Материалы Международного конгресса по молекулярной иммунологии и аллергологии IMAC-2024 "Наука без границ. Главные достижения молекулярной иммунологии и аллергологии" (28-29 ноября 2024 г., Москва, Российская Федерация). Часть 1

Резюме

DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2025-46-1-86-142

Аветисян К.О., Мурашкин Н.Н., Петричук С.В.

Особенности атопии у детей при врожденном ихтиозе. Синдром SAM, дифференциальная диагностика. Успехи иммунобиологической терапии

ФГАУ "НМИЦ здоровья детей" Минздрава России, Москва, Российская Федерация

Синдром SAM (OMIM 615508) - синдром тяжелого дерматита, множественной аллергии и метаболических нарушений; входит в классификацию синдромальных форм врожденного ихтиоза (ВИ). Причиной заболевания становятся генетические дефекты в генах десмоплакина (DSP) и десмоглеина 1 (DSG1).

Клинические проявления атопии становятся основной причиной диагностических ошибок. Пациенты длительное время наблюдаются с диагнозом "атопический дерматит (АтД), торпидный к стандартным методам лечения". В основе диагностики лежат особенности течения АтД, торпидность к стандартным методам лечения и нарушения со стороны многих органов и систем: задержка физического развития, гипотрихоз, заболевания пищевода, в том числе эозинофильный эзофагит, пороки сердца, кардиомиопатия, ониходистрофия, алопеция, дефицит витамина D, рахит, рецидивирующие инфекции, надпочечниковая недостаточность, повышенный уровень сывороточного IgE, стоматологические проблемы и др.

Разнообразие клинических проявлений создает фенотипическую вариабельность в группе пациентов и приводит к трудностям при диагностике. Только молекулярно-генетическая диагностика позволяет установить окончательный диагноз.

Представлен клинический пример мальчика с тяжелой формой АтД. В ходе исследований у пациента, помимо хронического дерматоза, были выявлены системные нарушения: низкорослость, белково-энергетическая и вторичная надпочечниковая недостаточность, юношеский полиартрит, дефицит витамина D, рахит, ониходистрофия, дисморфические нарушения.

Молекулярно-генетическое исследование методом секвенирования экзома по Сенгеру выявило ранее не зарегистрированный вариант дефекта в гене DSG1 с мутацией chr18:28934543G>T (GRCh37) c.2384G>T.

В результате был установлен окончательный диагноз: синдром SAM. Иммунологическое исследование с помощью проточной цитометрии показало доминирующий иммунологический профиль в виде пролиферации Т17- и Thact-лимфоцитов.

Пациенту инициирована иммунобиологическая терапия препаратом анти-IL17A секукинумаб (козэнтикс). Клиническая эффективность оценена с помощью шкал ISS (Индекс тяжести ихтиоза) и CDLQI (Дерматологический индекс качества жизни детей), нумерологической шкалы зуда. На старте терапии ISS составил 5,8 баллов, значения по шкале зуда - 9, CDLQI - 24. Уже через 1 мес отмечено улучшение состояния кожи. Через 6 мес после инициации терапии: ISS - 1,2 балла, значения по шкале зуда - 2, CDLQI - 4.

Заключение. Постановка диагноза ребенку с синдромом SAM позволила изменить стратегию терапии, назначить научно обоснованную таргетную иммунобиологическую терапию. В настоящее время качество жизни мальчика не отличается от его здоровых сверстников. Базисный уход за кожей кожи осуществляется эмолентами.

Avetisyan K.O., Murashkin N.N., Petrichuk S.V.

Features of atopy in children with congenital ichthyosis. SAM syndrome, differential diagnosis and advances in immunobiological therapy

NMRC for Children’s Health, MOH of Russia, Moscow, Russian Federation

SAM syndrome (OMIM 615508) - Syndrome of Severe Dermatitis, Multiple Allergies, and Metabolic Disorders is classified as one of the syndromic forms of congenital ichthyosis (CI). The disease is caused by genetic defects in the desmoplakin (DSP) and desmoglein 1 (DSG1) genes. Clinical manifestations of atopy often lead to diagnostic errors. Patients are frequently diagnosed with atopic dermatitis (AD), which proves resistant to standard treatments. Diagnosis relies on specific features of AD, resistance to standard treatments, and the presence of systemic abnormalities, including growth retardation, hypotrichosis, esophageal diseases such as eosinophilic esophagitis, congenital heart defects, cardiomyopathy, onychodystrophy, alopecia, vitamin D deficiency, rickets, recurrent infections, adrenal insufficiency, elevated serum IgE levels, dental problems, and others. The variety of clinical manifestations contributes to phenotypic variability within the patient group, complicating the diagnostic process. Molecular genetic testing facilitates definitive diagnosis. This report presents a clinical case of a boy with a severe form of AD. In addition to chronic dermatosis, the patient exhibited systemic abnormalities, including short stature, protein-energy malnutrition, secondary adrenal insufficiency, juvenile polyarthritis, vitamin D deficiency, rickets, onychodystrophy, and dysmorphic features. Molecular genetic testing using Sanger exome sequencing identified a previously unregistered variant of a defect in the DSG1 gene with mutation chr18:28934543G>T (GRCh37) c.2384G>T. The final diagnosis of SAM syndrome was confirmed. Immunological examination using flow cytometry revealed a dominant immunological profile characterized by proliferation of T17- and Thact-lymphocytes. Immunobiological therapy with the anti-IL17-A drug secukinumab (cosentyx) was initiated. Clinical efficacy was assessed using the ISS (Ichthyosis Severity Score), CDLQI (Children’s Dermatology Life Quality Index), and a numerical itch scale. At therapy initiation, ISS was 5.8 points, itch scale - 9, CDLQI - 24. After one month, skin condition improved significantly. Six months after therapy initiation, the scores were ISS - 1.2, itch - 2, CDLQI - 4.

Conclusion. Diagnosing SAM syndrome in this child allowed for a shift in therapeutic strategy to scientifically grounded targeted immunobiological therapy. As a result, the boy’s quality of life became comparable to that of his healthy peers. Basic skin care is maintained with emollients.

Айметова Ш.К.¹, Магбулова Н.А.¹, Исмаилова Э.Н.¹, Левицкая Ю.В.^{1, 2}, Рахмедова М.^{1, 2}, Ким С.А.¹, Геллер С.И.³, Джамбекова Г.С.¹, Гариб В.Ф.⁴

Маркировка пищевых аллергенов: анализ упакованной продукции, представленной на рынке Узбекистана

¹ Международный центр молекулярной аллергологии Министерства высшего образования, науки и инноваций Республики Узбекистан, Ташкент, Республика Узбекистан

² Центр передовых технологий Министерства высшего образования, науки и инноваций Республики Узбекистан, Ташкент, Республика Узбекистан

³ Республиканский специализированный научно-практический медицинский центр педиатрии, Ташкент, Республика Узбекистан

⁴ Университет здоровья имени Карла Ландштайнера, Вена, Австрия

Обеспечение безопасности продовольствия - одна из ключевых национальных задач для устойчивого развития Узбекистана. В последние годы наблюдается постоянный рост случаев аллергических заболеваний. Согласно большинству исследований, пищевая аллергия (ПА) диагностируется у 6-10 % детей до года и у 2 % взрослых. Симптомы ПА могут проявляться по-разному: местные реакции, такие как кожные высыпания и покраснения с зудом, могут сочетаться с гастроинтестинальными проявлениями - болями в животе и рвотой, а также с респираторными симптомами, включая ринит и бронхоспазм. Наибольшую угрозу представляют отек гортани и анафилактический шок.

К наиболее известным пищевым аллергенам относятся молоко, яйца, арахис, орехи (включая миндаль, кешью и грецкие), рыба (окунь, треска, камбала и лосось), моллюски (крабы, омары и креветки), соя и пшеница, известные как "большая восьмерка", а начиная с 1 января 2023 г. в список значимых аллергенов добавлен кунжут.

