Методика оценки уровня IgG-антител к различным белкам SARS-CoV-2 с помощью мультиплексного иммунофлуоресцентного анализа

Резюме

Введение. Определение серологического статуса пациентов в отношении SARS-CoV-2 необходимо для оценки клинического течения COVID-19 и эпидемиологической обстановки в целом, а также для выработки стратегии ревакцинации населения. Хотя существует большое количество тест-систем для определения антител к SARS-CoV-2, их точность, чувствительность и специфичность сильно варьируют. Тест-системы различаются в зависимости от используемой платформы и набора антигенов, что затрудняет интерпретацию и сопоставление результатов.

Цель - определить диагностические характеристики тест-системы MILLIPLEX® SARS-CoV-2 Antigen Panel 1 IgG для мультиплексного иммунофлуоресцентного анализа (МИФА) уровня антител к SARS-CoV-2 на приборе FlexMap 3D (Luminex, США) в биообразцах сыворотки крови людей, как перенесших COVID-19, так и вакцинированных против COVID-19.

Материал и методы. В исследование включены 3 группы участников: лица с COVID-19 в анамнезе; лица, не имевшие COVID-19 в анамнезе и невакцинированные; вакцинированные лица. Для всех биообразцов выполнено определение уровня IgG-антител к SARS-CoV-2 с помощью иммуноферментного анализа (ИФА), МИФА, а также определение уровня вирус-нейтрализующих антител.

Результаты. В рамках исследования определено пороговое значение для подтверждения наличия IgG-антител к S1-субъединице S-белка (белка шипа) SARS-CoV-2 методом МИФА - 3267 MFI, а также оценены чувствительность и специфичность данного метода, которые равны 0,78 и 0,92 соответственно. Разработана линейная регрессионная модель для пересчета значений MFI в BAU/мл. Определен серопротективный уровень антител к S1-субъединице S-белка SARS-CoV-2 - 5192 MFI.

Заключение. Определение уровня IgG-антител с помощью МИФА обладает высокой диагностической чувствительностью и специфичностью. Данный метод позволяет оценивать серопротективность по уровню антител к S1-субъединице S-белка SARS-CoV-2. Кроме того, полученные результаты могут быть сопоставлены с международными единицами измерения BAU/мл по формуле:

m - 492,770 + 31,320 × b b = - 15,733 + 0,032 × m,

где b - величина в BAU/мл, m - величина в MFI.

Ключевые слова:мультиплексный иммунофлуоресцентный анализ; иммуноферментный анализ; SARS-CoV-2; COVID-19; гуморальный иммунитет; IgG

Для цитирования: Фролова Л.В., Земский П.Ю., Митрофанов С.И., Мухин В.Е., Шпакова Т.А., Казакова П.Г., Ахмерова Ю.Н., Буланова Н.В., Голубникова Л.А., Грамматикати К.С., Жданова А.С., Мкртчян А.А., Сергеев А.П., Снигирь Е.А., Фелиз Н.В., Макаров В.В., Юдин В.С., Кескинов А.А., Краевой С.А., Юдин С.М., Скворцова В.И. Методика оценки уровня IgG-антител к различным белкам SARS-CoV-2 с помощью мультиплексного иммунофлуоресцентного анализа. Иммунология. 2023; 44 (1): 109-119. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2023-44-1-109-119

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Вклад авторов. Все авторы внесли равнозначный вклад в исследование и подготовку статьи к публикации.

Введение

Коронавирусы представляют собой разнообразную группу РНК-содержащих вирусов, инфицирующих различных животных, а также вызывающих респираторные инфекции разной степени тяжести у людей [1]. В 2002 и 2012 гг. два высокопатогенных представителя семейства Coronaviridae зоонозного происхождения - SARS-CoV и MERS-CoV - вызвали вспышки респираторных заболеваний с зафиксированными летальными исходами. В конце 2019 г. новый высококонтагиозный коронавирус SARS-CoV-2 вызвал вспышку вирусной пневмонии, которая быстро распространилась по всему миру и превзошла атипичную пневмонию и MERS-синдром как по количеству инфицированных людей, так и по пространственному охвату зон со сложной санитарно-эпидемиологической ситуацией [2, 3]. В феврале 2020 г. ВОЗ дала болезни, вызываемой SARS-CoV-2, название COVID-19, а 11 марта 2020 г. объявила о пандемии заболевания [4].

