Сравнение эффективности трансдукции дендритных клеток человека с помощью аденовирусных векторов различных серотипов

• Сухова Мария Михайловна
• Бязрова Мария Георгиевна
• Банделюк Алина Сергеевна
• Зубкова Ольга Вадимовна
• Михайлов Артем Андреевич
• Прилипов Алексей Геннадьевич
• Шмаров Максим Михайлович
• Филатов Александр Васильевич

Резюме

Введение. Аденовирусные (Ad) вакцины с успехом используются для иммунизации против некоторых опухолеспецифических антигенов, а также ряда инфекционных патогенов. Дендритные клетки (ДК) являются профессиональными антиген-представляющими клетками, поэтому их трансдукция под действием Ad-векторов особенно важна для эффективного действия Ad-вакцин.

Цель исследования - определить эффективность трансдукции ДК человека Ad-векторами различных серотипов.

Материал и методы. Мононуклеарные клетки периферической крови здоровых доноров (n = 11) выделяли центрифугированием в градиенте плотности фиколла-верографина. Моноциты обогащали из мононуклеарной фракции крови методом отрицательной иммуномагнитной сепарации с использованием набора Dynabeads. Для дифференцировки в ДК моноциты культивировали in vitro в течение 7 дней в присутствии смеси цитокинов, содержавшей 70 ед/мл гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) и 50 ед/мл ИЛ-4. В результате полученные клетки в высокой плотности экспрессировали маркеры CD11c и HLA-DR, что свидетельствовало о дифференцировке ДК. Полученные клетки инфицировали рекомбинантными Ad-векторами, несущими репортерный ген зеленого флуоресцирующего белка (GFP). Были протестированы 3 серотипа: Ad5, sAd23 и Ad26, а также химерный Аd5-вектор, содержавший на С-конце своего фибера соответствующий домен серотипа Ad35 (Ad5/35). Через 48 ч после инфекции определяли процент трансдуцированных ДК и среднюю интенсивность флуоресценции (MFI) репортерного белка GFP. После трансдукции на GFP⁺- и GFP^--клетках определяли экспрессию антигенов CD86 и HLA-DR.

Результаты. Высокие дозы Ad (от 60 до 1000 БОЕ/клетку) обеспечивали трансдукцию более 90 % ДК. При этом гистограммы флуоресценции GFP⁺-клеток имели одномодальный пик флуоресценции, который отчетливо отстоял от флуоресценции GFP^--клеток. При уменьшении дозы Ad характер гистограмм, полученных при инфекции различными серотипами, отличался друг от друга. При инфекции серотипами Ad5, Ad26 и Ad5/35 при уменьшении дозы вируса снижение трансдукции проявлялось главным образом в падении интенсивности GFP-флуоресценции. Дальнейшее снижение дозы Ad, когда трансдуцированной оказывалась только часть ДК, приводило к существенному падению доли GFP⁺-клеток при умеренном снижении MFI. При инфекции ДК с помощью sAd23 при снижении дозы вируса падение уровня флуоресценции и уменьшение процента GFP⁺-клеток происходило одновременно.

Дозозависимые кривые трансдукции были получены для 11 добровольцев. Сравнение трансдуцирующей эффективности различных серотипов показало, что векторы Ad5/35 и Ad26 обладали наибольшей трансдуцирующей способностью. Для трансдукции 50 % ДК требовались дозы Ad5/35 и Ad26 ~ 1 БОЕ/клетку. Наименьшую эффективность проявляли векторы Ad5 и sAd23. Для трансдукции 50 % ДК требовались дозы Ad5 и sAd23 ~ 140 и 70 БОЕ/клетку соответственно. Аденовирусная трансдукция вызывала увеличение экспрессии на ДК антигенов CD86 и HLA-DR.

Заключение. Ad-векторы по отношению к ДК обладают высокой трансдуцирующей способностью. Трансдукция ДК с помощью серотипов Ad5, Ad26 и Ad5/35 обеспечивает высокую экспрессию трансгена. Аденовирусная трансдукция индуцирует переход ДК в более зрелую форму.

