Определение аллерген-специфических В-лимфоцитов у пациентов с аллергическими заболеваниями при отсутствии специфических IgE-антител

• Бязрова Мария Георгиевна
• Смольников Евгений Валентинович
• Литовкина Алла Олеговна
• Амзаева Линда Усмановна
• Сухова Мария Михайловна
• Михайлов Артем Андреевич
• Чернушевич Дарья Дмитриевна
• Феденко Елена Сергеевна
• Филатов Александр Васильевич
• Елисютина Ольга Гурьевна

Резюме

Введение. Диагностика аллергических заболеваний основана на данных анамнеза, проведении кожных и провокационных тестов, а также на определении уровня специфического IgE в сыворотке крови. В то же время описаны случаи, когда у пациентов определяются симптомы аллергического заболевания и при этом не удается выявить специфические IgE к аллергенам, например при локальном аллергическом рините (ЛАР). Изучение аллерген-специфических В-лимфоцитов у таких пациентов может помочь достоверно диагностировать гиперчувствительность.

Цель исследования - разработка и оптимизация метода детекции аллерген-специфических IgE⁺-В-клеток в крови пациентов с аллергическими заболеваниями.

Материал и методы. В исследование были включены 6 взрослых пациентов с аллергией на пыльцу березы, 1 пациент с ЛАР и 5 взрослых здоровых добровольцев без аллергических заболеваний. Для разработки и оптимизации метода детекции аллерген-специфических IgE⁺-В-клеток использовали иммуноферментный анализ, тест на активацию базофилов, проточную цитофлуориметрию, а также специальные протоколы для окрашивания и анализа B-лимфоцитов.

Результаты. Установлено, что у пациентов с аллергией на пыльцу березы определяются аллерген-специфические IgE⁺-В-лимфоциты в период палинации. У пациента с ЛАР также были идентифицированы специфические B-лимфоциты, что указывает на возможное участие этих клеток в развитии аллергических реакций даже при отсутствии специфического IgE в сыворотке крови и активации базофилов аллергеном Bet v 1 в цельной крови.

Заключение. Разработанные методы и подходы позволяют более точно диагностировать аллергические реакции, включая случаи, когда рутинные методы аллергологического обследования не позволяют обнаружить специфические IgE-антитела. Определение аллерген-специфических IgE⁺-В-клеток в крови пациентов открывает новые возможности для изучения патогенетических механизмов развития и диагностики аллергических заболеваний.

Ключевые слова: аллергия на пыльцу березы; аллерген-специфические В-лимфоциты; локальный аллергический ринит; иммуноглобулин Е

Введение

Аллергическими заболеваниями, связанными с иммуноглобулин Е (IgE)-опосредованными реакциями, страдает около 20-30 % населения в развитых странах [1, 2]. К IgE-ассоциированной аллергии относят аллергический ринит, аллергический конъюнктивит, бронхиальную астму, аллергодерматозы, пищевую аллергию, а также опасную для жизни анафилаксию. Преимущественной причиной развития аллергических заболеваний в России является пыльца березы [3-5]. Главным аллергеном пыльцы березы является Bet v 1 - белок с молекулярной массой 17 кДа, который по своей структуре гомологичен ряду других аллергенов семейства PR-10 (Pathogenesis-Related protein 10). Белки этого семейства имеют сходную трехмерную структуру и могут вызывать перекрестные аллергические реакции у сенсибилизированных людей.

Уровень сывороточных аллерген-специфических IgE является важным показателем для определения напряженности иммунитета и тяжести заболевания, активно используется как в клинических, так и в научных исследованиях. Исследования показывают прямую зависимость между увеличением уровня аллерген-специфических IgE-антител у пациентов с аллергией на пыльцу березу и концентрацией пыльцы березы в воздухе в сезон цветения [6]. Кроме того, у пациентов с высоким уровнем Bet v 1-специфических антител высок риск развития орального аллергического синдрома (ОАС) [5].