Основными структурными компонентами SARS-CoV-2 являются белок шипа (S), белок оболочки (E), мембранный белок (M) и нуклеокапсидный белок (N). В структуре S-белка можно выделить S1-субъединицу (14-685 аминокислотных остатков) и S2-субъединицу (686-1273 аминокислотных остатков) [3]. S1-субъединица S-белка содержит рецептор-связывающий домен (RBD), который взаимодействует с ангиотензин-превращающим ферментом (ACE2), экспрессированным на клетках разных тканей [3, 5, 6].

SARS-CoV-2 стимулирует гуморальный и клеточный иммунный ответ в организме инфицированного человека. Гуморальный иммунный ответ характеризуется выработкой IgA-, IgM- и IgG-антител, которые способны специфически распознавать и связывать чужеродные белки. IgM-антитела против N-белка вируса выявляются у пациентов уже на 7-е сутки заболевания, IgG-антитела - после 7-х суток. N-белок обладает высокими иммуногенными свойствами и является высокоэкспрессируемым во время инфекции [3, 6, 7]. Антитела к S-белку, который является основной мишенью вакцинопрофилактики, в частности для "Гам-КОВИД-Вак" - первой в мире официально зарегистрированной вакцины против COVID-19, обладают наибольшей нейтрализующей активностью [3, 8-13]. Антитела, которые связывается с поверхностными эпитопами вирусных частиц, блокируя проникновение вируса в клетки хозяина, определяются как вирус-нейтрализующие. Уровни нейтрализующих антител у выздоравливающих пациентов могут быть выше, чем после вакцинации [13-15].

Пандемия COVID-19 потребовала быстрого увеличения масштабов диагностики in vitro, чтобы обеспечить массовый скрининг и тестирование групп высокого риска, а также получение надежных данных о воздействии SARS-CoV-2 на индивидуальном и популяционном уровне. Вероятность заболевания человека при прочих равных условиях зависит от титра антител: чем выше титр антител, тем меньше вероятность заболевания [16-18]. Для оценки гуморального иммунитета к SARS-CoV-2 необходимо применение диагностических тест-систем для выявления IgA-, IgM-, IgG-антител к данному вирусу. Как правило, в основе этих тест-систем лежат методы иммуноферментного анализа (ИФА) и иммунохроматографии либо их аналоги. Существующие серологические тесты, используемые для диагностики COVID-19 и оценки иммунного ответа, позволяют выявить IgG-антитела к белкам SARS-Cov-2, образующиеся в определяемых количествах примерно через 2 нед после появления первых симптомов заболевания [3, 9, 18-21]. Для определения уровня IgG-антител к различным субъединицам S-белка и N-белку SARS-CoV-2 мы использовали технологию xMAP. Метод мультиплексного иммунофлуоресцентного анализа (МИФА) с высокой пропускной способностью предназначен для быстрого, чувствительного и специфичного определения большого количества аналитов в одном биологическом образце [22].

В настоящее время в России зарегистрировано более 130 тест-систем различных производителей для выявления антигена и антител к коронавирусу. Диагностические тест-системы имеют разные показатели чувствительности и специфичности, уровни воспроизводимости между постановками и ограничения по минимальному и максимальному показателю уровня антител [3, 17].

Использование различных тест-систем с нестандартизованными единицами измерения усложняет процесс интерпретации и отслеживания динамики напряженности гуморального иммунитета. В декабре 2020 г. ВОЗ утвердила международный стандарт и международную единицу измерения уровня антител к SARS-CoV-2 - BAU/мл (binding antibody units - единицы связывающих антител; NIBSC code: 20/136). На данный момент не существует методики сравнения уровня антител, полученных с помощью разных тест-систем, поэтому в рамках данного исследования мы поставили перед собой задачу построить шкалу перевода данных, полученных при использовании технологии xMAP, в международные единицы измерения BAU/мл.

