достоверным диагнозом РС (ремиттирующий тип течения заболевания), согласно критериям, предложенным в [12]. Средний возраст доноров составил 38,5 ± 11,5 года. Выраженность неврологического дефицита у больных РС была определена врачом-неврологом на момент взятия крови на основе шкалы инвалидизации Куртцке в модификации Weiner и Elisson [13] Expanded Disability Status Scale (EDSS). Средний показатель по шкале EDSS составил 3,0 ± 1,2 балла (от 1 до 5 баллов), что говорит о преобладании числа пациентов с умеренной степенью инвалидизации. Ко времени забора крови у всех пациентов наблюдалась стадия ремиссии заболевания, подтвержденная неврологом, на основании клинического осмотра и заключений о результатах магнитно-резонансной томографии головного мозга. Все больные РС, участвующие в исследовании, получали иммуномодулирующую терапию препаратами интерферона β-1а. У всех доноров было получено письменное информированное согласие. Работа получила одобрение в Локальном этическом комитете при Институте биохимии и генетики - обособленном структурном подразделении ФГБНУ "Уфимский федеральный исследовательский центр РАН", Уфа, Россия.

Фракцию мононуклеаров выделяли из периферической венозной крови доноров - больных РС. Выделение клеток проводили по стандартной методике центрифугирования в градиенте плотности фиколла (1,077 г/см3) [14].

Клетки стимулировали через Т-клеточный рецептор моноклональными антителами (МКА) против CD3 ^CD3 МКА, 2,5 мкг/мл; клон OCT3, eBioscience, США) и CD28 (aCD28 МКА, 1,25 мкг/мл; клон CD28.2; BD Pharmingen, США) и культивировали в течение 4 ч (контрольная группа). Мононуклеары опытной группы инкубировали с неконкурентным антагонистом NMDA-рецепторов (+)-MK801 (100 мкМ; Tocris, США) 5 мин, далее клетки отмывали фосфатно-солевым буфером и стимулировали комплексом аCD3/CD28 также в течение 4 ч, после чего выделяли образцы тотальной РНК.

Анализ экспрессионного профиля генов, уровень мРНК которых регулируется NMDA-рецепторами, проводили с помощью коммерческого набора Human Signal Transduction Pathway Finder PCR Array (SABioscienses, США). Образцы тотальной РНК выделяли из 2-106 клеток с использованием экстрагирующего раствора TRI Reagent (MRC, США) в соответствии с протоколом фирмы-изготовителя. Последующие выделение и очистку проводили с помощью коммерческого набора Direct-zol™ RNA MiniPrep Kit (Zymo Research, США). Количество и качество выделенных образцов РНК контролировали с помощью спектрофотометра NanoDrop 3000 (Thermo Scientific, США), а также электрофорезом в 1% агарозном геле. кДНК получали из 2 мкг суммарной РНК реакцией обратной транскрипции с использованием 0,5 мкг oligo(dT)12-18-праймеров и 40 единиц активности обратной транскриптазы RevertAid™ Reverse Transcriptase (Thermo Scientific, США). Для проведения ПЦР в режиме реального времени использовали набор RT2 SYBR Green/Fluor qPCR Mastermix (SABioscienses, США) в соответствии с протоколом производителя на приборе iQ™5 Multicolor RealTime PCR Detection System (BioRad, США). Результаты ОТ-ПЦР анализировали с помощью программного обеспечения RT2 Profiler PCR Array Data Analysis version 3.4 (SABioscienses, США), доступного на сайте производителя (www. pcrdataanalysis.sabiosciences.com/pcr/arrayanalysis.php). После нормализации по положительным контролям [5 генов "домашнего хозяйства": B2M (Beta-2-microglobulin), HPRT1 (Hypoxanthine phosphoribosyltransferase), RPL13A (Ribosomal protein L13a), GAPDH (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase), ACTB (Actin-beta)], были отобраны гены со статистически значимыми изменениями уровня мРНК. Гены, уровень транскриптов которых изменялся не менее чем в 1,5 раза, далее верифицировали методом количественной ОТ-ПЦР в режиме реального времени (6 доноров - больных РС) c использованием 2,5" реакционной смеси ПЦР-Микс ("Синтол", Россия), содержащей интеркалирующий краситель SYBR Green I. Результаты ОТ-ПЦР нормализовали по уровню экспрессии гена "домашнего хозяйства" HPRT1. Изменения в уровнях мРНК генов рассчитывали с использованием значений пороговых циклов в специализированной программе REST Tool V 2.0.7 (Corbertt Research, ЕША).

