Продукция цитокинов наивными В-лимфоцитами и В-клетками памяти при стимуляции in vitro

• Бязрова Мария Георгиевна
• Порошина Алина Сергеевна
• Сухова Мария Михайловна
• Фролов Евгений Александрович
• Шилкина Анна Борисовна
• Латышева Елена Александровна
• Латышева Татьяна Васильевна
• Филатов Александр Васильевич

Резюме

Введение. В литературе довольно подробно описана роль отдельных цитокинов в индукции дифференцировки различных субпопуляций В-клеток в плазмабласты и плазматические клетки. В то же время остается малоизученным вопрос о том, какие цитокины продуцируют сами В-лимфоциты и их субпопуляции.

Цель исследования - определить цитокиновый профиль В-лимфоцитов человека при стимуляции in vitro. В задачи исследования также входило сравнительное изучение спектра цитокинов, секретируемых наивными В-лимфоцитами, а также В-клетками памяти с переключенным и непереключенным синтезом Ig.

Материал и методы. Субпопуляции наивных В-лимфоцитов, а также В-клеток памяти с переключенным (IgG⁺CD27⁺) и непереключенным (IgM⁺CD27⁺) синтезом Ig выделяли с помощью проточного сортировщика клеток. Выделенные В-лимфоциты стимулировали in vitro в присутствии экзогенного ИЛ-21 и фидерных клеток, несущих молекулу CD40L. Супернатанты, собранные от стимулированных В-клеток, анализировали на наличие цитокинов. Исследование носило скрининговый характер. Чтобы охватить максимально широкую панель цитокинов, в работе использовался высокопроизводительный метод мультиплексного анализа. В тестируемую панель входили следующие цитокины: ЭФР, эотаксин, Г-КСФ, ГМ-КСФ, ИФН-α2, ИФН-γ, ИЛ-10, ИЛ-12P40, ИЛ-12P70, ИЛ-13, ИЛ-15, ИЛ-17A, ИЛ-1RA, ИЛ-1α, ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-7, ИЛ-8, IP-10, MCP-1, MIP-1α, MIP-1β, RANTES, ФНОα, ФНОβ, VEGF, ФРФ-2, ТФРα, Flt-3L, фракталкин, GRO, MCP-3, MDC, PDGF-AA, PDGF-AB/BB и ИЛ-9.

Результаты. Были получены и функционально охарактеризованы 3 субпопуляции стимулированных В-лимфоцитов: наивные В-лимфоциты, В-клетки памяти с переключенным (IgG⁺CD27⁺) и непереключенным (IgM⁺CD27⁺) синтезом Ig. Стимулированные В-лимфоциты характеризовались активной пролиферацией, приобретали фенотип плазмабластов и секретировали Ig. В-лимфоциты, стимулированные in vitro в системе ИЛ-21/CD40L, продуцировали широкий спектр цитокинов. В наибольшей степени секретировались IP-10, MDC и MCP-1. Секреция ИЛ-17A, ИЛ-12P70, ТФРα, ИФН-γ, ИЛ-3, ИЛ-5 и ИЛ-1β была ниже уровня детекции. Наивные В-клетки секретировали цитокины ИЛ-10, MCP-3, MDC, ИЛ-1α, MCP-1, ФНОα и ФНОβ более активно, чем В-клетки памяти. Для цитокинов ИЛ-10, MDC, MCP-1, ФНОα и ФНОβ значимая разница прослеживалась в отношении обеих субпопуляций В-клеток памяти. Для MCP-3 значимая разница наблюдалась только в отношении В-клеток памяти с переключенным синтезом Ig, а для ИЛ-1α - только по сравнению с В-клетками памяти с непереключенным синтезом Ig.

Заключение. Определены цитокиновые профили активированных В-лимфоцитов и их субпопуляций. Полученные результаты показывают, что продукция цитокинов В-клетками в значительной степени зависит от активации и дифференцировки В-лимфоцитов.