Материал и методы

Обследуемые группы. Данное наблюдательное исследование проведено в соответствии с этическими принципами Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации "Этические принципы проведения медицинских исследований с участием человека в качестве субъекта" от 1964 г. с последующими изменениями и дополнениями. До начала исследования 28.12.2020 было получено письменное одобрение локального этического комитета ФГБУ "ЦСП" ФМБА России на проведение исследования. Обязательным условием включения в исследование и сбора биоматериала являлось подписание добровольного информированного согласия. У участников без COVID-19 в анамнезе отсутствовали IgG- или IgM-антитела к SARS-CoV-2 на момент включения в исследование. У участников с COVID-19 в анамнезе было зафиксировано начало COVID-19 в течение предыдущих 7 дней, подтвержденное лабораторными методами (ПЦР-тест на РНК SARS-CoV-2 и/или качественный/количественный анализ IgG- или IgM-антител к SARS-CoV-2), а также был положительный ПЦР-тест на РНК SARS-CoV-2 в течение последних 7 дней до исследования. В группе вакцинированных от COVID-19 для вакцинации применялся препарат "Гам-КОВИД-Вак" не позднее чем за полгода до начала исследования. Основными критериями невключения в исследование являлись: любые острые заболевания, если с момента полного выздоровления до скрининга не прошло 4 нед; хронические заболевания в стадии обострения и стадии декомпенсации; алкоголизм, наркомания, токсикомания в анамнезе; наличие онкологического заболевания в течение 3 лет до включения в исследование; химиотерапия или радиотерапия в предшествующие 3 года; иммунодефицитное состояние; наличие в анамнезе системных воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний; ВИЧ инфекция, гепатиты В и С, сифилис; беременность и период кормления грудью.

Для исследования были сформированы 3 выборки биообразцов:

· для определения порога MFI (median fluorescence intensity - медианное значение интенсивности флуоресценции), свидетельствующего о наличии антител (399 биообразцов: 93 от участников с COVID-19 в анамнезе и 306 от участников без COVID-19 в анамнезе; средний возраст участников - 50 ± 9 лет, соотношение биообразцов от женщин/мужчин: 196/203);

· для перевода единиц измерения MFI в международную величину BAU/мл (88 биообразцов: 25 от участников, перенесших COVID-19; 35 от участников, вакцинированных от COVID-19; 28 от участников, которые не болели и не вакцинировались; средний возраст участников 45 ± 11 лет, соотношение биообразцов от женщин/мужчин: 49/39);

· для определения серопротективного уровня антител (120 биообразцов: 48 от участников, вакцинированные от COVID-19; 9 от участников с COVID-19 в анамнезе; 63 от участников, которые не болели и не вакцинировались; средний возраст участников 47 ± 10 лет, соотношение биообразцов от женщин/мужчин: 54/69).

Сбор биоматериала и метаданных. Метаданные, полученные от каждого участника исследования, содержали пол, возраст, регион проживания и другие характеристики. Забор биоматериала осуществлялся в соответствии с ГОСТ Р53079.4-2008.

Все биообразцы, попавшие в финальную выборку исследования, прошли проверку на отсутствие признаков гемолиза и хилеза. Транспортировка биообразцов осуществлялась при постоянном контроле температурного режима. Биообразцы подвергались заморозке не более одного раза. Всего собрано и обработано 583 биообразца сыворотки крови от 471 участника исследования.

Мультиплексный иммунофлуоресцентный анализ. Для анализа биообразцов сыворотки применялся мультиплексный анализатор FlexMap 3D Luminex с использованием набора реагентов MILLIPLEX SARS-CoV-2 Antigen Panel 1 IgG (Merck Millipore, Германия). Для выполнения МИФА уровня антител сыворотку разводили в соотношении 1 : 100 буфером для разведения образцов Assay Buffer, затем в каждую лунку 96-луночного планшета к исследуемым образцам добавляли буфер для разведения образцов Assay Buffer, а также полистироловые сферы с иммобилизованными на их поверхности специфическими вирусными антигенами S1, S2, RBD, N. Планшет с полученной смесью заклеивали пленкой и инкубировали при непрерывном перемешивании на шейкере с интенсивностью перемешивания 800 об/мин в течение 2 ч при комнатной температуре (20-25 °C). Затем планшет трижды отмывали промывочным буфером на магнитном штативе и инкубировали с конъюгатом PE-anti-Human IgG Conjugate (Merck Millipore, Германия) при комнатной температуре. После 90 мин инкубации планшет повторно отмывали промывочным буфером с использованием магнитного штатива и добавляли проточную жидкость Sheath Fluid, после чего ресуспендировали 10 мин на шейкере при комнатной температуре и загружали для детекции в мультиплексный анализатор FlexMap 3D (Luminex, США) с программным обеспечением xPONENT (Luminex, США). В процессе детекции идентифицировалась каждая отдельная микросфера и оценивался количественный результат флуоресцентных сигналов. Полученные данные об MFI в формате csv-файла обрабатывали с использованием программного обеспечения MILLIPLEX® Analyst 5.1 (Merck Millipore, Германия).