Тем не менее распространенность этих аллергенов в разных странах варьирует - это связано с кулинарными традициями и особенностями приготовления пищи в каждом регионе. Главный принцип управления симптомами ПА - стратегия избегания контакта с аллергеном. Пищевые аллергены в обработанной продукции могут быть скрыты или непреднамеренно добавлены в виде остатка на оборудовании.

Согласно Регламенту Европейского союза (ЕС) 1169/2011, для защиты потребителей при маркировке предварительно упакованных пищевых продуктов требуется перечисление 14 ингредиентов, которые могут вызывать аллергию. Необходимость обязательной предупредительной маркировки предопределяется законодательно. Хотя в Узбекистане в целях обеспечения реализации прав потребителей на достоверную информацию о пищевой продукции 12 июля 2017 г. принято Постановление Кабинета Министров Республики Узбекистан за № 490 "Об утверждении Общего технического регламента о безопасности пищевой продукции в части ее маркировки", маркировка пищевых аллергенов (МПА) остается необязательной и не регулируется законом, как в большинстве стран.

С целью определения наличия маркировки на упакованных пищевых продуктах изучен ассортимент различных продуктов, представленных на рынке Узбекистана. Исследование проводили в Ташкенте с января по март 2023 г. Для получения более достоверной информации и изучения широкого ассортимента продуктов были выбраны супермаркеты с различной ценовой категорией и 7 категорий расфасованных продуктов: печенье, хлебобулочные и макаронные изделия, сухие завтраки, шоколад и конфеты, супы быстрого приготовления, мясные продукты и готовые блюда.

Из 195 проанализированных предварительно упакованных пищевых продуктов на упаковке 49,7 % продукции имелась информация о пищевых аллергенах, основную их часть составили импортированные продукты. МПА чаще всего регистрировалась в следующих категориях продуктов питания: "шоколад и конфеты" - 82,4 %, "печенье" - 71,1 %, "супы быстрого приготовления" - 50 % и "сухие завтраки" - 50 % исследованных упакованных продуктов. Реже информация о пищевых аллергенах отмечалась на упаковках мясных продуктов - 17,6 %, а на упаковке продуктов питания из категории "хлебобулочные и макаронные изделия" и "готовые блюда" она практически отсутствовала. При детальном анализе указанных на этикетках аллергенов установлено, что лидирующее место занимает молоко - 98,9 %, cоя была отмечена примерно - на 83,5 %, пшеница - в 68 % продуктов, яйцо - в 61,8 % продуктов, орехи - в 60,8 %, арахис - в 50,5 %.

Мы также изучили варианты предупредительной информации о наличии аллергенов и установили, что в наших образцах пищевых продуктов были использованы три различные формулировки. Причем в ряде случаев на одной упаковке могли присутствовать два разных варианта. Наиболее часто используемым утверждением, связанным с МПА, было "Может содержать следы x [аллергена]", указанным на 65,9 %. Утверждение "Может содержать x [аллерген]" присутствовало в 41,2 % образцов. Третий вариант предупредительной информации о пищевых аллергенах "Производится на объекте, который также обрабатывает x [аллерген]" отмечался реже и составил 8,2 %.

Цель второй части исследования - оценка отношения потребителей к МПА. В трех филиалах сети "КОРЗИНКА.UZ" в различных районах с использованием адаптированной анкеты был проведен опрос, направленный на оценку восприятия и отношения потребителей к МПА. В анкетировании приняли участие 528 покупателей, большую часть составили женщины (68,4 %). В целом, 285 участников были опрошены об их отношении к МПА. Среди них 85 человек были людьми с ПА, а 120 человек сами не имели аллергии, но покупали еду для члена семьи с ПА, 80 человек отметили наличие ПА у себя и у родственников. В зависимости от их возраста, семейного положения, уровня образования эти группы имели сходные характеристики. Результаты проведенного исследования показали отсутствие предупредительной информации о пищевых аллергенах на основной части продукции, что может создавать опасность для потребителей с ПА. Также в ходе исследования выявили незаинтересованность потребителей в маркировке пищевой продукции, что подтверждает необходимость разработки образовательных программ для населения, а также рекомендации по маркировке для производителей пищевой продукции.

Литература

1. Постановление Кабинета Министров Республики Узбекистан № 841 от 20 октября 2018 г. "О мерах по реализации национальных целей и задач в области устойчивого развития на период до 2030 года". Приложение № 1. URL: https://lex.uz/docs/4013358?ONDATE=23.10.2018
2. Muraro A., Werfel T., Hoffmann-Sommergruber K., Roberts G., Beyer K., Bindslev-Jensen C., Cardona V., Dubois A., duToit G., Eigenmann P., Fernandez Rivas M., Halken S., Hickstein L., Høst A., Knol E., Lack G., Marchisotto M.J., Niggemann B., Nwaru B.I., Papadopoulos N.G., Poulsen L.K., Santos A.F., Skypala I., Schoepfer A., Van Ree R., Venter C., Worm M., Vlieg-Boerstra B., Panesar S., de Silva D., Soares-Weiser K., Sheikh A., Ballmer-Weber B.K., Nilsson C., de Jong N.W., Akdis C.A.; EAACI Food Allergy and Anaphylaxis Guidelines Group. EAACI food allergy and anaphylaxis guidelines: diagnosis and management of food allergy. Allergy. 2014; 69 (8): 1008-25. DOI: https://doi.org/10.1111/all.12429
3. Dunn Galvin A., Roberts G., Regent L., Austin M., Kenna F., Schnadt S., Sanchez-Sanz A., Hernandez P., Hjorth B., Fernandez-Rivas M., Taylor S., Baumert J., Sheikh A., Astley S., Crevel R., Mills C. Understanding how consumers with food allergies make decisions based on precautionary labelling. Clin. Exp. Allergy. 2019; 49 (11): 1446-54. DOI: https://doi.org/10.1111/cea.13479
4. Постановление Кабинета Министров Республики Узбекистан № 490 от 12 июля 2017 года "Об утверждении Общего технического регламента о безопасности пищевой продукции в части ее маркировки". URL: https://lex.uz/docs/3266172
5. Davidović D., Bulatović M., Paunović K., Vasiljević N., Zarić D., Popović D., Milenković S. Precautionary allergen labelling in Serbia: market Audit and consumers’ perception. Iran J. Public Health. 2022; 51 (3): 587-95. DOI: https://doi.org/10.18502/ijph.v51i3.8935

Aimetova Sh.K.¹, Magbulova N.A.¹, Ismailova E.N.¹, Levitskaya Yu.V.¹^, ², Rakhmedova M.¹^, ², Kim S.A.¹, Geller S.I.³, Djambekova G.S.¹, Garib V.F.⁴

Food allergen labeling: analysis of packaged products on the Uzbek market

¹ International Center for Molecular Allergology, Ministry of Higher Education, Science and Innovation of the Republic of Uzbekistan, Tashkent, Republic of Uzbekistan

² Center for Advanced Technologies, Ministry of Higher Education, Science and Innovation of the Republic of Uzbekistan, Tashkent, Republic of Uzbekistan

³ Republican Specialized Scientific-Practical Medical Center of Pediatrics (RSSPMC Pediatrics), Tashkent, Republic of Uzbekistan