Ключевые слова:В-лимфоциты; стимуляция В-лимфоцитов; цитокины; система мультиплексного анализа Luminex; ИЛ-21/CD40L стимуляция; В-клетки памяти; плазмабласты; ELISPOT

Введение

Созревание и дифференцировка В-лимфоцитов представляет собой сложный многоступенчатый процесс [1]. Важные этапы созревания В-лимфоцитов проходят в зародышевых центрах вторичных лимфоидных органов, таких как селезенка и лимфатические узлы. Зародышевые центры представляют собой специализированные структуры, в которых В-клетки подвергаются быстрой пролиферации, соматической гипермутации и рекомбинации с переключением классов Ig и образованием высокоаффинных антител [2]. Во время созревания в зародышевых центрах В-клетки взаимодействуют с антиген-презентирующими клетками и Т-хелперами. Это взаимодействие приводит к отбору В-клеток с высокоаффинными рецепторами, что имеет решающее значение для их способности эффективно распознавать и нейтрализовать вторгшиеся патогены. Все эти процессы в значительной степени находятся под контролем антиген-специфических Т-хелперных (Th) клеток, а также антиген-презентирующих клеток. В-лимфоциты взаимодействуют с Th- и антиген-презентирующими клетками с помощью межклеточных контактов с участием таких рецепторов, как CXCR5, PD-1, ICOS и CD40L [3], а также путем обмена цитокиновыми сигналами, включая интерлейкин-4 (ИЛ-4), ИЛ-10 и ИЛ-21 [4]. Набор цитокинов, которые производят Т-клетки и макрофаги, довольно хорошо известен [5]. В него, в частности, входят такие цитокины, как ИЛ-3, ИЛ-5 и ИЛ-17A (продуцируются активированными Т-клетками), ИЛ-1β и ТФРα (макрофаги), а также ИФН-γ (НК-клетки) [6].

До сих пор в литературе основное внимание уделялось описанию роли отдельных цитокинов в дифференцировке различных субпопуляций В-клеток в плазмабласты и плазматические клетки. При этом довольно мало известно о том, какие цитокины продуцируют сами В-лимфоциты и их субпопуляции. Для изучения цитокинов, продуцируемых В-клетками, необходима модель, которая может in vitro воспроизводить основные процессы, протекающие в зародышевых центрах. Такой моделью может являться стимуляция в системе ИЛ-21/CD40L. ИЛ-21 является одним из наиболее критических факторов созревания В-клеток. ИЛ-21 действует как ключевой медиатор зависимых от Т-клеток иммунных ответов и участвует в развитии и функционировании различных иммунных клеток [7]. Он способствует пролиферации и дифференцировке В-клеток, усиливает выработку антител. ИЛ-21 продуцируется преимущественно активированными CD4⁺-T-клетками и НКT-клетками, однако наибольшая продукция приходится на субпопуляцию фолликулярных Т-хелперов (Tfh). Молекулой, которая регулирует функции В-клеток посредством прямого межклеточного контакта, является лиганд рецептора CD40 (CD40L) [8]. Взаимодействие CD40/CD40L индуцирует активацию, бластогенез и пролиферацию В-клеток [9]. Таким образом, ИЛ-21/CD40L-стимуляция с помощью экзогенного ИЛ-21 и фидерных клеток, экспрессирующих молекулу CD40L, является наиболее простой моделью, которая воспроизводит in vitro основные процессы, протекающие в зародышевых центрах [10].

Цель настоящего исследования - изучение профиля цитокинов, продуцируемых В-лимфоцитами человека при стимуляции in vitro в системе ИЛ-21/CD40L. Была также поставлена задача провести сравнительное изучение цитокинов, секретируемых наивными В-лимфоцитами, а также В-клетками памяти с переключенным и непереключенным синтезом Ig. Поскольку исследование носило скрининговый характер, для выполнения поставленной задачи мы использовали высокопроизводительный метод мультиплексного анализа Luminex.