Количественный ИФА выполняли с применением набора SARS-CoV-2-IgG количественный ИФА-БЕСТ ("Вектор-Бест", Россия; кат. № D-5505). Исследуемые образцы сыворотки разбавляли в 10 раз раствором для предварительного разведения сывороток, после чего в лунки планшета вносили по 10 мкл полученных разбавленных сывороток и по 90 мкл раствора для разведения сывороток и тщательно перемешивали. Во время каждой постановки в пустые лунки планшета вносили по 100 мкл калибровочных образцов (0, 10, 125, 500 BAU/мл), положительного и отрицательного контроля. Затем заклеивали планшет пленкой и инкубировали в течение 30 мин в термостатируемом шейкере при температуре 37 °С с интенсивностью перемешивания 700 об/мин.

По окончании инкубации планшет промывали 5 раз промывочным раствором, вносили по 100 мкл конъюгата и инкубировали в течение 30 мин в термостатируемом шейкере при температуре 37 °С с интенсивностью перемешивания 700 об/мин. По окончании второй инкубации планшет промывали 5 раз промывочным раствором, вносили по 100 мкл субстрата и инкубировали в защищенном от прямых солнечных лучей месте в течение 25 мин при комнатной температуре. Затем вносили во все лунки планшета по 100 мкл стоп-реагента и измеряли оптическую плотность в двухволновом режиме спектрофотометра Infinite 200 PRO (Tecan, Швейцария); основная длина волны - 405 нм, длина волны сравнения - 620 нм. Значения оптической плотности образцов переводили в BAU/мл по калибровочной кривой, иллюстрирующей зависимость значений оптической плотности от концентрации IgG в калибровочных образцах.

Определение уровня вирус-нейтрализующих антител. Оценку уровня вирус-нейтрализующих антител выполняли с помощью суррогатного нейтрализационного теста SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test (sVNT) Kit (Proteogenix, Франция). Данный тест основан на конкурентном связывании нейтрализующих антител и человеческого рекомбинантного ангиотензин-связывающего фермента 2, конъюгированного с пероксидазой хрена (hACE2-HRP), с RBD-доменом S-белка SARS-CoV-2. В качестве положительного контроля использовали раствор моноклональных антител S309 и CR3022, для которых ранее была показана высокая нейтрализующая способность в отношении SARS-CoV-2. В качестве отрицательного контроля использовали раствор поликлональных антител к S2-субъединице S-белка вируса SARS-CoV-2.

Биообразцы сывороток, а также положительные и отрицательные контроли вносили в 96-луночный планшет с иммобилизованным RBD-доменом S-белка SARS-CoV-2 и инкубировали в течение 60 мин при 37 °С. Затем планшет трижды отмывали промывочным буфером и вносили субстрат. После 10 мин инкубации реакцию останавливали внесением стоп-реагента и определяли абсорбцию при 450 нм.

Нейтрализующую способность рассчитывали по формуле:

Биообразцы с уровнем нейтрализации < 20 % расценивали как ненейтрализирующие.

Анализ и визуализация данных. Расчеты, построение графиков и диаграмм осуществлялось с помощью языка R в среде разработки RStudio с использованием библиотеки pROC (SIB, Швейцария) [23], а также программы GraphPad Prism 9.3.1 (GraphPad Software Inc, США).

Результаты

Определение пороговых значений MFI на приборе FlexMap 3D

Для определения оптимального порога значений MFI для S1-субъединицы S-белка вируса SARS-CoV-2, свидетельствующего о достоверном наличии антител, проанализирована выборка из 399 биообразцов: 93 биообразца от участников с COVID-19 в анамнезе и 306 биообразцов от участников без COVID-19 в анамнезе (средний возраст участников - 50 ± 9 лет, соотношение биообразцов от женщин/мужчин: 196/203).