⁴ Karl Landsteiner University of Health Sciences, Vienna, Austria

Ensuring food safety is one of the key national priorities for the sustainable development of Uzbekistan. In recent years, there has been a steady increase in cases of allergic diseases. According to most studies, food allergies are diagnosed in 6-10 % of infants under one year and in 2 % of adults. Symptoms of food allergies can vary, ranging from localized reactions such as skin rashes and redness with itching to gastrointestinal symptoms like abdominal pain and vomiting, as well as respiratory symptoms including rhinitis and bronchospasm. The most dangerous conditions include laryngeal edema and anaphylactic shock. The most well-known food allergens are milk, eggs, peanuts, tree nuts (including almonds, cashews, and walnuts), fish (such as perch, cod, flounder, and salmon), shellfish (e. g. crabs, lobsters, and shrimp), soy, and wheat, collectively referred to as the "Big Eight". Starting January 1, 2023, sesame has been added to the list of significant allergens. However, the prevalence of these allergens varies by country, influenced by culinary traditions and food preparation practices in each region. The primary strategy for managing food allergy symptoms is to avoid contact with allergens. Food allergens in processed products can be hidden, unintentionally introduced as residues on equipment. According to European Union Regulation (EU) 1169/2011, to protect consumers, the labeling of prepackaged foods must list 14 ingredients that may cause allergies. Mandatory precautionary labeling is legally required. In Uzbekistan, to ensure consumers’ rights to accurate information about food products, the Cabinet of Ministers issued Resolution No. 490 on July 12, 2017, approving the General Technical Regulations on Food Safety Labeling. However, precautionary allergen labeling (PAL) remains voluntary and is not legally regulated, as is the case in most countries. To study the presence of allergen labeling on packaged food products, a survey of various products available in Uzbekistan’s market was conducted. The research took place in Tashkent from January to March 2023. Supermarkets with different price categories and seven categories of prepackaged products were selected for a broad assessment: cookies, baked goods and pasta, breakfast cereals, chocolates and candies, instant soups, meat products, and ready-made meals. Out of 195 prepackaged food products analyzed, 49.7 % had allergen information on the packaging, primarily imported products. PAL was most frequently observed in the following categories: "chocolates and candies" (82.4 %), "cookies" (71.1 %), "instant soups" (50 %), and "breakfast cereals" (50 %). It was less commonly found in packages of meat products (17.6 %), while allergen information was almost absent in "baked goods and pasta" and "ready-made meals". A detailed analysis of allergens listed on labels revealed that milk was the most common (98.9 %), followed by soy (83.5 %), wheat (68 %), eggs (61.8 %), nuts (60.8 %), and peanuts (50.5 %). Additionally, three types of precautionary allergen statements were identified in the samples, with some packages containing multiple statements. The most frequently used statement was "May contain traces of x [allergen]", found on 65.9 % of products. The statement "May contain x [allergen]" appeared on 41.2 % of samples, while the least common statement, "Produced in a facility that also processes x [allergen]", was found in 8.2 %. The second part of the study aimed to assess consumer attitudes toward PAL. Surveys were conducted in three branches of the "KORZINKA.UZ" supermarket chain in different districts using an adapted questionnaire to evaluate consumer perceptions and attitudes toward PAL. A total of 528 customers participated, the majority of whom were women (68.4 %). Overall, 285 participants were surveyed about their views on PAL. Among them, 85 were individuals with food allergies, 120 did not have allergies themselves but purchased food for family members with allergies, and 80 reported having food allergies both personally and among relatives. These groups shared similar characteristics based on age, marital status, and education level. The study results highlighted the lack of precautionary allergen labeling on most products, posing potential risks for consumers with food allergies. Furthermore, it revealed low consumer interest in food labeling, emphasizing the need for educational programs for the public and recommendations for food manufacturers to improve labeling practices.

References

1. Resolution Cabinet of Ministers of the Republic of Uzbekistan No 841 of 20 October 2018 "On measures to implement the National Sustainable Development Goals and Objectives for the period up to 2030". Appendix No 1. URL: https://lex.uz/docs/4013358?ONDATE=23.10.2018 (in Russian)
2. Muraro A., Werfel T., Hoffmann-Sommergruber K., Roberts G., Beyer K., Bindslev-Jensen C., Cardona V., Dubois A., duToit G., Eigenmann P., Fernandez Rivas M., Halken S., Hickstein L., Høst A., Knol E., Lack G., Marchisotto M.J., Niggemann B., Nwaru B.I., Papadopoulos N.G., Poulsen L.K., Santos A.F., Skypala I., Schoepfer A., Van Ree R., Venter C., Worm M., Vlieg-Boerstra B., Panesar S., de Silva D., Soares-Weiser K., Sheikh A., Ballmer-Weber B.K., Nilsson C., de Jong N.W., Akdis C.A.; EAACI Food Allergy and Anaphylaxis Guidelines Group. EAACI food allergy and anaphylaxis guidelines: diagnosis and management of food allergy. Allergy. 2014; 69 (8): 1008-25. DOI: https://doi.org/10.1111/all.12429
3. DunnGalvin A., Roberts G., Regent L., Austin M., Kenna F., Schnadt S., Sanchez-Sanz A., Hernandez P., Hjorth B., Fernandez-Rivas M., Taylor S., Baumert J., Sheikh A., Astley S., Crevel R., Mills C. Understanding how consumers with food allergies make decisions based on precautionary labelling. Clin Exp Allergy. 2019; 49 (11): 1446-54. DOI: https://doi.org/10.1111/cea.13479
4. Resolution Cabinet of Ministers of the Republic of Uzbekistan No 490 of 12 July 2017 "On approval of the General Technical Regulations on the safety of food products in terms of their labeling". URL: https://lex.uz/docs/3266172 (in Russian)
5. Davidović D., Bulatović M., Paunović K., Vasiljević N., Zarić D., Popović D., Milenković S. Precautionary allergen labelling in Serbia: market audit and consumers’ perception. Iran J Public Health. 2022; 51 (3): 587-95. DOI: https://doi.org/10.18502/ijph.v51i3.8935

Артамонов Н.С., Кузнецов И.И., Шаров Е.С., Артемов Д.М., Балаханова В.И., Шумицкая В.А., Шеметова А.Д., Халтурина Е.О.

Анализ структуры аллергического синдрома, ассоциированного с атипичным течением хронических активных герпес-вирусных инфекций у детей

ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), Москва, Российская Федерация

Введение. Прогрессирующее увеличение числа аллергических заболеваний (АЗ) среди детей разных возрастных групп обусловливает необходимость поиска ранних маркеров этой патологии, уточнение профиля сенсибилизации, а также выявление коморбидных состояний, ассоциированных с ними, в частности активное течение хронических вирусных инфекций, вызываемых вирусами семейства Herpesvirideae [1-5].

Цель - анализ частоты встречаемости, нозологической структуры и профиля сенсибилизации при различных формах АЗ у детей, страдающих атипичными хроническими активными герпес-вирусными инфекциями (АХА-ГВИ).

Материал и методы. Под нашим наблюдением находились 35 детей обоего пола от 5 до 14 лет, страдающих АХА-ГВИ, ассоциированных с различными формами АЗ (группа исследования). Группу сравнения (ГС) составили 50 условно здоровых детей, сопоставимых по полу и возрасту с детьми ГИ. В комплексное обследование детей были включены физикальное, иммунологическое и аллергологическое обследование с использованием серологических (иммуноферментный анализ - ИФА, ImmunoCАP), молекулярно-генетических (полимеразная цепная реакция в реальном времени - ПЦР-РВ) методов исследования, а также проточной цитофлуориметрии и других методов. От родителей/законных представителей участников исследования получено добровольное информированное согласие на участие в исследовании.

Статистическая обработка проведена с использованием стандартных компьютерных программ StatPlus, Microsoft Excel 2010.

Результаты. Согласно результатам проведенного исследования, у 78,82 % детей ГИ были выявлены АЗ, при этом доминирующими нозологическими формами аллергопатологии были атопический дерматит - 73,2 %, аллергический риноконъюнктивит - 65,7 %, бронхиальная астма - 24,7 %, хроническая крапивница - 10,3 % и другие нозологии. Установлено, что у 64,7 % детей ГИ имели место сопутствующие хронические заболевания ЛОР-органов (преимущественно хронический тонзиллит/тонзиллофарингит, хронический гайморит, синусит и пр.), а 85,8 % детей страдали дисбиотическими нарушениями микробиома кишечника в сочетании с бактериальными инфекциями кожи (пиодермия, фурункулез и другие гнойно-воспалительные инфекции).