Материал и методы

Участники исследования. В исследуемую группу были включены 10 здоровых добровольцев (3 женщины и 7 мужчин, средний возраст - 27 лет, в диапазоне от 23 до 39 лет). Исследование прошло предварительную этическую экспертизу и было одобрено Этическим комитетом Института иммунологии (протокол № 3-1, 11 марта 2020 г.). Исследование выполнено в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации "Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека в качестве испытуемого". Письменное информированное согласие получено от каждого участника исследования перед выполнением каких-либо процедур.

Выделение и стимуляция В-лимфоцитов. Мононуклеарные клетки выделяли из периферической крови, собранной в гепаринизированные вакуумные пробирки. Кровь разбавляли 1 : 1 физиологическим раствором, забуференным фосфатом (ПанЭко, Россия), около 10 мл крови наслаивали на 3 мл раствора фиколла ("ПанЭко", Россия) и центрифугировали в течение 30 мин при 2000 об/мин. Лимфоциты собирали пипеткой и промывали PBS, центрифугируя при 1700 об/мин в течение 10 мин. В-лимфоциты обогащали методом отрицательной иммуномагнитной сепарации с использованием набора Dynabeads Untouched human B cell kit (Thermo Fisher Scientific, США). Чистота выделенных В-лимфоцитов составляла не менее 98 %. Для фенотипирования и сортировки В-лимфоциты окрашивали следующими антителами: CD19-PE (клон LT19), CD27-PECy5.5 (клон LT27), CD38-PECy7 (клон LT38), IgG-FITC (клон CH1) и IgM-FITC (клон MA2), которые ранее были получены в нашей лаборатории [11]. Флуоресценцию клеток регистрировали с помощью проточного цитометра CytoFLEX S (Beckman Coulter, США), оснащенного тремя диодными лазерами 488, 561 и 638 нм. Клетки сортировали на проточном сортировщике SH800S (Sony Biotechnology, США).

Выделенные В-лимфоциты суспендировали в среде DMEM/F12, содержащей 10 % фетальной бычьей сыворотки, 24 мкг/мл гентамицина, 1 мМ пирувата натрия, 10 мМ HEPES (все "ПанЭко", Россия). Клетки высевали по 10 000 клеток на лунку в 96-луночный планшет и культивировали 7 дней при 37 °C в 5 % CO₂ в присутствии 25 нг/мл ИЛ-21 (Peprotech, США) и фидерных клеток A549, несущих CD40L и обработанных 10 мкг/мл митомицина-С ("Киова Хакко Когио", Япония) [12]. Индекс пролиферации определяли как отношение количества клеток на 7-й день культивирования к исходному количеству клеток.

Определение Ig методом иммуноферментного анализа (ИФА). 96-луночные планшеты с высокой сорбционной емкостью (Greiner, ФРГ), покрывали антителами против IgG (клон G4A6) или IgM (клон CH2) в концентрации 10 мкг/мл в течение ночи при 4 °C. Затем планшеты обрабатывали блокирующим буфером для ИФА ("Хема", Россия). Супернатанты поликлонально стимулированных В-клеток серийно разбавляли и инкубировали в течение 1 ч в планшетах для ИФА, после чего 3 раза промывали PBS/Твин20. Для количественного определения IgG и IgM использовали моноклональные антитела CH1 и MA2, конъюгированные

с пероксидазой хрена. Реагенты для вторичной детекции инкубировали в течение 1 ч, после чего планшеты 4 раза промывали PBS/Твин20 и реакцию проявляли добавлением раствора хромогена TMB ("Хема", Россия). Реакцию останавливали с помощью 1 M HCl. Оптическую плотность при 450 нм измеряли с использованием планшетного ридера iMark (BioRad, США). Полученные данные анализировали с помощью программы Zemfira 4.0 (BioRad, США). Концентрацию антител вычисляли на основе стандартных кривых, полученных с использованием эталонных образцов.