Для значений MFI от 0 до 39 404 (максимальное значение, полученное для данной выборки) были рассчитаны чувствительность и специфичность. На ROC-кривой на рис. 1 показатель AUC (Area Under Curve, площадь под ROC-кривой) составляет 0,88, что говорит о возможности использования этой модели, основанной на количественном определении уровня IgG-антител к S1-субъединице S-белка SARS-CoV-2 на приборе FlexMap, для качественного определения серопозитивности к SARS-CoV-2.

Для определения порога, позволяющего достоверно различить участников с COVID-19 в анамнезе и невакцинированных участников без COVID-19 в анамнезе при достижении оптимума чувствительности и специфичности для каждого значения была рассчитана F1-мера по следующей формуле:

где TP - истинно положительные результаты, FP - ложноположительные результаты; FN - ложноотрицательные результаты. TP - истинно положительные образцы от пациентов с COVID-19, в анамнезе определенные как положительные по наличию антител, а также образцы от пациентов без COVID-19 в анамнезе, определенные как отрицательные по наличию антител; FP - ложноположительные образцы от пациентов без COVID-19 в анамнезе и с антителами, определенные как положительные по наличию антител; FN - ложноотрицательные образцы от пациентов с COVID-19 в анамнезе и без антител, определенные как отрицательные по наличию антител.

Максимальное значение F1 достигается при значении MFI = 3267, при этом F1 = 0,85, значение чувствительности составило 0,78, а специфичности - 0,92.

Перевод единиц измерения MFI в BAU/мл

Для формирования выборки для перевода единиц измерения MFI, получаемых на приборе FlexMap 3D, в международную величину BAU/мл отобрано 88 образцов с известным анамнезом: из них 39 мужчин, 49 женщин, средний возраст участников 45 ± 11 лет, из них 25 участников перенесли COVID-19, 35 участников были вакцинированы от COVID-19, 28 участников не болели и не вакцинировались.

Для перевода значений MFI, получаемых на мультиплексном анализаторе, в международную величину BAU/мл выполнено дополнительное исследование с использованием набора реагентов для иммуноферментного количественного определения IgG-антител к S-белку SARS-CoV-2 (SARS-CoV-2-IgG количественный-ИФА-БЕСТ, АО "Вектор-Бест"). На основе полученных данных построены диаграммы распределения количественных показателей уровня IgG-антител к вирусу SARS-CoV-2 (рис. 2).

Для анализа корреляции был определен коэффициент корреляции Пирсона (r). Из полученных данных видно, что наибольшая корреляция выявлена между показателями ИФА и МИФА для IgG к S1-субъединице S-белка SARS-CoV-2 (r = 0,96) и рецептор-связывающему домену S-белка вируса SARS-CoV-2 (r = 0,95), а корреляция между показателями по S2-субъединице S-белка SARS-CoV-2 наблюдается в меньшей степени (r = 0,64). В результате для S1-субъединицы S-белка SARS-CoV-2 разработана линейная регрессионная модель следующего вида:

m = 492,770 + 31,320×b ⇔ b = -15,733 + 0,032×m, (3)

где b - величина в BAU/мл, m - значение MFI.

Тест Шапиро-Уилка, выполненный для отклонений точек реальных данных от линии регрессии, дал значение критерия W = 0,98 при p = 0,33, что позволяет принять нулевую гипотезу (H0) о нормальности распределения остатков (разница между наблюдаемыми значениями и прогнозируемыми значениями в регрессионном анализе).

Коэффициент детерминации (доля дисперсии зависимой переменной, объясняемая рассматриваемой моделью) R2 составляет 0,9255. Область применения модели находится в диапазоне значений MFI от 0 до 35000.

В табл. приведены результаты перевода значений MFI в BAU/мл для S1-субъединицы S-белка.

Разработанная модель ограничивается переводом MFI в BAU/мл для S1-субъединицы S-белка SARS-CoV-2. Поскольку большинство зарегистрированных вакцин против COVID-19 нацелено на выработку антител к S-белку SARS-CoV-2, количественное определение уровня IgG-антител к этому белку может быть информативным методом оценки динамики напряженности иммунного ответа на вакцинацию препаратами "Спутник V" ("Гам-КОВИД-Вак") и "Спутник Лайт", а также цельновирионными инактивированными вакцинами или вакцинами на основе мРНК S-белка.