Ключевые слова:аденовирусы (Ad); серотипы Ad; перенос генов; дендритные клетки; трансдукция; GFP

Введение

В качестве средства для доставки генов все большую привлекательность приобретают аденовирусные (Ad) векторы. Они с успехом применяются в генной терапии при лечении моногенных заболеваний, а также при создании разнообразных вакцин [1]. Ad-векторы выгодно отличаются тем, что они способны инфицировать как делящиеся, так и покоящиеся клетки, а также имеют высокую емкость в отношении размера трансгена. Безопасность использования Ad-векторов обеспечивается тем, что они не интегрируются в геном человека, а также применением генетически модифицированных Ad с дефектом репликации.

К возможным мишеням для Ad-векторов относятся дендритные клетки (ДК). Они являются профессиональными антиген-презентирующими клетками, которые играют ключевую роль при иммунном ответе на антиген. Зрелые ДК проявляют себя как мощные стимуляторы пролиферации и развития эффекторных Т-клеток. Напротив, незрелые ДК индуцируют развитие регуляторных Т-клеток (Treg), они участвуют в генерации периферической толерантности [2].

Быстроразвивающейся областью исследований является создание дендритноклеточных вакцин. Раковые клетки зачастую лишены на своей поверхности костимулирующего антигена B7, а также они характеризуются сниженной экспрессией молекул МНС класса I. Поскольку эти молекулы необходимы для успешной активации Т-клеток [3], большинство раковых клеток являются плохими иммуногенами. ДК имеют высокий уровень молекул МНС класса I и II, а также несут ряд костимулирующих и адгезивных молекул. Таким образом, ДК способны обеспечивать все необходимые сигналы для активации Т-клеток. Аутологичные ДК, в которые с помощью рекомбинантного Ad введены опухолеспецифические антигены, способны эффективно активировать цитотоксические Т-лимфоциты против раковых клеток [4].

Активно развиваются исследования, направленные на создание аденовирусных вакцин против ВИЧ-1 [5], туберкулеза [6], малярии [7], вируса гриппа [8], некоторых других бактериальных и вирусных инфекций [9]. Наиболее наглядно высокие потенциальные возможности вакцин на основе Ad недавно были продемонстрированы на примере создания вакцин против COVID-19 [10-13].

Таким образом ДК являются перспективными клетками-мишенями при создании вакцин, направленных на иммунизацию против как инфекционных, так и злокачественных заболеваний. В связи с этим растет потребность в исследованиях, посвященных изучению аденовирусной инфекции ДК. В настоящей работе проведено сравнительное исследование эффективности трансдукции ДК под действием четырех серотипов Ad. Нами также были получены данные о влиянии Ad векторов на фенотип трансдуцированных ДК.

Материал и методы

Участники исследования. В исследовании приняли участие 11 здоровых добровольцев (6 женщин и 5 мужчин, средний возраст - 26 лет, в диапазоне от 24 лет до 31 года). Исследование было выполнено в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации "Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека в качестве испытуемого". Письменное информированное согласие получено от каждого участника исследования перед выполнением каких-либо процедур. Протокол исследования рассмотрен и одобрен этическим комитетом ФГБУ "ГНЦ Институт иммунологии" ФМБА России (№ 3-1, 11 марта 2020 г.).

Получение дендритных клеток. Мононуклеарные клетки периферической крови здоровых доноров выделяли центрифугированием в градиенте плотности фиколла-верографина ("ПанЭко", Россия). Моноциты обогащали из мононуклеарной фракции крови методом отрицательной иммуномагнитной сепарации с использованием набора Dynabeads Untouched Human Monocytes kit (Thermo Fisher Scientific, Cat. No. 11350D, США). Выделенные моноциты культивировали в среде DMEM/F12 с добавлением 10 % фетальной бычьей сыворотки, 24 мкг/мл гентамицина, 1 мМ пирувата натрия, 10 мМ HEPES (все реагенты "ПанЭко", Россия). Для дифференцировки моноцитов в ДК к клеткам добавляли стимулирующую смесь цитокинов, которая состояла из 70 нг/мл гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) и 50 нг/мл ИЛ-4 (SciStore, Россия). Клетки культивировали при 37 °C в 5 % CO₂. Через 7 дней культивирования неприлипшие клетки собирали и использовали для экспериментов в качестве ДК. Все последующие функциональные тесты проводили после удаления цитокинов.