Определение Ig-секретирующих клеток методом ELISpot (Enzyme-Linked ImmunoSpot Analysis). Лунки 96-луночного планшета Multiscreen HTS Filter Plates (Merck, США) с размером пор 0,45 мкм покрывали кроличьими антителами против IgG или IgM человека (R&D Systems, США) в концентрации 10 мкг/лунку. В-клетки, полученные после поликлональной стимуляции, промывали в PBS и высевали в лунки (от 100 до 3000 клеток на лунку) предобработанных планшетов, инкубировали в течение 16 ч при 37 °C, 5 % CO₂. Пятна, которые соответствовали антителосекретирующим клеткам, визуализировали с использованием IgG- или IgM-специфического реагента для детекции из набора B Cell ELISpot Development (R&D Systems, США). После завершения реакции планшеты сушили на воздухе и сканировали с помощью ридера CTL ImmunoSpot Analyzer (CTL, США).

Мультиплексный анализ цитокинов. Супернатанты от стимулированных В-клеток собирали через 7 дней после начала стимуляции и отделяли от клеточного дебриса путем центрифугирования при 8000 об/мин в течение 5 мин. Далее супернатанты анализировали на наличие цитокинов с использованием набора Luminex (MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Premixed 41 Plex, Millipore, США). В тестируемую панель входили следующие цитокины: ЭФР, эотаксин, Г-КСФ, ГМ-КСФ, ИФН-α2, ИФН-γ, ИЛ-10, ИЛ-12P40, ИЛ-12P70, ИЛ-13, ИЛ-15, ИЛ-17A, ИЛ-1RA, ИЛ-1α, ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-7, ИЛ-8, IP-10, MCP-1, MIP-1α, MIP-1β, RANTES, ФНОα, ФНОβ, VEGF, ФРФ-2, ТФРα, Flt-3L, фракталкин, GRO, MCP-3, MDC, PDGF-AA, PDGF-AB/BB и ИЛ-9. Мультиплексный анализ проводили в соответствии с инструкциями производителя (Millipore, США).

Вкратце, микросферы, связанные с антителами, инкубировали с супернатантами в течение 1 ч. После промывки микросферы инкубировали с биотинилированными вторичными антителами. Реакцию проявляли окрашиванием микросфер с помощью конъюгата стрептавидина с фикоэритрином. Все инкубации проводились при комнатной температуре на шейкере для планшетов в соответствии с инструкциями производителей. Измерения производили на приборе MagPix equipment (Luminex, США). Концентрации образцов определяли по средней интенсивности флуоресценции по сравнению с 4- или 5-параметрической логистической стандартной кривой, полученной из стандартов с известной концентрацией, предоставленных производителем набора. Массив микросфер калибровали перед каждым анализом пробы и регулярно проверяли в соответствии с инструкциями производителя. Результаты мультиплексного анализа представлены в виде логарифмически преобразованных концентраций (пг/мл).

Статистическая обработка данных. Данные проточной цитометрии анализировали с помощью программы FlowJo X 10.0.7 (Becton Dickinson, США). Данные мультиплексного анализа обрабатывали с использованием программного обеспечения Belysa Immunoassay Curve Fitting Software (Luminex, США). Для построения графиков и статистического анализа использовали программное обеспечение GraphPad Prism версии 8.4.3 (GraphPad, США). Данные, полученные от одного донора, рассматривали как один эксперимент (n). Значимость различий между выборками оценивали с помощью теста Фридмана с последующим тестом Данна. Различия сравниваемых параметров считались статистически значимыми при p ≤ 0,05. Данные на гистограммах показывают медиану и межквартильный размах.