При анализе профиля сенсибилизации у детей ГИ было выявлено, что сенсибилизация к широкому спектру бытовых аллергенов является доминирующей и наблюдается у 34,3 % пациентов. Сенсибилизация к аллергенам микроскопических грибков и разнообразным эпидермальным аллергенам выявлялась значительно реже и составляла 22,9 % случаев. Сенсибилизация к пыльцевым аллергенам детектирована у 20,0 % пациентов ГИ.

Заключение. Показано, что персистирующее течение АХА-ГВИ у детей ассоциировано с возникновением и/или активным течением АЗ, появлением моно- и/или поливалентной сенсибилизации к различным группам аллергенов, что является следствием измененной иммунологической реактивности на уровне как мукозального, так и системного иммунитета и способствует развитию множественных коморбидных состояний, а также значимо влияет на длительность и эффективность проводимой терапии.

Литература

1. Татаурщикова Н.С., Летяева О.И., Максимова А.В., Левкова Е.А. Герпетическая инфекция и аллергия как глобальная проблема современной медицины. Эффективная фармакотерапия. 2023; 19 (28): 24-9. DOI: https://doi.org/10.33978/2307-3586-2023-19-28-24-29
2. Нестерова И.В., Халтурина Е.О. Моно- и микст-герпесвирусные инфекции: ассоциированность с клиническими синдромами иммунодефицита. Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Медицина. 2018. 22 (2): 226-34. DOI: https://doi.org/10.22363/2313-0245-2018-22-2-226-234
3. Халтурина Е.О., Нестерова И.В., Маркова Т.П. Оптимизированная программа таргетной комбинированной интерфероно- и иммунотерапии в лечении атипичных хронических активных герпесвирусных ко-инфекций. Эффективная фармакотерапия. 2022; 18 (12): 58-63. DOI: https://doi.org/10.33978/2307-3586-2023-18-12-58-63
4. Халтурина Е.О., Гарскова Н.В., Шеметова А.Д. Персонифицированный подход к реабилитации иммунной системы у пациентов с круглогодичным аллергическим ринитом, страдающих рекуррентными ОРВИ и рецидивирующими герпесвирусными инфекциями. Инфекция и иммунитет. 2024; 14 (3): 623-31. DOI: https://doi.org/10.15789/2220-7619-PAT-16826
5. Халтурина Е.О., Нестерова И.В., Миронов А.Ю. Клиническая лабораторная диагностика интерферонопатий у иммунокомпрометированных пациентов с атипичными хроническими активными герпесвирусными инфекциями. Клиническая лабораторная диагностика. 2023; 68 (5): 266-71. DOI: https://doi.org/10.51620.0869-2084-2023-68-5-266-271

Artamonov N.S., Kuznetsov I.I., Sharov E.S., Artemov D.M., Balakhonova V.I., Shumitskaya V.A., Shemetova A.D., Khalturina E.O.

Analysis of the structure of the allergic syndrome associated with the atypical course of chronic active herpes virus infections in children

I.M. Sechenov First MSMU of the MOH of Russia (Sechenov University), Moscow, Russian Federation

Introduction. The progressive increase in the number of allergic diseases among children of different age groups necessitates the search for early markers of this pathology, clarification of the sensitization profile, as well as the identification of comorbid conditions associated with them, in particular, the active course of chronic viral infections caused by viruses of the Herpesvirideae family [1-5].

Aim. Аnalysis of the frequency of occurrence, nosological structure and profile of sensitization in various forms of allergic diseases (AD) in children suffering from atypical chronic active herpesvirus infections (ACHA-HVI).

Material and methods. We observed 35 children of both sexes, aged 5 to 14 years, suffering from ACHA-HVI associated with various forms of allergic diseases (study group). The comparison group (CG) consisted of 50 conditionally healthy children, comparable in sex and age with children of SG. The comprehensive examination of children included phy­sical, immunological and allergological examinations using serological (ELISA, ImmunoCAP), molecular genetic (qPCR) research methods, flow cytometry and other methods. Voluntary informed consent to participate in the study was obtained from the parents/legal representatives of the study participants. Statistical processing was performed using standard computer programs StatPlus, Microsoft Excel 2010.

Results. According to the results of the study, 78.82 % of children with SG had allergic diseases, while the dominant nosological forms of allergopathology were: atopic dermatitis - 73.2 %, allergic rhinoconjunctivitis - 65.7 %; bronchial asthma - 24.7 %; chronic urticaria - 10.3 % and other nosologies. It was found that 64.7 % of children with SG had concomitant chronic diseases of the ENT organs (mainly chronic tonsillitis/tonsillopharyngitis, chronic sinusitis, sinusitis, etc.), and 85.8 % of children suffered from dysbiotic disorders of the intestinal microbiome in combination with bacterial skin infections (pyoderma, furunculosis, and other purulent-inflammatory infections). When analyzing the sensitization profile in children with SG, it was revealed that sensitization to a wide range of household allergens is dominant and is observed in 34.3 % of patients. Sensitization to allergens of microscopic fungi and various epidermal allergens was detected much less frequently and accounted for 22.9 % of cases. Sensitization to pollen allergens was detected in 20.0 % of patients with SG.

Conclusion. It has been shown that the persistent course of ACHA-HVI in children is associated with the occurrence and/or active course of allergic diseases, the appearance of mono and/or polyvalent sensitization to various groups of allergens, which is a consequence of altered immunological reactivity both at the level of mucosal and systemic immunity and contributes to the development of multiple comorbid conditions, as well as significantly affects the duration and effectiveness of the therapy.

References

1. Tataurshchikova N.S., Letyaeva O.I., Maksimova A.V., Levkova E.A. Herpes infection and allergy as a global problem of modern. Effective pharmacotherapy. 2023; 19 (28): 24-9. DOI: https://doi.org/10.33978/2307-3586-2023-19-28-24-29 (in Russian)
2. Nesterova I.V., Khalturina E.O. Mono- and mixed-herpesvirus infections: association with clinical syndromes of immunodeficiency. RUDN Journal of Medicine. 2018; 22 (2): 226-34. DOI: https://doi.org/10.22363/2313-0245-2018-22-2-226-234 (in Russian)
3. Khalturina E.O., Nesterova I.V., Markova T.P. An optimized program of targeted combined interferono- and immunotherapy in the treatment of atypical chronic active herpesvirus co-infections. Effective pharmacotherapy. 2022; 18 (12): 58-63. DOI: https://doi.org/10.33978/2307-3586-2023-18-12-58-63 (in Russian)
4. Khalturina E.O., Garskova N.V., Shemetova A.D. Personalized approach to immune system rehabilitation in patients with year-round allergic rhinitis suffering from recurrent ARVI and recurrent herpes virus infections. Russian Journal of Infection and Immunity. 2024; 14 (3): 623-31. DOI: https://doi.org/10.15789/2220-7619-PAT-16826 (in Russian)
5. Khalturina E.O., Nesterova I.V., Mironov A.Yu. Clinical laboratory diagnostics of interferonopathies in immunocompromised patients with atypical chronic active herpesvirus infections. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika (Russian Clinical Laboratory Diagnostics). 2023; 68 (5): 266-71. DOI: https://doi.org/10.51620.0869-2084-2023-68-5-266-271 (in Russian)

Баймакова Е.А.