Наработка и очистка аденовирусов. В работе были использованы рекомбинантные Ad человека серотипов Ad5, Ad26 и Ad обезьян sAd23. Все Ad-векторы содержали в своем составе репортерный ген GFP. Аденовекторы Ad5-GFP и sAd23-GFP получали путем трансфекции соответствующих плазмидных конструкций в клетки пакующей линии HEK293 с использованием реагента Metafectene Pro (Biontex, Германия), как было описано ранее [14]. Получение химерного Аd5-вектора, содержащего фибер аденовируса человека Ad35, тоже описано ранее [15]. Ad-вектор на основе Ad человека 26-го серотипа Ad26-GFP был любезно предоставлен канд. биол. наук Т.А. Ожаровской (ФГБУ "НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи" Минздрава России).

Рекомбинантные Ad накапливали в клетках HEK293 вплоть до развития цитопатического эффекта. Далее рекомбинантные Ad очищали и концентрировали ультрацентрифугированием лизатов зараженных клеток в градиенте плотности хлористого цезия. Концентрацию Ad в очищенном препарате определяли спектрофотометрически, учитывая, что одна единица оптической плотности при 260 нм соответствует 1,12 - 10¹² вирусных частиц в 1 мл. Титр препаратов Ad определяли методом бляшкообразования на клетках линии HEK293 и выражали в бляшкообразующих единицах (БОЕ) в пересчете на количество клеток-мишеней.

Вирусная трансдукция. Вирусные препараты разводили в культуральной среде и готовили 6 последовательных двукратных разведений. Разведенный вирус в объеме 50 мкл добавляли в лунки, содержавшие 10 000 клеток-мишеней в объеме 200 мкл. Конечная концентрация векторов варьировала от 0,4 до 1000 БОЕ/клетку. Через 48 ч флуоресценцию трансдуцированных клеток регистрировали с помощью проточного цитометра CytoFLEX S (Beckman Coulter, США).

Проточная цитометрия. ДК для определения поверхностного фенотипа отмывали и обрабатывали антителами против CD11c-PE-Cy7 (клон Bu15, BioLegend, США), CD86 (клон IT2.2, BioLegend, США) и HLA-DR-PE (клон C120, получен нами ранее [16]). Клетки инкубировали с антителами в течение 30 мин при комнатной температуре, после чего их дважды отмывали и анализировали с помощью проточного цитометра CytoFLEX S (Beckman Coulter, США), оснащенного тремя диодными лазерами (488, 561 и 638 нм). Популяцию живых клеток определяли по бипараметрическим цитограммам в координатах прямого (FCS) и бокового (SSC) светорассеяния. Доля клеток, положительных по флуоресценции GFP, отражала эффективность трансдукции. Экспрессию репортерного гена выражали в относительных единицах при измерении средней интенсивности флуоресценции (mean fluorescence intensity, MFI). Обработку цитофлуориметрических данных проводили при помощи программы FlowJo (Becton Dickinson, США).

Статистическая обработка данных. Полученные данные обрабатывали с использованием программного обеспечения GraphPad Prism версия 8.4.3 (GraphPad, США). На графиках представлены медианы (столбцы), усы показывают 1,5-кратный межквартильный размах. Значимость различий между выборками оценивали с помощью критерия Краскела-Уоллиса с поправкой Данна.

Результаты

Эффективность трансдукции ДК с помощью аденовирусных векторов различных серотипов

Моноциты человека 7 дней культивировали in vitro в присутствии 70 ед/мл ГМ-КСФ и 50 ед/мл ИЛ-4, под действием которых они дифференцировались в ДК. Успешность дифференцировки контролировали по фенотипу. Полученные клетки в высокой плотности экспрессировали маркеры CD11c и HLA-DR, что свидетельствовало о дифференцировки ДК.