Функциональный анализ in silico. Функциональный кластерный анализ групп дифференциально экспрессирующихся генов (ДЭГ) проводили с помощью биоинформационной онлайн-программы DAVID [Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery; www. david.abcc.ncifcrf.gov]. Программа DAVID объединяет ряд биологических баз данных (BIOCARTA, KEGG, PANTHER, REACTOME), в которых аккумулирована геномная, протеомная, химическая, функциональная информация; она прежде всего предназначена для интерпретации данных геномного секвенирования и транскрипционного профилирования [15]. Для функционального анализа мы использовали следующие значения параметров кластеризации: высокая классификационная жесткость (High Classification Stringency), уровень обогащения EASE ≤ 0,01. Алгоритм EASE (Expression Analysis Systematic Explorer) использует для определения значения p-модифицированный точный тест Фишера, который применяется для проверки нулевой гипотезы о том, что список генов содержит лишь случайное количество элементов, ассоциированных с конкретной функциональной категорией. Затем полученные уровни значимости p были скорректированы программой DAVID с поправкой на множественные сравнения Бенжамини-Хохберга [16] и использованы для дальнейшей работы.

Результаты

Изменения транскриптома антиген-стимулированных клеток больных РС, индуцированные воздействием антагониста NMDA-рецепторов (+)-МК801, анализировали с использованием коммерческого набора Human Signal Transduction Pathway Finder PCR Array, содержащего иммобилизованные олигонуклеотиды для 84 генов. Сравнение экспрессионного профиля генов в экспериментальных группах "TCR-активированные лимфоциты доноров - больных РС + (+)-MK801" и "TCR-активированные лимфоциты доноров - больных РС" показало снижение уровня мРНК большинства генов (19 из 20), а увеличение экспрессии выявлено лишь для одного транскрипта (см. таблицу).

С использованием онлайн-ресурса DAVID проведена функциональная кластеризация групп дифференциально экспрессирующихся генов во фракции монону-клеаров при блокаде NMDA-рецепторов. Анализ групп генов, дифференциально экспрессирующихся в активированных иммунных клетках доноров - больных РС при действии антагониста NMDA-рецепторов, указывает на ассоциацию транскриптов с такими категориями клеточных процессов, как апоптоз, фосфорилирование, система цитокинов и хемокинов (см. таблицу). В этой экспериментальной группе отдельные гены (FASN, PTCH1, ODC1, FOS, EN1, HOXA1, WISP1) не распределены по категориям молекулярных функций. Подчеркнем, что продукты многих генов, изменивших экспрессию, могут участвовать в нескольких процессах, и для некоторых генов их функция в иммунокомпетентных клетках неизвестна.

Обсуждение

Результаты данной работы свидетельствуют о принадлежности генов, ответивших на действие антагониста NMDA-рецепторов в мононуклеарах больных РС, к таким биологическим процессам, как апоптоз (BCL2A1, FAS, NAIF, BIRC3, CSF2, ИЛ2, MYC, CDKN1B, GADD45A, HSF90AA2), фосфорилирование (CSF2, CDKN1B, ИЛ2, IGFBF3, GADD45A), система цитокинов и хемокинов (FAS, CCL20, CSF2, IGFBF3, ИЛ2, ИЛ8) (см. таблицу). Ранее нами было показано, что действие антагониста NMDA-рецепторов в Т-клетках, полученных от здоровых доноров, приводит к изменению экспрессии генов, которые объединяются в 4 тесно взаимосвязанных и перекрывающихся кластера: клеточная активация, апоптоз, клеточная пролиферация и дифференциация клеток [17], что свидетельствует о схожести паттернов биологических процессов, регулируемых данным подтипом рецепторов глутамата в Т-лимфоцитах здоровых лиц и больных РС.