Ведение пациентов с бронхиальной астмой

ГУЗ "Саратовская областная детская клиническая больница", Саратов, Российская Федерация

В настоящее время аллергопатология занимает высокую позицию в структуре заболеваемости. По данным отчета о работе врача - аллерголога-иммунолога поликлинического отделения Саратовской областной детской клинической больницы, за 2023 г. всего проведено 2606 консультаций, из них 325 консультаций 175 пациентам с диагнозом "бронхиальная астма". 108 пациентов осмотрены однократно по причине территориальной удаленности либо хорошего контроля над заболеванием. Также заболевание было под контролем у пациентов: 29 осмотрены 2 раза в год, 12 пациентов осмотрены 3 раза в год.

Плохой контроль симптомов бронхиальной астмы (БА) имели 25 пациентов, которые были осмотрены 4 и более раз в течение года. Причины, по которым снижался контроль, были различными. Часто отмечается потеря контроля у пациентов с БА и выраженными проявлениями сезонной аллергии - обострениями аллергического ринита, что приводит к учащению симптомов БА у 10/40 % пациентов. Самой важной проблемой увеличения числа обострений БА являются острые респираторные вирусные инфекции - у 12/48 % пациентов. Также обращали на себя внимание пациенты, которые имели частые психоэмоциональные переживания, переходящие в обострения БА у 3/12 % пациентов

7 пациентов наблюдаются с тяжелой БА: 1 пациент - тяжелая астма, ассоциированная с цилиарной дискинезией, 1 пациент получает тройную терапию: высокие дозы будесонид/формотерол, тиотропия бромид, монтелукаст и 5 пациентов согласно 5 ступени GINA, получает: высокие дозы будесонид/формотерол или флутиказон/сальметерол, тиотропия бромид, монтелукаст и омализумаб. Данная терапия помогает достичь контроля заболевания, но пациенты требуют регулярного наблюдения.

Следует особо отметить пациентку Ю., 7 лет. Из анамнеза заболевания известно, что с 1,5 лет беспокоят проявления атопического дерматита, в данный период аллергообследование не проводилось. Затем, в возрасте 2-3 лет в теплое время года беспокоили выраженные проявления ринита, а с 4 лет стали беспокоить проявления бронхообструктивного синдрома. Требуется обратить внимание - у девочки симптомам обструкции всегда предшествовала многократная рвота по причине ацетонемического синдрома. Данные эпизоды имели тенденцию к учащению и с 5 лет стали беспокоить ежемесячно. При развитии всего симптомокомплекса ацетонемического синдрома и бронхо­обструкции состояние девочки требовало частых госпитализаций в стационар для проведения инфузионной терапии и курса системных глюкокортикостероидов, а также ежегодно отмечались симптомы ринита и конъюнктивита в весенне-летний период и требовало подключения комбинированной медикаментозной терапии (мометазон, левоцетиризин) в течение нескольких месяцев. У пациентки отмечался синдром оральной аллергии при употреблении в пищу яблок и продуктов, содержащих орехи, что проявлялось в зуде слизистой ротовой полости и кончика носа. Симптомы атопического дерматита с возрастом угасали, но случаи обострения отмечались до 6 лет.

При проведении аллергообследования выявлено: общий IgE - 656 МЕ/мл, эозинофилия крови - 8-11 %, по данным скарификационных аллергопроб с пыльцевыми аллергенами - береза ++++, полынь++. По данным анализа специфический IgE ImmunoCAP - береза 67,4, полынь 0,38, арахис 1,2 кЕдА/л. Глистная инвазия исключена.

Учитывая все проявления, был выставлен следующий диагноз: "бронхиальная астма, атопическая форма, впервые установленная. Поллиноз, сезонный аллергический ринит, среднетяжелого течения, сезонный аллергический конъюнктивит. Атопический дерматит, детская форма, средней степени тяжести, вне обострения. Поливалентная сенсибилизация: пыльцевая (деревья - береза, сорные травы - полынь), пищевая (арахис)".

Пациентке назначена базисная терапия флутиказон/сальметерол 25/125 мкг по 1 дозе 2 раза в день, через спейсер, длительно, данную терапию девочка получает по настоящее время, в течение 2 лет. Кроме того, назначена диета с полным исключением продуктов перекрестных пыльце деревьев. Проводилось подключение терапии аллергического ринита в период сезонных обострений. На фоне проводимой терапии в первый год лечения: обострения - синдром обструкции бронхов - стали отмечаться значительно реже, их число снизилось до 4 за год, а также ацетонемический синдром 1-2 раза в год, данные обострения купировались амбулаторно подключением небулайзерной терапии и обильного отпаивания пациента. На втором году терапии случаи обструкции - 2 раза в год, ацетонемичес­кий синдром 1 раз в год.

Данный клинический случай показывает нам пример аллергического жизненного цикла у пациентки, диффузность аллергических проявлений обусловлена наличием аллергического воспалительного процесса на кожных покровах, слизистых дыхательных путей и слизистой пищеварительного тракта.

Литература

1. Федеральные клинические рекомендации по ведению больных атопическим дерматитом [электронный ресурс]. Москва : Российская ассоциация аллергологов и клинических иммунологов, Союз педиатров России, Общероссийская общественная организация "Российское общество дерматовенерологов и косметологов", Межрегиональная общественная организация "Национальный альянс дерматовенерологов и косметологов", 2024. URL: https://cr.minzdrav.gov.ru/view-cr/265_3
2. Федеральные клинические рекомендации по ведению больных бронхиальной астмой [электронный ресурс]. Москва : Российская ассоциация аллергологов и клинических иммунологов, Союз педиатров России, Ассоциация врачей и специалистов медицины труда, Российское респираторное общество, 2024. URL: https://cr.minzdrav.gov.ru/view-cr/359_3
3. Федеральные клинические рекомендации по ведению больных первичной цилиарной дискинезией [электронный ресурс]. Москва : Союз педиатров России, Ассоциация медицинских генетиков, Российское респираторное общество, Ассоциация детских врачей Московской области, 2020. URL: https://www.pediatr-russia.ru/information/events/Проект %20ПЦД %20- %202021_на %20сайт.pdf?ysclid=m55qyuxxah18629165
4. Федеральные клинические рекомендации по ведению больных пищевой аллергии [электронный ресурс]. Москва : Союз педиатров России, 2018. URL: https://www.pediatr-russia.ru/information/klin-rek/deystvuyushchie-klinicheskie-rekomendatsii/Пищевая%20аллергия%20дети%20СПР%20_2019%20испр.pdf?ysclid=m55r2ruzch44714144

Baimakova E.A.