Далее ДК (10 000 клеток на лунку) инфицировали возрастающими дозами Ad5, sAd23, Ad26 и Ad5/35. Все Ad-векторы несли репортерный ген GFP. При проникновении векторов в клетки-мишени репортерный ген GFP транскрибировался и клетки приобретали зеленую флуоресценцию, которую через 48 ч после инфекции анализировали с помощью проточной цитометрии. При этом мы регистрировали процент GFP-положительных (GFP⁺) клеток и интенсивность флуоресценции клеток (MFI, отн. ед).

Для каждого вектора был подобран диапазон концентраций, в пределах которого регистрировалась полная кривая титрования вируса, начиная с уровня плато при максимальных концентрациях вируса с прохождением точки перегиба и постепенным приближением к нулевому значению процента GFP⁺-клеток при последующем разведении. Для Ad26 и Ad5/35 рабочая область титрования находилась в диапазоне от 0,195 до 15 БОЕ (7 экспериментальных точек), а для Ad5 и sAd23 - от 15 до 500 БОЕ (6 экспериментальных точек).

Трансдукция ДК высокими дозами аденовируса приводила к тому, что не менее 94 % клеток приобретали яркую флуоресценцию. При этом гистограммы флуоресценции GFP⁺-клеток имели одномодальный характер (рис. 1).

При разведении вектора характер гистограмм, полученных при инфекции различными серотипами, отличался друг от друга. Так, при инфекции серотипом Ad26 при уменьшении дозы вируса снижение трансдукции проявлялось главным образом в падении интенсивности GFP-флуоресценции. При этом доля GFP⁺-клеток снижалась не так заметно. Так, например, при дозе Ad26 в 250 БОЕ флуоресцировали около 98 % клеток, которые имели MFI = 3 950 000 отн. ед. При снижении дозы Ad26 до 15 БОЕ/клетку MFI падал примерно в 5 раз - до значения 798 000 отн. ед., в то время как доля GFP⁺-клеток снижалась незначительно - до уровня 94 %. Дальнейшее уменьшении дозы Ad26 до 0,9 БОЕ/клетку напротив, приводило к существенному падению доли GFP⁺-клеток при умеренном снижении MFI. При минимальной дозе вируса 0,9 БОЕ/клетку флуоресцировали 41 % клеток, которые сохраняли довольно высокий уровень флуоресценции (MFI = 70 325 отн. ед.). Эта флуоресценция регистрировалась отдельным пиком, отчетливо отстоящим от пика GFP^--клеток.

Иная картина наблюдалась при инфекции ДК с помощью sAd23. При снижении дозы sAd23 от 500 до 3,8 БОЕ/клетку падение уровня флуоресценции и процента GFP⁺-клеток происходило одновременно. При дозе 3,8 БОЕ/клетку отдельный пик флуоресценции GFP⁺-клеток не регистрировался и их флуоресценция наблюдалась как плечо на пике GFP^--клеток. Векторы Ad5 и Ad5/35 по характеру гистограмм флуоресценции занимали промежуточное положение. При этом Ad5 больше соответствовал трансдукции вектором Ad26, а Ad5/35 - sAd23.

Дозозависимые кривые трансдукции были получены для 11 добровольцев, при этом они мало отличались друг от друга (рис. 2). Это свидетельствует о том, что между донорами не существует больших индивидуальных отличий по чувствительности ДК к аденовирусной инфекции. Точку, которая на кривых "доза-эффект" соответствовала 50 % трансдукции клеток, обозначали как TE₅₀ (Transduction efficacy) и в дальнейшем использовали как меру эффективности трансдукции.

Сравнение трансдуцирующей эффективности различных серотипов приведено на рис. 3. Наибольшей трансдуцирующей способностью обладали векторы Ad5/35 и Ad26. Для трансдукции 50 % ДК требовались дозы Ad5/35 и Ad26 ~ 1 БОЕ/клетку. Наименьшую эффективность проявляли векторы Ad5 и sAd23. Значения TE₅₀ для этих вирусов находились на уровне 140 и 70 БОЕ/клетку соответственно. Таким образом, для Ad5/35 значения TE₅₀ были в 200 (p < 0,0001) и в 100 (p < 0,0001) раз ниже, чем для Ad5 и sAd23 соответственно, а для Ad26 соответствующее значение было в 82 (p = 0,002) раз ниже, чем для Ad5. Векторы Ad26 и Ad5/35, а также Ad5 и sAd23 были сравнимы между собой по трансдуцирующей эффективности и значения TE₅₀ для них статистически не отличались друг от друга.