В своей работе A.K. Kemppinen и соавт. [18] систематизировали результаты полногеномных исследований экспрессии генов в периферических иммунных клетках больных РС, полученные несколькими исследовательскими группами. Оказалось, что большинство дифференциально экспрессирующихся генов входят в функциональные кластеры, ассоциированные с цитокиновым сигналингом (ИЛ-6, ИЛ-17, ИЛ-10, ИЛ-4, TNF1, ИЛ-2, ИЛ-15), глюкокортикоидными рецепторами, NF-kB-, p38-, PPARa/RXRa-, SAPK/JNK-, PI3K/AKT - регулируемыми сигнальными каскадами, механизмами онкогенеза и др. Аналогичное исследование, в котором проведен анализ агрегированных данных об экспрессионных профилях периферических иммунных клеток больных РС, показало участие большинства дифференциально экспрессирующихся генов в процессах воспаления, регуляции иммунных функций, апоптоза, адгезии лимфоцитов, сплайсинга РНК [19-21]. Отмечено также изменение экспрессии ряда генов, белковые продукты которых вовлечены в механизмы цитокинового и хемокинового сигналинга [22, 23]. R. Bomprezzi и соавт. [24] наряду с генами, задействованными в контроле иммунных функций и межклеточных взаимодействий, отмечают также изменения уровней транскриптов, участвующих в контроле клеточного цикла. Согласно данным, полученным в результате анализа транскриптома лимфоцитов больных РС, > 80% выявленных генов относились к связанным с апоптотическими сигнальными путями, причем как про-, так и противоапоптотическими, что отражает дисбаланс между устойчивостью и чувствительностью лимфоцитов к апоптозу при РС [25].

Анализ имеющихся в литературе сведений о генах и сигнальных путях, ответивших на блокаду антагонистом (+)-МК801, позволил предположить их вовлеченность в патогенез РС. Остановимся подробнее на некоторых из них.

Общеизвестно, что дисрегуляция программированной клеточной смерти, в частности за счет ослабления апоптоза активированных аутореактивных Т-клеток и, как следствие, недостаточной их элиминации, является важным звеном патогенеза аутоиммунных заболеваний [26]. У больных РС наблюдается снижение спонтанной гибели клеток, резистентность периферических Т-лимфоцитов к Fa5-опосредованному апоптозу, сочетающаяся с повышенной экспрессией антиапопто-тических белков, преимущественно принадлежащих к семейству Bcl-2, и подавлением экспрессии проапоптотических белков (Bax и некоторых каспаз). Гены BIRC3 и NAIF кодируют белки - ингибиторы апоптоза BIRC3 (cIAP-2, HIAP-1) и NAIP (белок - ингибитор нейронального апоптоза) соответственно. Белок BIRC3 экспрессируется в лимфоцитах, его антиапоптотическая активность обусловлена непосредственным ингибированием каспаз 3, 7 и прокаспазы 9. Повышенная экспрессия BIRC3 в митоген-стимулированных Т-клетках больных с ремитирующим типом течения РС коррелирует с манифестацией заболевания и резистентностью Т-клеток к апоптозу [27]. В работе A.L. Hebb и соавт. [28] установлено увеличение уровня мРНК гена NAIF в Т-клетках больных ремиттирующим и первичнопрогрессирующим типом течения заболевания, причем в случае оценки содержания мРНК этого гена в лимфоцитах больных, получающих патогенетическую терапию, авторы отмечали снижение данного параметра.

Выявленное нами снижение экспрессии некоторых антиапоптотических генов (BIRC3, NAIF, BCL2A1) в периферических иммунных клетках доноров - больных РС может быть одним из механизмов, способствующих увеличению чувствительности клеток к апоптозу при действии антагониста NMDA-рецепторов.

Ген CCL20 кодирует хемокин, являющийся лигандом хемокинового рецептора CCR6. Взаимодействие CCL20 со своим рецептором регулирует хемоаттракцию к эндотелию CCR6-экспрессирующих клеток, включая незрелые дендритные клетки, эффекторные T-клетки, в том числе Th17, T-клетки памяти и В-клетки [29]. Показано, что использование антител против CCL20 при ЭАЭ значительно снижало выраженность клинических проявлений и нейровоспаления [30]. Обнаружение повышенного уровня CCL20 в сыворотке пациентов с РС подчеркивает важную роль данного хемокина в патогенезе заболевания [31].

ИЛ-8 (CXCL8) - один из основных медиаторов воспалительного ответа, являющийся представителем семейства хемокинов CXC. ИЛ-8 индуцирует хемоаттракцию, миграцию и инфильтрацию нейтрофилов, моноцитов и Т-клеток к очагам воспаления, способствуя адгезии клеток крови к эндотелию сосудов [32]. В работе B.T. Lund и соавт. [33] установлено повышенное содержание CXCL8 в сыворотке больных РС, а также увеличение секреции ИЛ-8 CD14-позигивными клетками периферической крови пациентов по сравнению со здоровыми донорами. Авторы полагают, что ИЛ-8 может опосредовать мобилизацию и последующую инфильтрацию моноцитов через ГЭБ и тем самым способствовать развитию воспаления в ЦНС. На моделях экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита животных показано, что блокада CXCR2 приводит к снижению инфильтрации полиморфно-ядерных лейкоцитов в ЦНС и меньшей выраженности патологических проявлений [34].