Несмотря на важную роль в клинической практике, изучение антительного ответа не дает полного представления о формировании аллерген-специфических B-лимфоцитов. IgE-антитела секретируются плазматическими клетками, которые в основном находятся в тканях, таких как слизистая носа, желудочно-кишечный тракт (ЖКТ), костный мозг. Плазматические клетки являются сложнодоступным объектом для исследования. В связи с этим изучение формирования ответа на аллергены сфокусировано на другом звене В-клеточного иммунитета - на активированных циркулирующих IgE⁺-клетках. После экспозиции аллергена на короткое время в крови пациента можно детектировать аллерген-специфические IgE⁺-клетки. При этом, несмотря на кажущуюся легкость поставленной задачи, исследователи сталкиваются с определенными трудностями. Одна из них заключается в низком проценте циркулирующих аллерген-специфических IgE⁺-клеток, другая - в вероятности получения ложноположительного сигнала.

В некоторых случаях определение аллерген-специфических IgE⁺-В-лимфоцитов может помочь достоверно диагностировать гиперчувствительность, например у пациентов с низким уровнем аллерген-специфических антител или с их полным отсутствием.

Традиционно постановка диагноза аллергического заболевания основывается на данных анамнеза и результатах специфического аллергологического обследования. Описаны случаи, когда у пациентов определяются симптомы аллергического заболевания, но при этом не удается выявить специфические IgE к аллергенам в сыворотке крови. Примерами таких состояний могут быть так называемый эндогенный подтип атопического дерматита (АтД), при котором средние значения общего IgE в сыворотке крови не превышают уровень 200 кЕд/л [7, 8], а также локальный аллергический ринит (ЛАР) - заболевание, характеризующееся локальной гиперпродукцией IgE против круглогодичных и сезонных аллергенов при отсутствии специфических IgE в сыворотке крови и при отрицательных результатах кожных проб с аллергенами [9-11]. Патофизиология возникновения ЛАР остается малоизученной. Одна из задач в исследовании патогенеза ЛАР - определение аллерген-специфических IgE в слизистой оболочке носа и крови пациентов.

Цель настоящего исследования - разработка и оптимизация метода детекции аллерген-специфических IgE⁺-В-клеток в крови пациентов с аллергией на пыльцу березы. В нашем исследовании мы разработали протокол окрашивания IgE-продуцирующих лимфоцитов и с помощью проточной цитофлуориметрии оценили появление IgE-положительных клеток во время сезона пыления березы. Данный протокол может применяться как в научных исследованиях, так и в клинической практике, в сложных случаях, когда требуется подтвердить или исключить участие IgE-зависимой аллергии и разработать подходы к терапии, включая соблюдение элиминационных мероприятий и определение показаний к аллерген-специфической иммунотерапии (АСИТ).

Материал и методы

Участники исследования. Для разработки и оптимизации метода детекции аллерген-специфических IgE⁺-В-клеток в крови пациентов с аллергией на пыльцу березы была сформирована группа из 6 взрослых пациентов с аллергией на пыльцу березы, 1 пациент с ЛАР и 5 взрослых здоровых добровольцев без аллергических заболеваний. Исследование было проведено на базе ФГБУ "ГНЦ Институт иммунологии" ФМБА России и кафедры иммунологии Медицинского института РУДН им. П. Лумумбы Минобрнауки России в Москве. Исследование прошло предварительную этическую экспертизу и было одобрено Этическим комитетом Института иммунологии (протокол № 1 от 18.03.2024). Исследование было выполнено в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации "Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека в качестве испытуемого". Письменное информированное согласие было получено от каждого участника исследования перед выполнением каких-либо процедур исследования.

Пациенты соответствовали перечисленным ниже критериям включения/невключения.

Критерии включения:

1. Пациенты мужского и женского пола от 18 до 65 лет.

2. Пациенты с сенсибилизацией к аллергену пыльцы березы, подтвержденной кожными пробами или лабораторными тестами, имеющие клинические проявления в виде аллергического риноконъюнктивита, бронхиальной астмы или обострения АтД в сезон цветения деревьев.

Критерии невключения:

1. Применение системной терапии кортикостероидами, циклоспорином, биологическими препаратами за 6 мес до и в течение всего периода исследования.