Определение уровня вирус-нейтрализующей активности антител

Для определения серопротективного уровня антител оценивали нейтрализующую активность сывороток с известным уровнем IgG к S1-субъединице S-белка SARS-CoV-2.

Для этого были отобраны 120 биообразцов сывороток крови (54 женщины, 69 мужчин, средний возраст участников 47 ± 10) из разных групп (вакцинированные от COVID-19 - 48 участников; с COVID-19 в анамнезе - 9 участников; не болели и не вакцинировались - 63 участника) с различным уровнем IgG к S1-субъединице S-белка (MFImin = 11, MFImax = -36 655), после чего была проанализирована их вирус-нейтрализующая активность с помощью суррогатного нейтрализационного теста (sVNT) (рис. 3). Проведенный анализ выявил высокую корреляцию между нейтрализующей активностью антител и MFI (r = 0,90).

В качестве серопротективного уровня антител выбрано значение уровня IgG к S1-субъединице S-белка в биообразце сыворотки, при котором вирус-нейтрализующая активность была > 20 % как минимум в 99 % образцов. Таким образом, серопротективный уровень антител достигается при значениях MFI по IgG к S1-субъединице S-белка > 3181 (86 BAU/мл), при этом все такие биообразцы имеют вирус-нейтрализующую активность > 20 %, а при значениях MFI > 16 121 (500 BAU/мл) 94,4 % образцов имеют вирус-нейтрализующую активность > 50 % (рис. 3).

Обсуждение

МИФА обладает рядом преимуществ по сравнению с классическими методами детекции и определения концентрации аналитов в биоматериале: единовременное определение большого числа аналитов в одной лунке планшета, высокая чувствительность, широкий диапазон концентраций, минимальные затраты биоматериала и пр. В связи с этим данная технология подходит для исследования уровня антител к различным белкам SARS-CoV-2 в масштабных эпидемиологических исследованиях.

На текущий момент в литературе не представлена методика перевода значений уровня IgG в MFI в международные единицы измерения BAU/мл, а также не определен порог значений, получаемый на мультиплексном анализаторе, свидетельствующий о серопозитивности биообразца сыворотки по уровню IgG к S-белку SARS-CoV-2, что затрудняло использование данной технологии для оценки динамики напряженности гуморального иммунитета к SARS-CoV-2.

В проведенном нами исследовании продемонстрирована возможность перевода значений уровня IgG к S1-субъединице S-белка SARS-CoV-2 из MFI в BAU/мл. Кроме того, определено пороговое значение уровня IgG к S1-субъединице S-белка SARS-CoV-2, которое достигается при значении MFI 3267 и позволяет достоверно различить участников с COVID-19 в анамнезе от участников без COVID-19 в анамнезе.

Коэффициент корреляции между значениями, полученными методами МИФА и количественного ИФА для S2-субъединицы S-белка SARS-CoV-2, свидетельствует о невозможности создания однозначной шкалы перевода значений MFI в BAU/мл для этой антител к этой субъединице, что относится к ограничениям проведенного исследования.

В работе использовался набор для определения антител к полному S-белку вируса SARS-CoV-2. В рамках развития данной темы может быть проведена отдельная серия экспериментов с набором ИФА для определения IgG именно против S2-субъединицы S-белка SARS-CoV-2.

Литература

1. Cui J., Li F., Shi Z.-L. Origin and evolution of pathogenic coronaviruses: 3. Nat. Rev. Microbiol. Nature Publishing Group. 2019; 17 (3): 181-92. DOI: https://www.doi.org/10.1038/s41579-018-0118-9

2. Wu J.T., Leung K., Leung G.M. Nowcasting and forecasting the potential domestic and international spread of the 2019-nCoV outbreak originating in Wuhan, China: a modelling study. Lancet Lond. Engl. 2020; 395 (10225): 689-97. DOI: https://www.doi.org/10.1016/S0140-6736(20)30260-9

3. Хаитов Р.М., Скворцова В.И., Хаитов М.Р. Биомедицинская безопасность: иммуногенетика и коронавирусная инфекция. Москва : ГЭОТАР-Медиа, 2022. 352 с. ISBN: 978-5-9704-7382-5.