Полученные нами данные о подавлении экспрессии генов, кодирующих хемокины CCL20 и CXCL8 при действии (+)-МК801, могут свидетельствовать в пользу предположения о возможном протективном эффекте антагонистов NMDA-рецепторов в отношении одного из звеньев патогенеза РС.

Заключение

В данной работе мы провели исследование профиля мРНК генов, дифференциально экспрессирующихся в мононуклеарах больных РС при блокаде NMDA-рецепторов глутамата. Полученные результаты свидетельствуют о вовлечении ДЭГ, идентифицированных в иммунных клетках больных РС, в механизмы межклеточного взаимодействия, фосфорилирования и апоптоза. Это позволяет предположить, что NMDA-рецепторы глутамата на уровне транскриптома могут участвовать в модуляции некоторых ключевых функций мононуклеаров, а также в регуляции процессов хемотаксиса иммунных клеток у больных РС. Ряд авторов подчеркивает необходимость изучения изменений в работе тех или иных генов в мононуклеарах периферической крови больных РС, поскольку они отражают интенсивность течения патологии и могут служить в качестве прогностических маркеров и, возможно, терапевтических мишеней [22].

Участие авторов. Кузьмина УШ. - сбор и обработка материала, проведение экспериментов, анализ полученных данных, написание текста; Зайнуллина Л.Ф. -проведение экспериментов, анализ полученных данных; Садовников С.В. - проведение экспериментов, анализ полученных данных; Вахитов В. А. - разработка концепции и дизайна исследования, написание текста, редактирование; Бахтиярова К.З. - медицинский осмотр и подбор пациентов для исследования, редактирование; Вахитова Ю.В. - разработка концепции и дизайна исследования, анализ полученных данных, написание текста, редактирование. Все авторы принимали участие в обсуждении результатов и утверждении окончательного варианта рукописи.

Литература

1. Шмидт Т.Е., Яхно Н.Н. Рассеянный склероз : руководство для врачей. М. : МЕДпресс-информ, 2016.

2. Бойко А.Н., Петров С.В., Нестерова В.А., Гусев Е.И. Механизмы развития нейродегенеративного процесса при рассеянном склерозе - нейропротективное влияние препаратов бета-интерферона сегодня и нейротрофические факторы завтра. Журн. неврол. и психиатр. 2003; Спецвып. 2: 83-90.

3. Friese M.A., Schattling B., Fugger L. Mechanisms of neurodegeneration and axonal dysfunction in multiple sclerosis. Nat. Rev. Neurol. 2014; 10: 225-38. URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24638138-mechanisms-of-neurodegeneration-and-axonal-dysfunction-in-multiple-sclerosis/

doi: 10.1038/nrneurol.2014.37

4. Levite M. Glutamate, T cells and multiple sclerosis. J. Neural Transm. (Vienna). 2017; 124: 775-98.

doi: 10.1007/s00702-014-1167-5

5. Schori H., Yoles E., Schwartz M. T-cell-based immunity counteracts the potential toxicity of glutamate in the central nervous system. J. Neuroimmunol. 2001; 119: 199-204.

6. Pitt D., Werner P., Raine C.S. Glutamate excitotoxicity in a model of multiple sclerosis. Nat. Med. 2000; 6: 67-70. URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10613826-glutamate-excitotoxicity-in-a-model-of-multiple-sclerosis/

doi: 10.1038/71555

7. Paul C., Bolton C. Modulation of blood-brain barrier dysfunction and neurological deficits during acute experimental allergic encephalomyelitis by the N-methyl-D-aspartate receptor antagonist memantine. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2002; 302: 50-7.

8. Абдурасулова И.Н., Сердюк С.Е., Гмиро В.Е. Комбинированная блокада NMDA и GLUR1 AMPA рецепторов уменьшает тяжесть неврологических нарушений и длительность течения экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита у крыс. Нейроиммунология. 2007; 1; 4-11.