2. Проведение АСИТ в течение 3 лет до проведения исследования.

Демографическая, клиническая и аллергологическая характеристика групп пациентов и здоровых добровольцев представлена в табл. 1.

Также в исследование была включена пациентка с ЛАР с типичными клиническими проявлениями, но с отрицательными результатами кожных проб и отсутствием специфических IgE в сыворотке крови. Диагноз ЛАР установлен на основании данных анамнеза, объективной оценки симптомов аллергического ринита с использованием Визуальной аналоговой шкалы (ВАШ) [12], результатов назального провокационного теста с аллергеном экстракта пыльцы березы с оценкой назальной пиковой скорости вдоха, общей оценкой назальных симптомов и результатов риноцитограммы. В табл. 2 представлены данные анамнеза, основные симптомы заболевания и результаты провокационного теста с аллергеном из экстракта пыльцы березы пациентки с ЛАР.

Описание медицинского вмешательства. Венозную кровь пациентов собирали в пробирки объемом 4,5 мл c нейтральной средой S Monovette^® (Sarstedt AG&Co, Германия), центрифугировали в течение 10 мин на скорости 2000g, затем аликвотировали сыворотку в пластиковые пробирки. Образцы сыворотки хранились при температуре -20 °C до момента анализа. Мононуклеарные клетки выделяли из периферической крови, собранной в вакутейнерные пробирки с K₃-ЭДТА (Sarstedt AG&Co, Германия). Кровь разбавляли 1 : 1 с помощью PBS, после чего наслаивали на 2,7 мл фиколла плотностью ρ = 1,077 г/см³ ("Панэко", Россия) и центрифугировали в течение 40 мин при 400 g.

Получение конъюгата Bet v 1 с фикоэритрином. Для его получения использовали гетерофункциональный линкер TCO-PEG4-NHS для мечения Bet v 1 и MTZ-PEG5-NHS для мечения фикоэритрина (PE). Белок Bet v 1 переводили в бикарбонатный буфер с помощью гель-фильтрации. Затем добавляли TCO-PEG4-NHS и инкубировали 1 ч при перемешивании. После этого белок отделяли от свободного TCO-PEG4-NHS путем гель-фильтрации на колонке с сефарозой G-25, уравновешенной PBS (pH = 7,5). К раствору PE в бикарбонатном буфере добавляли MTZ-PEG5-NHS, после этого инкубировали 1 ч на ротаторе. PE отделяли от несвязавшегося MTZ-PEG5-NHS путем гель-фильтрации на колонке с сефарозой G-25, уравновешенной PBS (pH = 7,5). Растворы Bet v 1-TCO-PEG4-NHS и PE-MTZ-PEG5-NHS смешивали и инкубировали в течение ночи при комнатной температуре.

Выделение и окрашивание мононуклеаров периферической крови (МНПК). Мононуклеарные клетки собирали и промывали раствором PBS с добавлением 2 мМ ЭДТА, центрифугируя при 300g в течение 10 мин. Для определения аллерген-специфичных IgE⁺-В-лимфоцитов МНПК окрашивали следующим набором антител: CD19-PE (клон LT19), CD27-PECy5.5 (клон LT27), CD38-PECy7 (клон LT38) и IgD-FITC (клон MA2), CD19-FITC, CD23-PerCP-Cy5 (клон EBVCS-5, Biolegend, США), CD27-PE-Cy5.5, CD38-PE-Cy7, anti-IgE-APC (Omalizumab). IgE⁺-В-лимфоциты определяли по фенотипу CD19⁺CD27⁺⁺CD38⁺⁺IgD^-CD23^-IgE⁺. Последовательное гейтирование проводили по боковому (SSC) и прямому (FSC) светорассеянию, выделяя субпопуляцию лимфоцитов крови. После этого определяли единичные события по FSC-A и FSC-H и выделяли субпопуляцию CD19⁺CD23^- лимфоцитов. Переключенные В-лимфоциты определяли как CD19⁺CD23^-IgD^-. Плазмабласты гейтировали по двум антигенам - CD27 и CD38. IgE⁺-В-лимфоциты выделяли из субпопуляции CD19⁺CD23^-IgD^-CD27⁺⁺CD38⁺⁺-клеток с помощью антитела Omalizumab. Флуоресценцию клеток регистрировали с помощью проточного цитометра CytoFLEX S (Beckman Coulter, США), оснащенного тремя диодными лазерами 488, 561 и 633 нм.