4. Кармишин А.М., Борисевич И.В., Скворцова В.И., Горяев А.А., Юдин С.М. Вероятность возникновения инфекционного заболевания человека при эпидемии. Медицина экстремальных ситуаций. 2021; 23 (1): 5-11. DOI: https://www.doi.org/10.47183/mes.2021.007

5. Xia S., Zhu Y., Liu M., Lan Q., Xu W., Wu Y., Ying T., Liu S., Shi Z., Jiang S., Lu L. Fusion mechanism of 2019-nCoV and fusion inhibitors targeting HR1 domain in spike protein. Cell Mol Immunol. 2020; 17 (7): 765-7. DOI: https://www.doi.org/10.1038/s41423-020-0374-2

6. Bohn M.K., Loh T.P., Wang C.-B., Mueller R., Koch D., Sethi S., Rawlinson W. D., Clementi M., Erasmus R., Leportier M., Grimmler M., Yuen K. Y., Mancini N., Kwon G. C., Menezes M. E., Patru M.-M., Gramegna M., Singh K., Najjar O., Ferrari M., Horvath A. R., Lippi G., Adeli K. and the IFCC Taskforce on COVID-19 Preprints 2020; 2020050413, DOI: https://www.doi.org/10.20944/preprints202005.0413.v1

7. Пащенков М.В., Хаитов М.Р. Иммунный ответ против эпидемических коронавирусов. Иммунология. 2020; 41 (1): 5-18. DOI: https://www.doi.org/10.33029/0206-4952-2020-41-1-5-18

8. Bohn M.K. et al. IFCC Interim guidelines on serological testing of antibodies against SARS-CoV-2. Clin. Chem. Lab. Med. CCLM. De Gruyter, 2020; 58 (12): 2001-8. DOI: https://www.doi.org/10.1515/cclm-2020-1413

9. Гудима Г.О., Хаитов Р.М., Кудлай Д.А., Хаитов М.Р. Молекулярно-иммунологические аспекты диагностики, профилактики и лечения коронавирусной инфекции. Иммунология. 2021; 42 (3): 198-210. DOI: https://www.doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-3-198-210

10. Byazrova M., Yusubalieva G., Spiridonova A., Efimov G., Mazurov D., Baranov K., Baklaushev V., Filatov A. Pattern of circulating SARS-CoV-2-specific antibody-secreting and memory B-cell generation in patients with acute COVID-19. Clin Transl Immunology. 2021; 10 (2): e1245. DOI: https://www.doi.org/10.1002/cti2.1245

11. Byazrova M.G., Kulemzin S.V., Astakhova E.A., Belovezhets T.N., Efimov G.A., Chikaev A.N., Kolotygin I.O., Gorchakov A.A., Taranin A.V., Filatov A.V. Memory B cells induced by Sputnik V vaccination produce SARS-CoV-2 neutralizing antibodies upon ex vivo restimulation. Front Immunol. 2022; 13: 840707. DOI: https://www.doi.org/10.3389/fimmu.2022.840707

12. Byazrova M.G., Astakhova E.A., Minnegalieva A.R., Prilipov A.G., Gorchakov A.A., Filatov A.V. Anti-Ad26 humoral immunity does not compromise neutralizing antibody responses following Ad26-based booster vaccination with Gam-COVID-Vac. Res. Square. 2022. DOI: https://www.doi.org/10.21203/rs.3.rs-1649181/v1

13. Astakhova E.A., Byazrova M.G., Yusubalieva G.M., Kulemzin S.V., Kruglova N.A., Prilipov A.G., Baklaushev V.P., Gorchakov A.A., Taranin A.V., Filatov A.V. Functional profiling of in vitro reactivated memory B cells following natural SARS-CoV-2 infection and GamCOVID-Vac vaccination. Cells. 2022; 11 (13): 1991. DOI: https://www.doi.org/10.3390/cells11131991

14. Sastre P., Rueda P., Vela C. Comparative study of seroneutralization and antibody response against the N-Protein of SARS-CoV-2. 2020.