9. Smith T., Groom A., Zhu B., Turski L. Autoimmune encephalomyelitis ameliorated by AMPA antagonists. Nat. Med. 2000; 6: 62-6. URL: https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0034933

doi: 10.1371/journal.pone.0034933

10. Зайнуллина Л.Ф., Ямиданов Р.С., Вахитов В.А., Вахитова Ю .В. NMDA-рецепторы - возможные компоненты депозависимо-го входа Ca2+ в T- лимфоциты человека. Биохимия. 2011; 76 (11): 1517-24.

11. Ganor Y., Levite M. The neurotransmitter glutamate and human T cells: glutamate receptors and glutamate-induced direct and potent effects on normal human T cells, cancerous human leukemia and lymphoma T cells, and autoimmune human T cells. J. Neural Transm. (Vienna). 2014; 121 (8): 983-1006. URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24584970-the-neurotransmitter-glutamate-and-human-t-cells-glutamate-receptors-and-glutamate-induced-direct-and-potent-effects-on-normal-human-t-cells-cancerous-human-leukemia-and-lymphoma-t-cells-and-autoimmune-human-t-cells/

doi: 10.1007/s00702-014-1167-5

12. Thompson A.J., Banwell B.L., Barkhof F., Carroll W.M. et al. Diagnosis of multiple sclerosis: 2017 revisions of the McDonald criteria. Lancet Neurol. 2018; 17 (2): 162-73. URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29275977-diagnosis-of-multiple-sclerosis-2017-revisions-of-the-mcdonald-criteria/

doi: 10.1016/S1474-4422(17)30470-2

13. Weiner H.L., Ellison H.L. A working protocol to be used as a guideline for trials in multiple sclerosis. Arch. Neurol. 1983; 40: 704-10.

14. Boyum A. Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood. Isolation of monuclear cells by one centrifugation, and of granulocytes by combining centrifugation and sedimentation at 1 g. Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1968; 97: 77-89.

15. Huang W., Sherman B.T., Lempicki R.A. Systematic and integrative analysis of large gene lists using DAVID bioinformatics resources. Nat. Protoc. 2009; 4: 44-57. URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19131956-systematic-and-integrative-analysis-of-large-gene-lists-using-david-bioinformatics-resources/

doi: 10.1038/nprot.2008.211

16. Benjamini Y., Hochberg Y.J. Controlling the false discovery rate: a practical and powerful approach to multiple testing. J. R. Stat. Soc. Ser. B Methodol. 1995; 57: 289-300.

17. Кузьмина УШ., Зайнуллина Л.Ф., Садовников С.В., Вахитов В. А. и др. NMDA-рецепторы регулируют гены ключевых иммунных функций в мононуклеарах периферической крови человека. Бюл. экспер. биол. 2018; 165 (2): 216-20.

18. Kemppinen A.K., Kaprio J., Palotie A., Saarela J. Systematic review of genome-wide expression studies in multiple sclerosis. BMJ Open. 2011; 1 (1). Article ID e000053.

19. Lindberg R.L., Kappos L. Transcriptional profiling of multiple sclerosis: towards improved diagnosis and treatment. Expert Rev. Mol. Diagn. 2006; 6: 843-55. URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17140371-transcriptional-profiling-of-multiple-sclerosis-towards-improved-diagnosis-and-treatment/

doi: 10.1586/14737159.6.6.843

20. Liu M., Hou X., Zhang P. Hao Y. et al. Microarray gene expression profiling analysis combined with bioinformatics in multiple sclerosis. Mol. Biol. Rep. 2013; 40: 3731-7. URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23456643-microarray-gene-expression-profiling-analysis-combined-with-bioinformatics-in-multiple-sclerosis/

doi: 10.1007/s11033-012-2449-3

21. Paraboschi E.M., Cardamone G., Rimoldi V, Gemmati D. et al. Meta-analysis of multiple sclerosis microarray data reveals dysregulation in RNA splicing regulatory genes. Int. J. Mol. Sci. 2015; 16: 23 463-81. URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26437396-meta-analysis-of-multiple-sclerosis-microarray-data-reveals-dysregulation-in-rna-splicing-regulatory-genes/

doi: 10.3390/ijms161023463

22. Achiron A., Gurevich M., Friedman N., Kaminski N. et al. Blood transcriptional signatures of multiple sclerosis: unique gene expression of disease activity. Ann. Neurol. 2004; 55: 410-7. URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14991819-blood-transcriptional-signatures-of-multiple-sclerosis-unique-gene-expression-of-disease-activity/