Результаты

Прежде чем приступить к основной задаче нашей работы по определению профиля цитокинов, секретируемых отдельными субпопуляциями В-лимфоцитов при стимуляции in vitro, мы отработали методику получения субпопуляций В-лимфоцитов в предварительных экспериментах, а также охарактеризовали эти субпопуляции по способности к пролиферации и секреции Ig. После ИЛ-21/CD40L стимуляции на 7-й день тестировали В-клетки и супернатанты культур. Клетки всех исследуемых субпопуляций заметно пролиферировали (рис. 1А). Наиболее активно делились наивные В-лимфоциты, в меньшей степени пролиферировали В-клетки памяти (медиана индекса пролиферации 6,2 и 2,0 соответственно). Стимулированные В-лимфоциты приобретали фенотип плазмабластов. Медианы долей CD27⁺CD38⁺-клеток составили 10, 60 и 80 %, соответственно (рис. 1Б). В субпопуляциях наивных В-лимфоцитов, а также В-клеток памяти с непереключенным синтезом Ig наблюдалась заметная секреция IgM, но не IgG. Напротив, в культурах В-клеток памяти с переключенным синтезом Ig отмечалась продукция IgG, но не IgM. Секреция Ig регистрировалась как с помощью ИФА (рис. 1В), так и ELISpot (рис. 1Г).

В субпопуляциях IgM⁺IgD⁺ и IgM⁺CD27⁺ с использованием ELISpot наблюдались отдельные клетки, которые секретировали IgG. Это может быть связано с некоторым неспецифическим фоном в этом тесте, но также может свидетельствовать о переключении синтеза Ig, которое происходило при ИЛ-21/CD40L-стимуляции В-клеток. Таким образом, нами были получены функционально активные стимулированные клетки трех основных субпопуляций В-лимфоцитов: наивные, а также В-клетки памяти с переключенным и непереключенным синтезом Ig.

Убедившись, что полученные субпопуляции В-лимфоцитов являются функционально активными, мы перешли к определению профиля цитокинов, которые секретировали клетки. Концентрацию цитокинов в супернатантах культур оценивали с помощью системы мультиплексного анализа Luminex. Результаты представлены в таблице. В супернатантах ИЛ-21/CD40L-стимулированных клеток были определены уровни 40 цитокинов. Содержание различных цитокинов варьировало в диапазоне от 1 пг/мл до 12 нг/мл. В группу с высокой секрецией входили цитокины IP-10, MDC и MCP-1, концентрация которых превышала 2 нг/мл. Цитокины ИЛ-17A, ИЛ-12P70, ТФРα, ИФН-γ, ИЛ-3, ИЛ-5 и ИЛ-1β регистрировались на уровне ≤ 3 пг/мл, что находилось ниже уровня отсечки. Концентрация других цитокинов равномерно распределялась между этими экстремальными значениями (рис. 2). В контрольных экспериментах с супернатантами фидерных клеток без добавления В-лимфоцитов регистрировались фоновые уровни цитокинов.

Цитокиновые профили отдельных субпопуляций в целом не отличались друг от друга. Однако попарное сравнение выявило 7 цитокинов, для которых обнаруживалась статистически значимая разница. Наивные В-клетки секретировали цитокины ИЛ-10, MCP-3, MDC, ИЛ-1α, MCP-1, ФНОα и ФНОβ более активно, чем В-клетки памяти (рис. 3). Для цитокинов ИЛ-10, MDC, MCP-1, ФНОα и ФНОβ значимая разница прослеживалась в отношении обоих субпопуляций В-клеток памяти. Для MCP-3 достоверное отличие наблюдалось только в отношении В-клеток памяти с переключенным синтезом Ig, а для ИЛ-1α только при сравнении с В-клетками памяти с непереключенным синтезом Ig. Ни по одному из 40 цитокинов не наблюдалось значимых различий между отдельными субпопуляциями В-клеток памяти (см. таблицу).