Определение IgЕ методом иммуноферментного анализа (ELISA) и ImmunoCAP. Для определения Bet v 1-специфических IgE-антител методом иммуноферментного анализа (ИФА) 96-луночные планшеты с высокой сорбционной емкостью (Greiner, Германия) сорбировали рекомбинантным белком Bet v 1 в концентрации 5 мкг/мл в течение ночи при 4 °C. Затем планшеты обрабатывали блокирующим буфером для ИФА ("Хема", Россия). Сыворотки разводили в 10 и 50 раз и инкубировали в течение 6 ч в планшетах для ИФА, после чего 3 раза промывали раствором PBS с 0,25 M Твин20. Для определения IgE-антител использовали клон BE5, конъюгированный с пероксидазой хрена, и инкубировали в течение 1 ч, после чего планшеты 5 раз промывали PBS с 0,25 M Твин20. Реакцию проявляли добавлением раствора хромогена TMB ("Хема", Россия) и останавливали через 20 мин с помощью 1Н HCl. Оптическую плотность при 450 нм измеряли с использованием планшетного ридера iMark (BioRad, США).

Для определения Bet v 1-специфических IgE-антител методом ImmunoCAP использовали стандартный протокол от производителя.

Тест на активацию базофилов (БАТ). Процент активированных базофилов в образцах цельной крови оценивали с помощью набора Allergenicity Kit (Beckman Coulter, США) согласно протоколу производителя. Образцы крови собирали в пробирки S Monovette^® (Sarstedt AG&Co, Германия) с K₃-ЭДТА объемом 1,6 мл; после этого для теста БАТ использовали 800 мкл крови. Мы провели БАТ с очищенным рекомбинантным аллергенами Bet v 1 в трех концентрациях каждого аллергена: 1, 10 и 100 нг/мл. Для каждого пациента был проведен положительный контроль аллергенности, содержащий антитела против IgE (0,01 мг/мл) и отрицательный контроль (PBS). Проточную цитометрию проводили с использованием прибора BD FACS Canto II (BD Biosciences, США). Результаты анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo™ v10.6.2 (Tree Star, США). Результаты БАТ представлены в виде процента активированных базофилов с фенотипом CRTH2⁺CD203c⁺CD3^-.

Статистическая обработка данных. Данные проточной цитометрии анализировали с помощью программы FlowJo™ v10.6.2 (Tree Star, США). Для построения графиков и статистического анализа использовали программное обеспечение GraphPad Prism версии 8.4.3 (GraphPad, США).

Результаты

Создание панели для определения Bet v 1-специфических В-лимфоцитов

Методика определения общей популяции IgE⁺-В-лимфоцитов была разработана нами ранее и проверена на образцах крови пациентов с аллергией на пыльцу березы [13, 14]. Для этого МНПК окрашивали следующими конъюгатами антител: CD19-FITC, CD23-PerCP, CD27-PE-Cy5.5, CD38-PE-Cy7, Omalizumab-APC - для определения аллерген-специфических В-лимфоцитов. Процент аллерген-специфических В-клеток крайне мал, поэтому для конъюгации мы использовали PE, обладающий яркой красной флуоресценцией. С помощью метода Click-Chemistry нами был получен конъюгат Bet v 1 с PE.

Для тестирования полученного конъюгата использовали иммунопреципитацию на сефарозе с белком G с МкАт BV16, специфичными к Bet v 1. Для этого МкАт BV16 сорбировали на сефарозу с белком G, после чего вносили конъюгат Bet v 1 с PE (рис. 1А, левая панель). В качестве контроля использовали антитело с другой специфичностью (рис. 1А, правая панель).