doi: 10.1002/ana.20008

23. Iglesias A.H., Camelo S., Hwang D., Villanueva R. et al. Microarray detection of E2F pathway activation and other targets in multiple sclerosis peripheral blood mononuclear cells. J.Neuroimmunol. 2004; 150: 163-77. URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15081262-microarray-detection-of-e2f-pathway-activation-and-other-targets-in-multiple-sclerosis-peripheral-blood-mononuclear-cells/

doi: 10.1016/j.jneuroim.2004.01.017

24. Bomprezzi R., Ringner M., Kim S., Bittner M.L. et al. Gene expression profile in multiple sclerosis patients and healthy controls: identifying pathways relevant to disease. Hum. Mol. Genet. 2003; 12: 2191-9. URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12915464-gene-expression-profile-in-multiple-sclerosis-patients-and-healthy-controls-identifying-pathways-relevant-to-disease/

doi: 10.1093/hmg/ddg221

25. Satoh J., Nakanishi M., Koike F., Miyake S. et al. Microarray analysis identifies an aberrant expression of apoptosis and DNA damage-regulatory genes in multiple sclerosis // Neurobiol. Dis. 2005; 18 (3): 537-50. URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15755681-microarray-analysis-identifies-an-aberrant-expression-of-apoptosis-and-dna-damage-regulatory-genes-in-multiple-sclerosis/

doi: 10.1016/j.nbd.2004.10.007

26. Macchi B., Marino-Merlo F., Nocentini U., Pisani V. et al. Role of inflammation and apoptosis in multiple sclerosis: comparative analysis between the periphery and the central nervous system. J. Neuroimmunol. 2015; 287: 80-7. URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26439966-role-of-inflammation-and-apoptosis-in-multiple-sclerosis-comparative-analysis-between-the-periphery-and-the-central-nervous-system/

doi: 10.1016/j.jneuroim.2015.08.016

27. Sharief M.K., Semra Y.K. Upregulation of the inhibitor of apoptosis proteins in activated T lymphocytes from patients with multiple sclerosis. J. Neuroimmunol. 2001; 119; 350-7. URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11585639-upregulation-of-the-inhibitor-of-apoptosis-proteins-in-activated-t-lymphocytes-from-patients-with-multiple-sclerosis/

doi: 10.1016/S0165-5728(01)00365-4

28. Hebb A.L., Moore C.S., Bhan V, Campbell T. et al. Expression of the inhibitor of apoptosis protein family in multiple sclerosis reveals a potential immunomodulatory role during

29. Schutyser E., Struyf S., Van Damme J. The CC chemokine CCL20 and its receptor CCR6. Cytokine Growth Factor Rev. 2003; 14: 409-26

30. Mony J.T., Khorooshi R., Owens T. Chemokine receptor expression by inflammatory T cells in EAE. Front. Cell Neurosci. 2014; 8: 187.

doi: 10.3389/fncel.2014.00187

31. Jafarzadeh A., Bagherzadeh S., Ebrahimi H.A., Hajghani H. et al. Higher circulating levels of chemokine CCL20 in patients with multiple sclerosis: evaluation of the influences of chemokine gene polymorphism, gender, treatment and disease pattern. J. Mol. Neurosci. 2014; 53: 500-5.

doi: 10.1007/s12031-013-0214-2

32. Russo R.C., Garcia C.C., Teixeira M.M., Amaral F.A. The CXCL8/IL-8 chemokine family and its receptors in inflammatory diseases // Expert Rev. Clin. Immunol. 2014. Vol. 10, N 5. P. 593-619.

doi: 10.1586/1744666X.2014.894886

33. Lund B.T., Ashikian N., Ta H.Q., Chakryan Y. et al. Increased CXCL8 (IL-8) expression in multiple sclerosis. J. Neuroimmunol. 2004; 155 (1-2). 161-71.

doi: 10.1016/j.jneuroim.2004.06.008

34. Carlson T., Kroenke M., Rao P., Lane T.E. et al. The Th17-ELR1CXC chemokine pathway is essential for the development of central nervous system autoimmune disease. J. Exp. Med. 2008; 205; 811-23. URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18347102-the-th17-elr-cxc-chemokine-pathway-is-essential-for-the-development-of-central-nervous-system-autoimmune-disease/

doi: 10.1084/jem.20072404

Материалы данного сайта распространяются на условиях лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License («Атрибуция - Всемирная»)


Журналы «ГЭОТАР-Медиа»