Сравнение экспрессии молекул CD86 и HLA-DR при трансдукции ДК с помощью Ad-векторов различных серотипов

Известно, что антиген-представляющая функция ДК коррелирует с уровнем экспрессии антигенов MHC класса II, а также некоторых костимуляторных молекул. Для того чтобы оценить возможные фенотипические изменения ДК в процессе Ad-инфекции, мы анализировали экспрессию HLA-DR и CD86 при концентрации Ad, которые обеспечивали трансдукцию 50 % клеток. Были использованы дозы 125, 60, 1,56 и 0,78 БОЕ/клетку для Ad5, sAd23, Ad26 и Ad5/35 соответственно. В этих условиях GFP⁺- и GFP^--популяции ДК имели равные пропорции и представляли собой трансдуцированные и нетрансдуцированные клетки в одном и том же образце. Мы обнаружили, что на GFP⁺-клетках по сравнению с GFP^--клетками заметно возрастает экспрессия молекулы CD86 (p < 0,01 для Ad5, Ad26 и Ad5/35; p < 0,001 для sAd23) (рис. 4). Аналогично при трансдукции возрастала экспрессия HLA-DR (p < 0,01 для Ad5, Ad26 и sAd23; p < 0,05 для Ad5/35).

Обсуждение

ДК обеспечивают связь врожденного и адаптивного иммунитета, таким образом они играют ключевую роль в иммунном ответе. Основной функцией ДК является представление антигена наивным Т-лимфоцитам с их последующей активацией.

При вакцинации для некоторых антигенов необходима корректировка антиген-представляющих свойств ДК. Естественные антиген-представляющие свойства ДК могут быть усилены в нужном направлении с помощью аденовирусной трансдукции. В представленной работе мы сравнили как различные серотипы Ad трансдуцируют ДК. При сравнении учитывали количественные и качественные показатели трансдукции.

В целом полученные результаты свидетельствуют о высокой трансдуцирующей способности Ad-векторов по отношению к ДК. Для сравнения можно привести данные по трансдукции активированных В-лимфоцитов, которые по профилю костимуляторных молекул, а также молекул МНС наиболее близки к ДК. Обращает на себя внимание то, что ДК трансдуцируются более эффективно, чем первичные В-лимфоциты [17]. Последние даже под действием высоких доз Ad трансдуцировались в зависимости от серотипа от 10 до 46 %. В отличие от этого, даже при сравнительно невысоких дозах ДК доля трансдуцированных клеток приближалась к 100 %.

Следует отметить, что ДК, полученные из моноцитов, являются терминально дифференцированными и постмитотическими клетками. Несмотря на то, что Ad способны трансдуцировать непролиферирующие клетки, как было отмечено ранее, для эффективной трансдукции ДК требуются высокие дозы Ad, примерно от 100 до 1000 БОЕ/клетку [18]. Действительно, нами обнаружено, что такие дозы необходимы при трансдукции серотипами Ad5 и sAd23. В отличие от этого, серотипы Ad26 и Ad5/35 способны трансдуцировать ДК в более низких дозах, которые характерны для таких чувствительных клеток, как HEK293.

При трансдукции различными серотипами Ad наблюдались также некоторые качественные отличия в характере экспрессии трансгена. При обработке ДК субоптимальными дозами вируса только часть клеток демонстрировала GFP-флуоресценцию. Особенность трансдукции с помощью серотипов Ad5, Ad26 и Ad5/35 заключалась в том, что при снижении дозы вируса GFP⁺-клетки сохраняли заметный уровень флуоресценции. В отличие от этого, при использовании серотипа sAd23 при снижении дозы вируса ДК пропорционально теряли GFP-флуоресценцию, которая последовательно приближалась к уровню аутофлуоресценции.