Полученный конъюгат специфично распознавался МкАт BV16 и не давал дополнительного фона, что было важно для дальнейшей работы. Для определения титра конъюгат Bet v 1-PE тестировали методом проточной цитофлуориметрии. Фиксированные и пермеабилизованные клетки линий CB1 и Bip1 окрашивали конъюгатом Bet v 1-PE начиная с разведения 1 : 50 и заканчивая 1 : 800. В качестве контроля специфичности использовали конъюгат HBsAg с PE. Наилучший результат окрашивания клеток наблюдали при разведении конъюгата 1 : 400, которое использовали в дальнейших экспериментах (рис. 1Б).

Характеристика Bet v 1-специфических IgE⁺-В-лимфоцитов у пациентов с аллергией на пыльцу березы

Для сравнения результатов, полученных для пациента с подозрением на ЛАР, мы включили в исследование 5 здоровых добровольцев и 6 пациентов с аллергией на пыльцу березы. Для всех участников исследования забор крови проводили в сезон палинации березы (начало мая) и после сезона палинации (середина-конец июля, рис. 2А).

Мы провели исследование сывороточных Bet v 1-специфичных антител методом ИФА. Результаты теста подтвердили данные, полученные ранее методом ImmunoCAP: у пациента с подозрением на ЛАР уровень Bet v 1-специфических IgE-антител был сопоставим с соответствующими показателями в образцах сывороток здоровых добровольцев (рис. 2Б). После снижения концентрации аллергена в воздухе уровень Bet v 1-специфических IgE-антител снижался у пациентов с аллергией на пыльцу березы, но не изменялся в образцах сыворотки пациента с ЛАР.

Для подтверждения полученных результатов мы провели тест на активацию базофилов после сезона палинации березы. Для этого у 6 пациентов с аллергией на пыльцу березы, у 5 здоровых добровольцев и у пациента с ЛАР проводили забор крови. Базофилы в цельной крови активировали с помощью трех доз аллергена Bet v 1 (100, 10 и 1 нг/мл) и измеряли процент активированных базофилов (CRTH2⁺CD203c⁺CD3^-) с помощью проточной цитофлуориметрии. У пациентов с аллергией на пыльцу березы обнаружен высокий процент активированных базофилов (рис. 2В) в тесте с 100 и 10 нг/мл рекомбинантного аллергена Bet v 1 (медиана: 77,5 и 32,5 %, соответственно). В образцах от пациента с ЛАР и здоровых добровольцев процент активированных базофилов был низким даже при добавлении максимальной концентрации аллергена (пациент с ЛАР - 1,21 %, здоровые добровольцы - 2,2 %).

В образцах от пациента с ЛАР мы определили Bet v 1-специфические IgE-антитела. Известно, что вероятность появления данной субпопуляции в крови донора увеличивается при наибольшей концентрации аллергена в воздухе, поэтому первый забор крови мы проводили в мае, основываясь на данных о концентрации пыльцы березы в воздухе. При окрашивании МНПК донора с ЛАР описанным ранее набором антител с конъюгатом Bet v 1-PE нам удалось выделить субпопуляцию клеток CD19⁺CD23^-IgD^-Bet v 1⁺IgE⁺, которая составила 0,42 % от CD19⁺CD23^-IgD^- клеток (рис. 2Г). Большая часть клеток (78 %) в популяции CD19⁺CD23^-IgD^-Bet v 1⁺IgE⁺ являлись плазмабластами, т. е. несли на поверхности молекулы CD27 и CD38. При этом в образцах от здоровых добровольцев данная субпопуляция не обнаруживалась, в отличие от образцов, полученных от пациентов с аллергией на пыльцу березы.

Нельзя не отметить, что не у всех пациентов удалось четко определить популяцию аллерген-специфических В-лимфоцитов, что скорее всего связано с недостаточной сенсибилизацией или неудачным выбором времени для забора крови. Для подтверждения полученного результата мы проанализировали образец крови пациента с ЛАР после сезона палинации березы. Субпопуляцию В-лимфоцитов с фенотипом Bet v 1⁺IgE⁺ обнаружить не удалось, как и в образцах от пациентов с аллергией на пыльцу березы.