Обсуждение

Для количественного определения цитокинов наиболее часто используется ИФА. Однако этот метод является малопроизводительным и одновременно позволяет определять довольно ограниченный набор цитокинов. Для проведения скрининговых исследований требуется применение более производительных методов. Такие возможности предоставляют различные системы мультиплексного анализа [13]. Из доступных систем мы выбрали Luminex с наиболее широкой цитокиновой панелью, которая включала более 40 различных аналитов.

Мы обнаружили, что стимулированные В-лимфоциты секретируют довольно богатый спектр цитокинов. Представляет интерес сравнение этого набора с теми цитокинами, которые секретируют другие типы клеток. Считается, что наиболее активными продуцентами цитокинов являются макрофаги, которые секретируют цитокины как конститутивно, так и индуцированно в ответ на воспалительные раздражители, например, на патогены. Макрофаги являются основными источниками таких провоспалительных цитокинов, как ФНОα, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8 и ИЛ-12 [6]. Наряду с этим они также активно продуцируют некоторые антивоспалительные цитокины, как например ИЛ-10 и ТФРβ и хемокины MIP-2α, RANTES и ИЛ-8.

Т-хелперы характеризуются различными цитокиновыми профилями в зависимости от того, к какой субпопуляции они принадлежат [14]. Th1-клетки отличаются повышенной секрецией ИФН-γ и ФНОα, а Th2-клетки в основном секретируют ИЛ-4, ИЛ-5 и ИЛ-13 [15]. Th17-клетки специализируются на продукции ИЛ-17A, ИЛ-17F, ИЛ-22, ИЛ-26 и ИФН-γ [16]. Особенностью фолликулярных Т-хелперов является продукция ИЛ-21 и ИЛ-4 [17].

Цитокиновый профиль В-лимфоцитов изучен в меньшей степени [18]. Как правило, В-лимфоциты продуцируют цитокины только после стимуляции. В частности, было показано, что при активации В-клеток человека путем лигирования В-клеточного рецептора BCR и CD40 они секретируют цитокины ИЛ-6, ФНОα и LTα [19]. В отличие от Т-клеток, отдельные субпопуляции В-клеток не отличаются по профилям цитокинов [15]. Тем не менее было показано, что экспрессия ИЛ-10 связана с принадлежностью В-клеток к регуляторной субпопуляции Breg [20].

Нами было обнаружено, что субпопуляция наивных В-лимфоцитов отличается от В-клеток памяти по секреции таких цитокинов, как ИЛ-10, MCP-1, MCP-3, MDC, ИЛ-1α, ФНОα и ФНОβ. Все эти цитокины проявляют плейотропное действие и участвуют в различных иммунных реакциях, воспалительных процессах и кроветворении, тем не менее у каждого имеются некоторые особенности.

ИЛ-10 в основном продуцируется активированными макрофагами, в меньшей степени В-лимфоцитами [21]. Его основная активность связана с подавлением активации макрофагов и продукцией ФНО, ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12 и ГМ-КСФ [6]. ИЛ-10 также повышает выживаемость, пролиферацию В-клеток и выработку антител [22]. Одной из наиболее интересных особенностей этого цитокина является его связь с Breg [20]. MCP-1 и MCP-3 относятся к наиболее плюрипотентным хемокинам. Они активирует все типы лейкоцитов, связываясь по крайней мере с четырьмя различными хемокиновыми рецепторами. Эти хемокины играют важную роль в нормальном гомеостазе, а также при различных патологиях, включая рак, аутоиммунные заболевания и хроническое воспаление [23]. Важной особенностью MCP-1 и MCP-3 является то, что они привлекают макрофаги во время воспаления и метастазирования. MDC участвует в иммунорегуляторных и воспалительных процессах [24]. Он проявляет хемотаксическую активность в отношении моноцитов, дендритных клеток, НК-клеток и хронически активированных Т-лимфоцитов. Он также демонстрирует умеренную активность в отношении первично активированных Т-лимфоцитов, но не обладает хемоаттрактантной активностью в отношении нейтрофилов, эозинофилов и покоящихся Т-лимфоцитов. Известно, что макрофаги являются основным источником ИЛ-1α, тем не менее он также может выделяться В-клетками [6]. ФНОα и ФНОβ принадлежат к одному семейству, оба являются провоспалительными цитокинами. Они участвуют в развитие лимфатических узлов [25].