Для объяснения этого явления необходимо рассмотреть характер взаимодействия Ad и ДК. Можно предположить, что при инфекции вирусные частицы распределяются по клеткам-мишеням случайным образом и проникновения в клетки-мишени отдельных вирусных частиц являются индивидуальными событиями [19]. В этом случае зависимость доли трансдуцированных клеток от числа вирусных частиц, проникших в клетку (MOI, multiplicity of infection), подчиняется распределению Пуассона и описывается следующим уравнением: доля трансдуцированных клеток = (1 - exp(-MOI)) [20]. При высоких дозах вируса Ad26 в каждую клетку проникают сразу несколько вирусных частиц, обеспечивая высокий уровень экспрессии трансгена. По мере снижения дозы вируса каждая клетка в среднем получает все меньшее число вирусных копий, что приводит к снижению уровня флуоресценции GFP. Когда MOI приближается к 1, только часть клеток несет по одной вирусной копии, остальные остаются нетрансдуцированными. Мы предполагаем, что для Ad26 проникновение в клетку даже одной копии вируса достаточно для выраженной экспрессии трансгена. В отличие от этого одна копия sAd23 дает очень низкую GFP-флуоресценцию. В результате при снижении дозы sAd23 наблюдается прогрессивное падение уровня GFP-флуоресценции вплоть до уровня аутофлуоресценции.

При проникновении в клетку Ad дикого типа запускаются процессы, связанные с врожденным иммунитетом. Ранее было показано, что наибольшее влияние на эти реакции оказывают продукты генов, расположенные в E1- и E3-областях Ad-генома [1]. В использованных нами рекомбинантных векторах указанные области были удалены из вирусного генома. Процессы врожденного иммунитета также могут запускаться посредством активации паттерн-распознающих рецепторов, в частности TLR-рецепторов, которые являются сенсорами вирусных ДНК- и РНК-транскриптов [21].

Таким образом, при аденовирусной инфекции ДК получают сигнал опасности, который стимулирует переход ДК в более зрелое состояние. Нами было обнаружено, что Ad-трансдукция ДК всеми изученными серотипами вызывала повышение экспрессии HLA-DR и CD86 до уровней, характерных для более зрелых ДК. Эти результаты позволяют предполагать, что трансдуцированные ДК могут иметь более выраженные антиген-представляющие и иммуностимулирующие свойства, чем нетрансдуцированные клетки. Это должно приводить к увеличению антиген-представляющего потенциала ДК и в конечном счете - к повышению эффективности аденовирусной вакцины.

Полученные нами данные соответствуют более ранним наблюдениям о том, что при инфицировании Ad незрелые ДК трансформируются в более зрелые клетки [22]. Трансдуцированные ДК меняют не только свой антигенный портрет, но и функциональные свойства. Они снижают продукцию ИЛ-10 и секретируют повышенный уровень ИЛ-12 p70 [23]. Интересно, что уровень созревания, индуцированный с помощью Ad, превосходил тот, который достигался при обработке этих клеток ФНОα или ИНФ-α. Противоречивые результаты были получены в работе K.R. Newton и соавт., которые обнаружили, что трансдукция ДК Ad-векторами приводит к подавлению последующего иммунного ответа [24].

Представленные данные имеют некоторые ограничения. В своей работе мы использовали ДК, которые in vitro были получены из моноцитов крови. Нельзя исключить того, что резидентные ДК, присутствующие в различных органах и тканях человека, могут несколько отличаться от индуцированных ДК по чувствительности к Ad-трансдукции.

Заключение

Ad-векторы по отношению к ДК обладают высокой трансдуцирующей способностью. Трансдукция ДК с помощью серотипов Ad5, Ad26 и Ad5/35 обеспечивает высокую экспрессию трансгена. Ad-трансдукция индуцирует переход ДК в более зрелую форму.

Благодарности. Благодарим канд. биол. наук Т.А. Ожаровскую (ФГБУ "НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи" Минздрава России) за предоставленный препарат Ad человека 26-го серотипа Ad26-GFP.