Обсуждение

Несмотря на широкий спектр доступных методов определения IgE, диагностировать гиперчувствительность I типа не всегда возможно. В случае ЛАР, характеризующегося отсутствием сывороточных IgE-антител, единственным возможным критерием оценки состояния пациента является назальный провокационный тест. В некоторых случаях для подтверждения используют определение локальных аллерген-специфических антител в слизистой носа. Тем не менее механизм возникновения ЛАР остается малоизученным.

Согласно немногочисленным исследованиям, патогенетические механизмы ЛАР запускаются в слизистой носа немедленным IgE-опосредованным ответом тучных клеток с последующим рекрутированием эозинофилов, базофилов и Т2-хелперов. При этом профиль цитокинов у пациентов с ЛАР по составу не отличается от профиля цитокинов пациентов с аллергией и включает в себя ИЛ-4, ИЛ-5, TSLP, ИЛ-25 и ИЛ-33 [15, 16]. Информативным методом аллергодиагностики у таких пациентов может быть БАТ, который имеет высокую чувствительность и специфичность, что обеспечивает его применение у пациентов с поливалентной сенсибилизацией, когда стандартные кожные пробы или специфические IgE-тесты могут быть недостаточно чувствительны [17-19].

БАТ также характеризуется безопасностью, так как, в отличие от провокационных тестов, не требует введения аллергена непосредственно в организм пациента, что минимизирует риск возникновения тяжелых аллергических реакций. В нашем исследовании мы анализировали образцы крови пациента с ЛАР в БАТ, но не обнаружили повышения экспрессии на базофилах активационных маркеров CD63 и CD203c. Образцы сыворотки пациента анализировали с помощью методов ImmunoCAP и ИФА, но определить Bet v 1специфические IgE-антитела не удалось. Таким образом, одним из ограничений использования БАТ может являться низкий уровень аллерген-специфических IgE-антител.

Большое внимание в исследовании патогенеза ЛАР уделяется IgE-продуцирующим В-лимфоцитам. Основная функция В-лимфоцитов - секреция высокоспецифичных антител против патогенов. Кроме протективной функции, В-клетки зачастую могут играть ключевую роль в развитии реакций гиперчувствительности, например аллергических и аутоиммунных реакций [20, 21]. Определение IgE⁺-В-клеток в тканях - сложная и нетривиальная задача. В некоторых исследованиях для детекции используют метод конфокальной микроскопии, в других - проточную цитофлуориметрию.

Плазматические клетки были обнаружены у пациентов с ЛАР в слизистой носа. Нам удалось найти пациента с ЛАР, сенсибилизированного к аллергенам пыльцы березы. Несмотря на то, что определить сывороточные аллерген-специфические антитела у пациентов с ЛАР невозможно, мы предположили, что при сильной и продолжительной сенсибилизации можно будет детектировать аллерген-специфические IgE⁺-В-лимфоциты.

В сезон палинации березы в крови пациента нам удалось обнаружить Bet v 1⁺IgE⁺CD27⁺⁺CD38⁺⁺-В-лимфоциты, которые по фенотипу соответствовали активированным плазмабластам. Для подтверждения полученного результата образцы крови пациента дополнительно анализировали через 2 мес после завершения сезона палинации березы. При повторном исследовании субпопуляция Bet v 1⁺IgE⁺CD27⁺⁺CD38⁺⁺-В-клеток в образцах МНПК не обнаруживалась.

Исследование антитело-секретирующих клеток у пациентов с ЛАР - важное и перспективное направление в изучении механизмов гиперчувствительности. Проведенное исследование показало возможность определения циркулирующих IgE⁺-плазмабластов у пациента с ЛАР. Кроме того, проведенное нами исследование показывает, что у пациентов с клиническим проявлением аллергии и при отсутствии сывороточных IgE-антител обнаруживаются циркулирующие аллерген-специфические IgE⁺-В-лимфоциты. Снижение концентрации аллергена в воздухе приводило к полному исчезновению аллерген-специфических IgE⁺-В-лимфоцитов из крови пациента. Полученные результаты важны для установления механизмов развития ЛАР и дальнейшего исследования патологий В-клеточного звена иммунитета.