15. Lapa D., Grousova D.M., Matusali G., Meschi S., Colavita F., Bettini A., Gramigna G., Francalancia M., Garbuglia A.R., Girardi E., Puro V., Antinori A., Kovyrshina A.V., Dolzhikova I.V., Shcheblyakov D.V., Tukhvatulin A.I., Zubkova O.V., Logunov D.Y., Naroditsky B.S., Vaia F., Gintsburg A.L. Retention of neutralizing response against SARS-CoV-2 omicron variant in Sputnik V vaccinated individuals.Vaccines. 2022; 10 (5): 817. DOI: https://doi.org/10.3390/vaccines10050817

16. La Marca A., Capuzzo M., Paglia T., Roli L., Trenti T., Nelson S.M. Testing for SARS-CoV-2 (COVID-19): a systematic review and clinical guide to molecular and serological in-vitro diagnostic assays. Reprod. Biomed. Online. 2020; 41 (3): 483-99. DOI: https://www.doi.org/10.1016/j.rbmo.2020.06.001

17. Скворцова В.И. Изучение молекулярно-генетических механизмов влияния вируса SARS-CoV-2 на человека для разработки средств диагностики и защиты. Доклад на Общем собрании РАН, 14-15 декабря 2021 года, г. Москва. URL: https://fmba.gov.ru/upload/medialibrary/90f/2ylt93hxqqz2yn4ai0ud8fopk2owj24a/Prezentatsiya-V.I.-Skvortsovoy.pdf

18. Кармишин А.М., Носов Н.Ю., Поступайло В.Б., Жигарловский Б.А., Круглов А.А., Петухов А.Н. Метод количественной оценки напряженности и длительности иммунитета к SARS-COV-2 и динамики изменения титров антител. Медицина экстремальных ситуаций. 2021; 23 (2): 5-12. DOI: https://www.doi.org/10.47183/mes.2021.019

19. Андреев И.В., Нечай К.О., Андреев А.И., Зубарева А.П., Есаулова Д.Р., Аленова А.М., Николаева И.А., Чернявская О.П., Ломоносов К.С., Шульженко А.Е., Курбачева О.М., Латышева Е.А., Шартанова Н.В., Назарова Е.В., Романова Л.В., Черченко Н.Г., Смирнов В.В., Аверков О.В., Мартынов А.И., Вечорко В.И., Гудима Г.О., Кудлай Д.А., Хаитов М.Р., Хаитов Р.М. Поствакцинальный и постинфекционный гуморальный иммунный ответ на инфекцию SARS-CoV-2. Иммунология. 2022; 43 (1): 18-32. DOI: https://www.doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-1-18-32

20. Андреев А.И., Андреев И.В., Нечай К.О., Есаулова Д.Р., Баклакова О.С., Вечорко В.И., Шиловский И.П., Кофиади И.А., Гудима Г.О., Мартынов А.И., Смирнов В.В., Кудлай Д.А., Хаитов М.Р. Взаимосвязь между возрастом и напряженностью поствакцинального гуморального иммунного ответа у лиц, ранее переболевших COVID-19. Иммунология. 2022; 43 (5): 583-92. DOI: https://www.doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-5-583-592

21. Астахова Е.А., Бязрова М.Г., Миляев С.М., Сухова М.М., Михайлов А.А., Морозов А.А., Прилипов А.Г., Филатов А.В. Анализ методом проточной цитометрии антител против шиповидного белка SARS-CoV-2 в сыворотке вакцинированных добровольцев. Иммунология. 2022; 43 (4): 447-57. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-4-447-457

22. Reslova N., Michna V., Kasny M., Mikel P., Kralik P. xMAP Technology: Applications in Detection of Pathogens. Front Microbiol. 2017; 8: 55. DOI: https://www.doi.org/10.3389/fmicb.2017.00055

23. Robin X., Turck N., Hainard A., Tiberti N., Lisacek F., Sanchez J.-C., Müller M. pROC: an open-source package for R and S+ to analyze and compare ROC curves. BMC Bioinformatics. 2011; 12: 77. DOI: https://www.doi.org/10.1186/1471-2105-12-77

Материалы данного сайта распространяются на условиях лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License («Атрибуция - Всемирная»)


Журналы «ГЭОТАР-Медиа»