Литература

1. Nishimura N., Nishioka Y., Shinohara T., Sone S. Enhanced efficiency by centrifugal manipulation of adenovirus-mediated interleukin 12 gene transduction into human monocyte-derived dendritic cells. Hum. Gene Ther. 2001; 12: 333-46. DOI: https://doi.org/10.1089/10430340150503966

2. Kushwah R., Hu J. Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells. Cell Biosci. 2011; 1: 20. DOI: https://doi.org/10.1186/2045-3701-1-20

3. Gong J., Avigan D., Chen D., Wu Z., Koido S., Kashiwaba M., Kufe D. Activation of antitumor cytotoxic T lymphocytes by fusions of human dendritic cells and breast carcinoma cells. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 2000; 97: 2715-8. DOI: https://doi.org/10.1073/pnas.050587197

4. Chan R.C.-F., Pang X.-W., Wang Y.-D., Chen W.-F., Xie Y. Transduction of dendritic cells with recombinant adenovirus encoding HCA661 activates autologous cytotoxic T lymphocytes to target hepatoma cells. Br. J. Cancer. 2004; 90: 1636-43. DOI: https://doi.org/10.1038/sj.bjc.6601706

5. Janes H.E., Cohen K.W., Frahm N., De Rosa S.C., Sanchez B., Hural J. Higher T-cell responses induced by DNA/rAd5 HIV-1 preventive vaccine are associated with lower HIV-1 infection risk in an efficacy trial. J. Infect. Dis. 2017; 215: 1376-85. DOI: https://doi.org/10.1093/infdis/jix086

6. Jeyanathan M., Fritz D.K., Afkhami S., Aguirre E., Howie K.J., Zganiacz A. Aerosol delivery, but not intramuscular injection, of adenovirus-vectored tuberculosis vaccine induces respiratory-mucosal immunity in humans. JCI Insight. 2022; 7: e155655. DOI: https://doi.org/10.1172/jci.insight.155655

7. Hollingdale M.R., Sedegah M., Limbach K. Development of replication-deficient adenovirus malaria vaccines. Expert. Rev. Vaccines. 2017; 16: 261-71. DOI: https://doi.org/10.1080/14760584.2016.1228454

8. Kerstetter L.J., Buckley S., Bliss C.M., Coughlan L. Adenoviral vectors as vaccines for emerging avian influenza viruses. Front. Immunol. 2021; 11: 607333. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.607333

9. Araújo N.M., Rubio I.G.S., Toneto N.P.A., Morale M.G., Tamura R.E. The use of adenoviral vectors in gene therapy and vaccine approaches. Genet. Mol. Biol. 2022; 45: e20220079. DOI: https://doi.org/10.1590/1678-4685-gmb-2022-0079

10. Logunov D.Y., Dolzhikova I.V., Shcheblyakov D.V., Tukhvatulin A.I., Zubkova O.V., Dzharullaeva A.S., Kovyrshina A.V., Lubenets N.L.,Grousova D.M., Erokhova A.S., Botikov A.G., Izhaeva F.M., Popova O., Ozharovskaya T.A., Esmagambetov I.B., Favorskaya I.A., Zrelkin D.I., Voronina D.V., Shcherbinin D.N., Semikhin A.S., Simakova Y.V., Tokarskaya E.A., Egorova D.A., Shmarov M.M., Nikitenko N.A., Gushchin V.A., Smolyarchuk E.A., Zyryanov S.K., Borisevich S.V., Naroditsky B.S., Gintsburg A.L. Safety and efficacy of an rAd26 and rAd5 vector-based heterologous prime-boost COVID-19 vaccine: an interim analysis of a randomised controlled phase 3 trial in Russia. Lancet. 2021; 397: 671-81. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(21)00234-8

11. Bos R., Rutten L., Van Der Lubbe J.E.M., Bakkers M.J.G., Hardenberg G., Wegmann F. Ad26 vector-based COVID-19 vaccine encoding a prefusion-stabilized SARS-CoV-2 Spike immunogen induces potent humoral and cellular immune responses. NPJ Vaccines. 2020; 5: 91. DOI: https://doi.org/10.1038/s41541-020-00243-x

12. Zhu F.-C., Li Y.-H., Guan X.-H., Hou L.-H., Wang W.-J., Li J.-X. Safety, tolerability, and immunogenicity of a recombinant adenovirus type-5 vectored COVID-19 vaccine: a dose-escalation, open-label, nonrandomised, first-in-human trial. Lancet. 2020; 395: 1845-54. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)31208-3