Заключение

Таким образом, исследование аллерген-специфических IgE⁺-В-лимфоцитов необходимо в тех случаях, когда стандартные методы не позволяют достоверно диагностировать IgE-опосредованное аллергическое заболевание, например при ЛАР. Определение аллерген-специфических IgE⁺-В-клеток в крови пациентов открывает новые возможности для изучения патогенетических механизмов развития и диагностики аллергических заболеваний.

Литература

1. Meza-Lopez C., Bedolla-Barajas M., Morales Romero J., Jimenez-Carrillo C.E., Bedolla-Pulido T.R., Santos-Valencia E.A. Prevalence of allergic diseases and their symptoms in schoolchildren according to the birth mode. Bol. Med. Hosp. Infant. Mex. 2021; 78 (2): 130-5. DOI: https://doi.org/10.24875/bmhim.20000114

2. Licari A., Magri P., De Silvestri A., Giannetti A., Indolfi C., Mori F., Marseglia G. L., Peroni D. Epidemiology of Allergic Rhinitis in Children: A Systematic Review and Meta-Analysis. J. Allergy Clin. Immunol. Pract. 2023; 11 (8): 2547-56. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jaip.2023.05.016

3. Moverare R., Petays T., Vartiainen E., Haahtela T. IgE reactivity pattern to timothy and birch pollen allergens in Finnish and Russian Karelia. Int. Arch. Allergy Immunol. 2005; 136: 33-8. DOI: https://doi.org/10.1159/000082582

4. Николаева И.А., Кулага О.С., Авоян Г.Э., Смирнов В.В., Топтыгин А.Ю., Павленко М.К., Гороховец Н.В., Андреев И.В., Селезнев А.С., Мартынов А.И. Изучение аллергенов березы бородавчатой, выделенных из пыльцы, собранной в период с 2008 по 2015 г. Иммунология. 2019; 40 (6): 50-6. DOI: https://doi.org/10.24411/0206-4952-2019-16007

5. Elisyutina O., Fedenko E., Campana R., Litovkina A., Ilina N., Kudlay D., Egorenkov E., Smirnov V., Valenta R., Lupinek C., Khaitov M. Bet v 1-specific IgE levels and PR-10 reactivity discriminate silent sensitization from phenotypes of birch allergy. Allergy. 2019; 74 (12): 2525-8. DOI: https://doi.org/10.1111/all.1393

6. Pointner L., Bethanis A., Thaler M., Traidl-Hoffmann C., Gilles S., Ferreira F., Aglas L. Initiating pollen sensitization - complex source, complex mechanisms. Clin. Transl. Allergy. 2020; 10: 36. DOI: https://doi.org/10.1186/s13601-020-00341-y

7. Schmid-Grendelmeier P., Simon D., Simon H.U., Akdis C.A., Wüthrich B. Epidemiology, clinical features, and immunology of the "intrinsic" (non-IgE-mediated) type of atopic dermatitis (constitutional dermatitis). Allergy. 2001; 56 (9): 841-9. DOI: https://doi.org/10.1034/j.1398-9995.2001.00144.x

8. Tokura Y., Hayano S. Subtypes of atopic dermatitis: From phenotype to endotype. Allergol. Int. 2022; 71 (1): 14-24. DOI: https://doi.org/10.1016/j.alit.2021.07.003

9. Rondon C., Campo P., Togias A., Fokkens W. J., Durham S. R., Powe D. G., Mullol J., Blanca M. Local allergic rhinitis: concept, pathophysiology, and management. J. Allergy Clin. Immunol. 2012; 129 (6): 1460-7. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jaci.2012.02.032

10. Campo P., Eguiluz-Gracia I., Bogas G., Salas M., Plaza Seron C., Perez N., Mayorga C., Torres M. J., Shamji M. H., Rondon C. Local allergic rhinitis: Implications for management. Clin. Exp. Allergy. 2019; 49 (1): 6-16. DOI: https://doi.org/10.1111/cea.13192