Проведенный беглый обзор функциональных характеристик отмеченных цитокинов показывает, что все они участвуют в осуществлении функций В-лимфоцитов путем привлечения в зародышевые центры макрофагов и активированных Т-клеток, а также влияют на функционирование самих В-лимфоцитов. После того как в скрининговом режиме мы определили цитокины, экспрессия которых отличалась в наивных В-лимфоцитах и В-клетках памяти, можно перейти к более сфокусированному исследованию этих цитокинов и их роли в физиологии В-лимфоцитов.

Заключение

В исследовании были определены профили цитокинов, продуцируемых активированными В-лимфоцитами и их субпопуляциями. Полученные результаты показывают, что продукция цитокинов В-клетками значительно зависит от активации и дифференцировки В-лимфоцитов.

Литература

1. Cyster J.G., Allen C.D.C. B cell responses: cell interaction dynamics and decisions. Cell. 2019; 177: 524-40. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cell.2019.03.016

2. De Silva N.S., Klein U. Dynamics of B cells in germinal centres. Nat Rev Immunol. 2015; 15: 137-48. DOI: https://doi.org/10.1038/nri3804

3. Mintz M.A., Cyster J.G. T follicular helper cells in germinal center B cell selection and lymphomagenesis. Immunol Rev. 2020; 296: 48-61. DOI: https://doi.org/10.1111/imr.12860

4. Vazquez M.I., Catalan-Dibene J., Zlotnik A. B cells responses and cytokine production are regulated by their immune microenvironment. Cytokine. 2015; 74: 318-26. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cyto.2015.02.007

5. Liu C., Chu D., Kalantar-Zadeh K., George J., Young H.A., Liu G. Cytokines: from clinical significance to quantification. advanced science. 2021; 8: 2004433. DOI: https://doi.org/10.1002/advs.202004433

6. Arango Duque G., Descoteaux A. Macrophage cytokines: involvement in immunity and infectious diseases. Front Immunol. 2014; 5: 491. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2014.00491

7. Franke F., Kirchenbaum G.A., Kuerten S., Lehmann P.V. IL-21 in conjunction with anti-CD40 and IL-4 constitutes a potent polyclonal B cell stimulator for monitoring antigen-specific memory B cells. Cells. 2020; 9: 433. DOI: https://doi.org/10.3390/cells9020433

8. Elgueta R., Benson M.J., De Vries V.C., Wasiuk A., Guo Y., Noelle R.J. Molecular mechanism and function of CD40/CD40L engagement in the immune system. Immunol Rev. 2009; 229: 152-72. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1600-065X.2009.00782.x

9. Бязрова М.Г., Астахова Е.А., Спиридонова А.Б., Васильева Ю.В., Прилипов А.Г., Филатов А.В. Стимуляция В-лимфоцитов человека in vitro с помощью ИЛ-21/CD40L и их характеристика. Иммунология. 2020; 41 (1): 18-27. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2020-41-6-18-27

10. Kwakkenbos M.J., Helden P.M., Beaumont T., Spits H. Stable long-term cultures of self-renewing B cells and their applications. Immunol Rev. 2016; 270: 65-77. DOI: https://doi.org/10.1111/imr.12395

11. Лушова А.А., Жеремян Э.А., Астахова Е.А., Спиридонова А.Б., Бязрова М.Г., Филатов А.В. Субпопуляции В-лимфоцитов: функции и молекулярные маркеры. Иммунология. 2019; 40 (6): 63-75. DOI: https://doi.org/10.24411/0206-4952-2019-16009