Management of patients with asthma

Saratov Regional Children’s Clinical Hospital, Saratov, Russian Federation

Allergopathology currently occupies a high position in the structure of morbidity. According to the report on the work of an allergist-immunologist at the polyclinic department of the Saratov Regional Children’s Clinical Hospital for 2023. A total of 2606 consultations were conducted, of which 325 consultations were given to 175 patients diagnosed with asthma. 108 patients were examined once due to their territorial remoteness or good disease control. The disease was also under control in patients: 29 were examined 2 times a year, 12 patients were examined 3 times a year. 25 patients who were examined four or more times during the year had poor control over asthma symptoms. The reasons for the decreased control were different. Loss of control is often noted in patients with asthma and severe manifestations of seasonal allergies - exacerbations of allergic rhinitis, which leads to an increase in asthma symptoms in 10/40 % of patients. The most important problem of increasing the number of exacerbations of asthma is acute respiratory viral infections in 12/48 % of patients. Patients who had frequent psychoemotional experiences turning into exacerbations of asthma in 3/12 % of patients also attracted attention. Seven patients are being treated with severe asthma: 1 patient has severe asthma associated with ciliary dyskinesia, 1 patient receives triple therapy: high doses of budesonide/formoterol, tiotropium bromide, montelukast and 5 patients according to GINA level 5 receive: high doses of budesonide/formoterol or fluticasone/salmeterol, tiotropium bromide, montelukast and omalizumab. This therapy helps to achieve control of the disease, but patients require regular monitoring. Of particular note is patient Yu. 7 years. It is known from the anamnesis of the disease that since the age of 1.5, manifestations of atopic dermatitis have been bothering, and no allergy examination has been performed during this period. Then, at the age of 2-3, in the warm season, they were worried about the pronounced manifestations of rhinitis, and from the age of 4, they began to worry about the manifestations of bronchoobstructive syndrome. Attention should be paid to the fact that the girl’s symptoms of obstruction were always preceded by repeated vomiting due to acetone syndrome. These episodes tended to become more frequent and began to bother me on a monthly basis from the age of 5. With the development of the entire symptom complex of acetoneemic syndrome and bronchial obstruction, the girl’s condition required frequent hospital admissions for infusion therapy and a course of systemic glucocorticosteroids. Symptoms of rhinitis and conjunctivitis were also noted annually in the spring and summer period and required the use of combined drug therapy - mometasone, levocetirizine, for several months. The patient had an oral allergy syndrome when eating apples and products containing nuts, which manifested itself in itching of the oral mucosa and itching of the tip of the nose. The symptoms of atopic dermatitis subsided with age, but cases of exacerbation were noted up to 6 years. Allergological examination revealed: total IgE 656 IU/ml, blood eosinophilia 8-11 %, according to scarification allergy tests with pollen allergens - birch pollen extract ++++, Artemisia pollen extract ++. According to the analysis, the specific IgE ImmunoCAP is birch pollen extract 67.4, Artemisia pollen extract 0.38, peanuts 1.2 kUa/L. Helminthic invasion is excluded. Taking into account all the manifestations, a diagnosis was made: Asthma, an atopic form that has been identified for the first time. Hay fever, seasonal allergic rhinitis, moderate to severe course, seasonal allergic conjunctivitis. Atopic dermatitis, pediatric form, moderate severity, without exacerbation. Polyvalent sensitization: pollen (trees - birch), (weeds - Artemisia), food (peanuts). The patient was prescribed basic therapy fluticasone/salmeterol 25/125 mcg 1 dose 2 times a day, through a spacer, for a long time, the girl has been recei­ving this therapy for 2 years. A diet has also been prescribed with the complete exclusion of cross-pollen products from trees. The treatment of allergic rhinitis was connected during the period of seasonal exacerbations. Against the background of the therapy in the first year of treatment: exacerbations - bronchial obstruction syndrome began to occur much less frequently, the number decreased to 4 per year, as well as acetone syndrome 1-2 times a year, these exacerbations were stopped on an outpatient basis by nebulizer therapy and copious soldering of the patient. In the second year of therapy, cases of obstruction occur 2 times a year, acetone syndrome 1 time a year. This clinical case shows us an example of an allergic life cycle in a patient, the diffusivity of allergic manifestations is due to the presence of an allergic inflammatory process on the skin, mucous membranes of the respiratory tract and the mucous membrane of the digestive tract.

References

1. Federal clinical guidelines for the management of patients with atopic dermatitis. Moscow: Russian Society of Dermatovenerologists and Cosmetologists, Russian Association of Allergologist and Clinical Immunologist, Union of Pediatricians of Russia, National Alliance of Dermatovenerologists and Cosmetologists, 2024. URL: https://cr.minzdrav.gov.ru/view-cr/265_3 (in Russian)
2. Federal clinical guidelines for the management of patients with asthma. Russian Association of Allergologist and Clinical Immunologist, Union of Pediatricians of Russia, Association of Doctors and Occupational Medicine Specialists, Russian Respiratory Society, 2024. URL: https://cr.minzdrav.gov.ru/view-cr/359_3 (in Russian)
3. Federal clinical guidelines for the management of patients with primary ciliary dyskinesia. Union of Pediatricians of Russia, Association of Medical Geneticists, Russian Respiratory Society, Association of Pediatricians of the Moscow Region, 2020. URL: https://www.pediatr-russia.ru/information/events/Проект %20ПЦД %20- %202021_на %20сайт.pdf?ysclid=m55qyuxxah18629165 (in Russian)
4. Federal clinical guidelines for the management of patients with primary food allergy. Union of Pediatricians of Russia, 2020. URL: https://www.pediatr-russia.ru/information/klin-rek/deystvuyushchie-klinicheskie-rekomendatsii/Пищевая%20аллергия %20дети %20СПР %20_2019 %20испр.pdf?ysclid=m55r2ruzch44714144 (in Russian)

Балаханова В.И., Шаров Е.С., Артамонов Н.С., Кузнецов И.И., Артемов Д.М., Шумицкая В.А., Шеметова А.Д., Халтурина Е.О.

Анализ результатов когортного исследования по вопросам осведомленности и профилактики пищевой аллергии среди врачей клинических специальностей первичного звена г. Москвы

ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова (Сеченовский Университет), Москва, Российская Федерация

Введение. Пищевая аллергия (ПА) продолжает оставаться одной из актуальных проблем современной медицины. По данным World Allergy Organization (WAO), она принимает характер пандемии и является глобальным бедствием, бросающим вызов развитию, прогрессу и стабильности общества и мира в целом, что требует принятия чрезвычайных и комплексных мер глобального реагирования.

Цель работы - изучение степени осведомленности врачей клиницистов первичного звена по вопросам встречаемости, клиническим проявлениям, диагностике, лечению и профилактике ПА, а также повышение информированности врачей об актуальных вопросах ПА посредством разработки информационных кластеров (программа тематического повышения квалификации, онлайн-курсы, видеоконтент, информационный плакат и пр.).

Материал и методы. В исследовании принимали участие 170 врачей клинических специальностей (терапевты - 62 врача; эндокринологи - 12 врачей, оториноларингологи - 34 врача, неврологи - 27 врачей, педиатры - 35 врачей), работающих в учреждениях первичного уровня системы здравоохранения (поликлиники) г. Москвы, обоего пола от 25 до 70 лет. Для реализации поставленных целей было проведено одномоментное (поперечное) когортное проспективное эпидемилогическое исследование с использованием метода анкетирования. Для этого была разработана анонимная анкета "Что Вы знаете о пищевой аллергии?" состоящая из 30 вопросов трех категорий: клинические проявления ПА; современные возможности диагностики ПА; методы лечения и профилактики ПА.

Результаты. Выявлен низкий уровень осведомленности врачей терапевтического профиля и клинических специальностей по вопросам эпидемиологии, клинических проявлений, диагностики и профилактики ПА среди взрослого и детского населения страны. Вопросы эпидемиологии ПА и анафилаксии как проявление ПА вызвали затруднение у 40 % респондентов. Осведомленность об основных клинических проявлениях, механизмах и путях развития ПА, а также о мерах профилактики и оказании помощи при развитии пищевой анафилаксии составляла 65 %. Вопросы о современных методах диагностики и лечения ПА представляли значительные трудности для 63 % респондентов.

В то время как вопросы, определяющие особенности образа жизни пациентов, страдающих ПА, выявили статистически значимые различия между врачами-педиатрами и врачами клинических специальностей, работающих со взрослым населением. Так, педиатры проявили значительно лучшую осведомленность о качестве жизни, имеющихся ограничениях и психофизиологическом статусе детей, страдающих ПА, а также о взрослых членах семьи, где ребенок болен ПА. Необходимо отметить, что полученные сведения об информированности врачей по вопросам ПА в Москве необходимы органам здравоохранения для принятия объективных административных решений по улучшению этой осведомленности. Итогом проведенного исследования стала разработка информационного кластера (видеофильм, курсы повышения квалификации, плакат и пр.) для повышения осведомленности врачей по распространенности, особенностям клинических проявлений, современным методам диагностики и возможностям лечения ПА, а также оказания неотложной помощи при пищевой анафилаксии среди врачей.