11. Melone G., Giorgis V., Di Pino M., Pelaia C., Nappi E., Heffler E., Landi M., Gelardi M., Paoletti G. Local Allergic Rhinitis: Lights and Shadows of a Mysterious Entity. Int. Arch. Allergy Immunol. 2023; 184 (1): 12-20. DOI: https://doi.org/10.1159/000526604

12. Bousquet P.J., Combescure C., Neukirch F., Klossek J.M., Mechin H., Daures J.P. Visual analog scales can assess the severity of rhinitis graded according to ARIA guidelines. Allergy. 2007; 62 (4): 367-72. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1398-9995.2006.01276.x

13. Eckl-Dorna J., Villazala-Merino S., Campion N. J., Byazrova M., Filatov A., Kudlay D., Karsonova A., Riabova K., Khaitov M., Karaulov A., Niederberger-Leppin V., Valenta R. Tracing IgE-Producing Cells in Allergic Patients. Cells. 2019; 8 (9): 994. DOI: https://doi.org/10.3390/cells8090994

14. Zghaebi M., Byazrova M., Flicker S., Villazala-Merino S., Campion N.J., Stanek V., Tu A., Breiteneder H., Filatov A., Khaitov M., Niederberger-Leppin V., Eckl-Dorna J., Valenta R. Tracing Human IgE B Cell Antigen Receptor-Bearing Cells With a Monoclonal Anti-Human IgE Antibody That Specifically Recognizes Non-Receptor-Bound IgE. Front. Immunol. 2021; 12: 803236. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2021.803236

15. Forester J.P., Calabria C.W. Local production of IgE in the respiratory mucosa and the concept of entopy: does allergy exist in nonallergic rhinitis? Ann. Allergy Asthma Immunol. 2010; 105 (4): 249-55; quiz 256-8. DOI: https://doi.org/10.1016/j.anai.2010.02.001

16. Fear D. J., McCloskey N., O’Connor B., Felsenfeld G., Gould H.J. Transcription of Ig germline genes in single human B cells and the role of cytokines in isotype determination. J. Immunol. 2004; 173 (7): 4529-38. DOI: https://doi.org/10.4049/jimmunol.173.7.4529

17. Gomez E., Campo P., Rondon C., Barrionuevo E., BlancaLopez N., Torres M. J., Herrera R., Galindo L., Mayorga C., Blanca M. Role of the basophil activation test in the diagnosis of local allergic rhinitis. J. Allergy Clin. Immunol. 2013; 132 (4): 975-6.e1-5. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jaci.2013.07.016

18. Litovkina A., Byazrova M., Smolnikov E., Nikonova A., Elisyutina O., Fedenko E., Ilina N., Akinfenwa O., Campana R., Kudlay D., Valenta R., Khaitov M. Allergic sensitization to Mal d 1 without detectable specific serum IgE. Pediatr. Allergy Immunol. 2022; 33 (12): e13891. DOI: https://doi.org/10.1111/pai.13891

19. Литовкина А.О., Бязрова М.Г., Смольников Е.В., Аплевич О.В., Феденко Е.С. Особенности молекулярного профиля сенсибилизации у пациентов с аллергией на пыльцу березы и перекрестной пищевой аллергией к PR-10 белкам. Российский Аллергологический Журнал. 2023; 20 (4): 464-75. DOI: https://doi.org/10.36691/RJA16901

20. Лушова А.А., Жеремян Э.А., Астахова Е.А., Спиридонова А.Б., Бязрова М.Г., Филатов А.В. Субпопуляции В-лимфоцитов: функции и молекулярные маркеры. Иммунология. 2019; 40 (6): 63-76. DOI: https://doi.org/10.24411/0206-4952-2019-16009

21. Бязрова М.Г., Порошина А.С., Сухова М.М., Фролов Е.А., Шилкина А.Б., Латышева Е.А., Латышева Т.В., Филатов А.В. Продукция цитокинов наивными В-лимфоцитами и В-клетками памяти при стимуляции in vitro. Иммунология. 2023; 44 (5): 575-85. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2023-44-5-575-585

Материалы данного сайта распространяются на условиях лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License («Атрибуция - Всемирная»)