13. Voysey M., Clemens S.A.C., Madhi S.A., Weckx L.Y., Folegatti P.M., Aley P.K. Safety and efficacy of the ChAdOx1 nCoV-19 vaccine (AZD1222) against SARS-CoV-2: an interim analysis of four randomized controlled trials in Brazil, South Africa, and the UK. Lancet. 2021; 397: 99-111. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)32661-1

14. Багаев А.В., Пичугин А.В., Лебедева Е.С., Лысенко А.А., Шмаров М.М., Логунов Д.Ю., Народицкий Б.С., Атауллаханов Р.И., Хаитов Р.М., Гинцбург А.Л. Влияние TLR-агонистов на экспрессию в антиген-презентирующих клетках целевого белка-антигена, закодированного в аденовирусном векторе. Иммунология. 2015; 36 (4): 188-95. eLIBRARY ID: 24324492

15. Рогожин В.Н., Логунов Д.Ю., Щебляков Д.В., Шмаров М.М., Ходунова Е.Е., Гальцева И.В., Белоусова Р.В., Народицкий Б.С., Гинцбург А. Л. Эффективный способ доставки гена интерлейкина-2 в гемопоэтические клетки человека с использованием рекомбинантного аденовируса с модифицированным фибером. Acta Naturae. 2011; 3 (3): 103-10. eLIBRARY ID: 17704753.

16. Лушова А.А., Жеремян Э.А., Астахова Е.А., Спиридонова А.Б., Бязрова М.Г., Филатов А.В. Субпопуляции В-лимфоцитов: функции и молекулярные маркеры. Иммунология. 2019; 40 (6) 63-75. DOI: https://www.doi.org//10.24411/0206-4952-2019-1600917

17. Сухова М.М., Бязрова М.Г., Банделюк А.С., Михайлов А.А., Шмаров М.М., Филатов А.В. Трансдукция В-лимфоцитов человека с помощью аденовирусных векторов различных серотипов. Иммунология. 2024; 45 (4): 435-45. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2024-45-4-435-445

18. Kirk C.J., Mulé J.J. Review: gene-modified dendritic cells for use in tumor vaccines. Hum. Gene Ther. 2000; 11: 797-806. DOI: https://doi.org/10.1089/10430340050015419

19. Sigal A., Kim J.T., Balazs A.B., Dekel E., Mayo A., Milo R. Cell-to-cell spread of HIV permits ongoing replication despite antiretroviral therapy. Nature. 2011; 477: 95-8. DOI: https://doi.org/10.1038/nature10347

20. Arai T., Takada M., Ui M., Iba H. Dose-dependent transduction of vesicular stomatitis virus G protein-pseudotyped retrovirus vector into human solid tumor cell lines and murine fibroblasts. Virology. 1999; 260: 109-15. DOI: https://doi.org/10.1006/viro.1999.9773

21. Marquez-Martinez S., Vijayan A., Khan S., Zahn R. Cell entry and innate sensing shape adaptive immune responses to adenovirus-based vaccines. Curr. Opin. Immunol. 2023; 80: 102282. DOI: https://doi.org/10.1016/j.coi.2023.102282

22. Rea D., Schagen F.H.E., Hoeben R.C., Mehtali M., Havenga M.J.E., Toes R.E.M. Adenoviruses activate human dendritic cells without polarization toward a T-helper type 1-inducing subset. J. Virol. 1999; 73: 10245-53. DOI: https://doi.org/10.1128/JVI.73.12.10245-10253.1999

23. Schumacher L., Ribas A., Dissette V.B., McBride W.H., Mukherji B., Economou J.S. Human dendritic cell maturation by adenovirus transduction enhances tumor antigen-specific T-cell responses: J. Immunother. 2004; 27: 191-200. DOI: https://doi.org/10.1097/00002371-200405000-00003

24. Newton K.R., Sala-Soriano E., Varsani H., Stephenson J.R., Goldblatt D., Wedderburn L.R. Human dendritic cells infected with an adenoviral vector suppress proliferation of autologous and allogeneic T cells. Immunology. 2008; 125: 469-79. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1365-2567.2008.02860.x

Материалы данного сайта распространяются на условиях лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License («Атрибуция - Всемирная»)