12. Астахова Е.А., Фролов Е.А., Шилкина А.Б., Бязрова М.Г., Латышева Е.А., Латышева Т.В., Филатов А.В. Стимуляции В-клеток в системе ИЛ-21/CD40L в норме и у пациентов с общей вариабельной иммунной недостаточностью. Иммунология. 2021; 41 (6): 631-40. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-6-631-640

13. Lash G.E., Pinto L.A. Multiplex cytokine analysis technologies. Expert Rev Vaccines. 2010; 9 (10): 1231-7. DOI: https://doi.org/10.1586/erv.10.110

14. Raphael I., Nalawade S., Eagar T.N., Forsthuber T.G. T cell subsets and their signature cytokines in autoimmune and inflammatory diseases. Cytokine. 2015; 74: 5-17. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cyto.2014.09.011

15. Westerhof L.M., McGuire K., MacLellan L., Flynn A., Gray J.I., Thomas M. et al. Multifunctional cytokine production reveals functional superiority of memory CD4 T cells. Eur J Immunol. 2019; 49: 2019-29. DOI: https://doi.org/10.1002/eji.201848026

16. Wilson N.J., Boniface K., Chan J.R., McKenzie B.S., Blumenschein W.M., Mattson J.D., et al. Development, cytokine profile and function of human interleukin 17-producing helper T cells. Nat Immunol. 2007; 8: 950-7. DOI: https://doi.org/10.1038/ni1497

17. Li H., Pauza C.D. CD25⁺ Bcl6^low T follicular helper cells provide help to maturing B cells in germinal centers of human tonsil. Eur J Immunol. 2015; 45: 298-308. DOI: https://doi.org/10.1002/eji.201444911

18. De Gruijter N.M., Jebson B., Rosser E.C. Cytokine production by human B cells: role in health and autoimmune disease. Clin Exp Immunol. 2022; 210: 253-62. DOI: https://doi.org/10.1093/cei/uxac090

19. Duddy M.E., Alter A., Bar-Or A. Distinct profiles of human B cell effector cytokines: a role in immune regulation? J Immunol. 2004; 172: 3422-27. DOI: https://doi.org/10.4049/jimmunol.172.6.3422

20. Glass M.C., Glass D.R., Oliveria J-P., Mbiribindi B., Esquivel C.O., Krams S.M., et al. Human IL-10-producing B cells have diverse states that are induced from multiple B cell subsets. Cell Rep. 2022; 39: 110728. DOI: https://doi.org/10.1016/j.celrep.2022.110728

21. Mosser D.M., Zhang X. Interleukin-10: new perspectives on an old cytokine. Immunol Rev. 2008; 226: 205-18. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1600-065X.2008.00706.x

22. Radomir L., Kramer M.P., Perpinial M., Schottlender N., Rabani S., David K., et al. The survival and function of IL-10-producing regulatory B cells are negatively controlled by SLAMF5. Nat Commun. 2021; 12: 1893. DOI: https://doi.org/10.1038/s41467-021-22230-z

23. Singh S., Anshita D., Ravichandiran V. MCP-1: Function, regulation, and involvement in disease. Int Immunopharmacol. 2021; 101: 107598. DOI: https://doi.org/10.1016/j.intimp.2021.107598

24. Mantovani A., Gray P.A., Van Damme J., Sozzani S. Macrophage-derived chemokine (MDC). J Leukoc Biol. 2000; 68: 400-4

25. Furtado G.C., Pacer M.E., Bongers G., Bénézech C., He Z., Chen L., et al. TNFα-dependent development of lymphoid tissue in the absence of RORγt+ lymphoid tissue inducer cells. Mucosal Immunol. 2014; 7: 602-14. DOI: https://doi.org/10.1038/mi.2013.79

Материалы данного сайта распространяются на условиях лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License («Атрибуция - Всемирная»)