Balakhanova V.I., Sharov E.S., Artamonov N.S., Kuznetsov I.I., Artyomov D.M., Shumitskaya V.A., Shemetova A.D., Khalturina E.O.

Analysis of the results of a cohort study on food allergy awareness and prevention among primary care physicians in Moscow

I.M. Sechenov First MSMU of the MOH of Russia (Sechenov University), Moscow, Russian Federation

Introduction. Food allergy continues to be one of the actual issues in modern medicine and, according to the World Allergy Organization (WAO), has reached pandemic proportions, representing a global crisis that challenges the development, progress, and stability of society and the whole world. This situation demands for extraordinary and comprehensive measures for global response.

The aim of this study is to study the level of awareness among primary care physicians regarding the prevalence, clinical manifestations, diagnosis, treatment, and prevention of food allergies (FA), as well as to enhance physicians’ knowledge about topical issues related to FA through the development of informational clusters (education programs, online courses, video content, informational posters, etc.).

Material and methods. The study involved 170 physicians from various clinical specialties (62 therapists, 12 endocrinologists, 34 otolaryngologists, 27 neurologists, and 35 pediatricians) working in primary health care institutions (polycli­nics) in Moscow, of both sexes and aged from 25 to 70 years. To achieve the study aims, a cross-sectional cohort, prospective epidemiological research was conducted using a questionnaire method. An anonymous survey titled "What do you know about food allergy?" was developed, consisting of 30 questions divided into three categories: clinical manifestations of FA, modern diagnostic capabilities for FA, and methods for treatment and prevention of FA.

Results. The study revealed a low level of awareness among therapeutic and clinical specialties regarding the epidemio­logy, clinical manifestations, diagnosis, and prevention of food allergies among both adult and pediatric populations in the country. Questions regarding the epidemiology of FA and anaphylaxis as a manifestation of FA caused difficulties for 40 % of respondents. Awareness of the main clinical manifestations, mechanisms, and pathways of FA development, as well as preventive measures and assistance during the emergence of food anaphylaxis, was at 65 %. Questions concerning modern methods of diagnosing and treating food allergies represented significant challenges for 63 % of respondents. Furthermore, questions about lifestyle factors affecting patients with FA revealed statistically significant differences between pediatricians and clinical specialists working with the adult population. Pediatricians exhibited significantly better awareness regarding the quality of life, existing limitations, and the psycho-physiological status of children with FA, as well as of adult family members living with a child affected by FA. It is important to note that the researches regarding healthcare professionals’ awareness of FA in Moscow are vital for health authorities to make informed administrative decisions aimed at enhancing this awareness.

Conclusion. The result of this study was the development of an informational cluster (including video content, education courses, posters, etc.) aimed at increasing physicians’ awareness regarding the prevalence, characteristics of clinical manifestations, modern diagnostic methods, and treatment possibilities for FA, as well as providing emergency assistance during food anaphylaxis among doctors.

Бурыгина Е.В., Козлова Я.И., Фролова Е.В., Учеваткина А.Е., Филиппова Л.В., Васильева Н.В.

Дифференциальная диагностика эндотипов хронической спонтанной крапивницы

ФГБОУ ВО "СЗГМУ им. И.И. Мечникова" Минздрава России, Санкт-Петербург, Российская Федерация

Хроническая спонтанная крапивница (ХСК) - гетерогенная по своим иммунопатологическим механизмам (эндотипам) группа заболеваний [1]. Особое внимание заслуживает аутоиммунная форма ХСК, для которой характерно тяжелое течение и плохой ответ на стандартные схемы терапии [2]. Внедрение методов дифференциальной диагностики эндотипов ХСК в клиническую практику открывает перспективы персонификации лечения данной патологии.

Цель исследования - выполнить дифференциальную диагностику ХСК с помощью непрямого теста активации базофилов (ТАБ) и пробы с аутологичной сывороткой (ПАС).

Материал и методы. В проспективное исследование включили 120 взрослых пациентов с ХСК с медианой возраста 43 [30; 55] года, 85 (70,8 %) женщин и 35 мужчин. Оценивали данные анамнеза, продолжительность ХСК, активность заболевания по опроснику UAS7, уровень общего IgE ("Полигност", Россия), результаты ПАС, ответ на биологическую терапию. Непрямой ТАБ с использованием базофилов здорового донора выполнили методом проточной цитометрии (Allerginicity kit, Beckman-Coulter, USA) с идентификацией степени активации базофилов по количеству клеток с высокой экспрессией CD203c. ТАБ считали положительным при индексе стимуляции (ИС) >2.

Результаты. ПАС была положительной у 72 (60,0 %) пациентов, положительный ТАБ - у 45 (37,5 %). Сочетание положительных результатов ПАС и ТАБ выявили у 38 (31,7 %) пациентов, отрицательных результатов - у 41 (34,2 %). Несовпадение результатов ПАС и ТАБ отметили у 41 (34,1 %) пациентов: ПАС(+) ТАБ(-) - у 34 (28,3 %), ПАС(-) ТАБ(+) - у 7 (5,8 %).

Пациенты с эндотипом ПАС(-) ТАБ(-) были моложе - 34 [28; 49] лет, по сравнению с ПАС(+) ТАБ(-) 46 [36; 60] (р = 0,032). Средняя активность заболевания по UAS7 в группе ПАС(+) ТАБ(+) была существенно выше - 26 [19; 35] баллов (р = 0,014) по сравнению с другими группами ПАС(-) ТАБ(-) - 17 [13; 25], ПАС(+) ТАБ(-) - 14 [9; 22], ПАС(-) ТАБ(+) - 15 [14; 22]. У пациентов с ПАС(+) ТАБ(+) чаще отмечали тяжелое течение заболевания (р=0,018). Были обнаружены значимые различия между уровнем общего IgE у пациентов с различными эндотипами ПАС(+) ТАБ(+) - 9,0 [3,0; 24,5] МЕ/мл, ПАС(-) ТАБ(-) - 50,0 [16,5; 158,5] МЕ/мл, ПАС(+) ТАБ(-) - 58,0 [15,0; 105,8] МЕ/мл, ПАС(-) ТАБ(+) - 83,0 [8,8; 167,0] МЕ/мл (р = 0,002). Также в группе ПАС(+) ТАБ(+) по сравнению с ПАС(-) ТАБ(-) чаще отмечали базопению (р = 0,035), повышение АТ к ТПО (р = 0,049).

Отсутствие ответа на омализумаб наблюдали только в группе ПАС(+) ТАБ(+) у 7/16 (44 %) пациентов, частичный или поздний ответ - у 6/16 (37,5 %). Ранний ответ на омализумаб отмечали в группе ПАС(-) ТАБ(-) у 16/20 (80 %) пациентов, ПАС(+) ТАБ(+) - у 3/16 (19 %), ПАС(+) ТАБ(-) - у 6/9 (67 %).

Заключение. Непрямой тест активации базофилов (ТАБ) методом проточной цитометрии и проба с аутологичной сывороткой (ПАС) могут применяться для дифференциальной диагностики эндотипов ХСК. Для пациентов с эндотипом ПАС(+) ТАБ(+), что соответствует аутоиммунной форме ХСК, характерен более старший возраст, высокая активность и тяжесть течения заболевания, базопения, повышение антител к ТПО, низкий уровень общего IgE в сыворотке крови, поздний, частичный ответ или резистентность к омализумабу.

Литература

1. Kolkhir P., Bonnekoh H., Metz M., Maurer M. Chronic spontaneous urticaria: a review. JAMA. 2024; 332 (17): 1464- 77. DOI: https://doi.org/10.1001/jama.2024.15568
2. Zuberbier T., Ensina L.F., Giménez-Arnau A., Grattan C., Kocatürk E., Kulthanan K., Kolkhir P., Maurer M. Chronic urticaria: unmet needs, emerging drugs, and new perspectives on personalised treatment. Lancet. 2024; 404 (10450): 393-404. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(24)00852-3

Burygina E.V., Kozlova Ya.I., Frolova E.V., Uchevatkina A.E., Filippova L.V., Vasilyeva N.V.

Differential diagnosis of endotypes of chronic spontaneous urticaria

NWSMU n. a. I.I. Mechnikov of the MOH of Russia, St. Petersburg, Russian Federation

Chronic spontaneous urticaria (CSC) is a group of diseases that is heterogeneous in its immunopathological mechanisms (endotypes) [1]. Special attention should be paid to the autoimmune form of CSC, which is characterized by a severe course and poor response to standard therapy regimens [2]. The introduction of methods of differential diagnosis of CSC endotypes into clinical practice opens up prospects for personalizing the treatment of this pathology.

Aim - to perform a differential diagnosis of CSC using an indirect basophil activation test (BAT) and an autologous serum test (ASS).

Material and methods. The prospective study included 120 adult patients with CSC with a median age of 43 [30; 55] years, 85 (70.8 %) women and 35 men. The anamnesis data, the duration of CSC, the activity of the disease according to the UAS7 questionnaire, the level of total IgE (Polygonost, Russia), the results of ASS, and the response to biological therapy were evaluated. Indirect BAT using basophils from a healthy donor was performed by flow cytometry (Allerginicity kit, Beckman-Coulter, USA) with identification of the degree of basophil activation by the number of cells with high CD203c expression. BAT was considered positive at the stimulation index (SI) >2.

Results. The autologous serum sample was positive in 72 (60.0 %) patients, and BAT was positive in 45 (37.5 %). A combination of positive ASS and BAT results was detected in 38 (31.7 %) patients, and negative results in 41 (34.2 %). The discrepancy between the results of ASS and BAT was noted in 41 (34.1 %) patients: ASS(+) BAT(-) in 34 (28.3 %), ASS(-) BAT(+) in 7 (5.8 %). Patients with the ASS(-) BAT(-) endotype were younger - 34 [28; 49] years old, compared with ASS(+) BAT(-) 46 [36; 60] (p = 0.032). The average UAS7 disease activity in the ASS(+) BAT(+) group was significantly higher - 26 [19; 35] points (p = 0.014) compared with other ASS(-) BAT(-) groups - 17 [13; 25], ASS(+) BAT(-) - 14 [9; 22], ASS(-) BAT(+) - 15 [14; 22]. Patients with ASS(+) BAT(+) were more likely to have a severe course of the disease (p = 0.018).Significant differences were found between the level of total IgE in patients with different endotypes of ASS(+) BAT(+) - 9,0 [3,0; 24,5] IU/ml, ASS(-) BAT(-) - 50,0 [16,5; 158,5] IU/ml, ASS(+) BAT(-) - 58.0 [15.0; 105.8] IU/ml, ASS(-) BAT(+) - 83,0 [8,8; 167,0] IU/ml (p = 0.002). Also, in the ASS(+) BAT(+) group, basopenia (p = 0.035) and an increase in AB to TPO (p = 0.049) were more often noted than in ASS(-) BAT(-). A lack of response to omalizumab was observed only in the ASS(+) BAT(+) group in 7/16 (44 %) patients, partial or late response in 6/16 (37.5 %). Early response to omalizumab was noted in the ASS(-) BAT(-) group in 16/20 (80 %) patients, ASS(+) BAT(+) in 3/16 (19 %), ASS(+) BAT(-) in 6/9 (67 %).

Conclusion. The indirect basophil activation test (BAT) by flow cytometry and the autologous serum test (ASS) can be used for the differential diagnosis of CSC endotypes. Patients with the ASS(+) BAT(+) endotype, which corresponds to the autoimmune form of CSC, are characterized by an older age, high activity and severity of the disease, basopenia, increased antibodies to TPO, low serum total IgE, late, partial response or resistance to omalizumab.

References

1. Kolkhir P., Bonnekoh H., Metz M., Maurer M. Chronic spontaneous urticaria: a review. JAMA. 2024; 332 (17): 1464-77. DOI: https://doi.org/10.1001/jama.2024.15568
2. Zuberbier T., Ensina L.F., Giménez-Arnau A., Grattan C., Kocatürk E., Kulthanan K., Kolkhir P., Maurer M. Chronic urticaria: unmet needs, emerging drugs, and new perspectives on personalised treatment. Lancet. 2024; 404 (10450): 393-404. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(24)00852-3

Гарскова Н.В.¹, Балаханова В.И.², Шаров Е.С.², Артамонов Н.С.², Кузнецов И.И.², Артемов Д.М.², Шумицкая В.А.², Халтурина Е.О.²

Возможности и перспективы применения персонифицированной программы реабилитации иммунной системы пациентов с круглогодичным аллергическим ринитом, страдающих рекуррентными ОРВИ и рецидивирующими герпес-вирусными инфекциями

¹ Академия постдипломного образования ФГБУ ФНКЦ ФМБА России, Москва, Российская Федерация

² ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), Москва, Российская Федерация

Введение. Актуальной и сложной проблемой в практике врача клинического иммунолога является лечение иммунокомпрометированных пациентов с аллергическими заболеваниями (АЗ), сочетанными с рецидивирующими вирусными инфекциями, такими как рекуррентные ОРВИ (рОРВИ) и часто рецидивирующие хронические герпес-вирусные инфекции (рХГВИ) [1-3]. Разнообразные нарушения врожденного и адаптивного звеньев иммунитета у этих пациентов, возникающие на фоне хронического аллергического воспаления и персистирующего течения вирусной инфекции, способствуют развитию коинфицирования и утяжелению течения АЗ, снижению эффективности фармакотерапии, ухудшению качества жизни пациентов [4, 5]. Изучение особенностей иммунопатогенеза АЗ, сочетанных с рОРВИ и рХГВИ, является основой для создания новых персонифицированных подходов к терапии этих пациентов, направленных на реабилитацию иммунной системы и восстановление дисбаланса в работе мукозального и системного иммунитета.

Цель - выявить особенности функционирования иммунной системы у пациентов с КАР, ассоциированным с рОРВИ и рХГВИ, на основании которых разработать персонифицированную программу реабилитации иммунной системы с включением таргетной интерфероно- и иммунотерапии с последующей оценкой ее клинико-иммунологической эффективности.

Материал и методы. В группу исследования (ГИ) были включены 36 взрослых пациентов обоего пола 24-64 лет, страдающих круглогодичным аллергическим ринитом (КАР), ассоциированным с рОРВИ и рХГВИ. Группу сравнения (ГС) составили 50 условно здоровых лиц, сопоставимых по полу и возрасту с пациентами ГИ. Всем пациентам ГИ было проведено физикальное, иммунологическое и аллергологическое обследования, с использованием серологических (ИФА, ImmunoCUP), молекулярно-генетических (ПЦР-РВ) методов исследования, проточной цитофлуориметрии и другие методы. От всех пациентов получено добровольное информированное согласие на участие в исследовании.

Статистическая обработка проведена с использованием стандартных компьютерных программ StatPlus.

Результаты и обсуждение. У пациентов с КАР, ассоциированным с рОРВИ и рХГВИ, выявлены клинико-иммунологические критерии иммунокомпрометированности. При оценке клинических критериев выявлено, что тяжесть симптомов КАР по ВАШ составила 5,5 [4,0; 6,5], частота эпизодов рОРВИ 7,5 [4,8; 10,5] в год, а частота обострений рХГВИ 6,5 [5,3; 11,5] в год. При иммунологическом обследовании выявлен дефицит индуцированной продукции ИФНα II-III степени, снижение количества ЕКК CD3^-CD16⁺CD56⁺, в сочетании со снижением количества ЦТЛ. Для коррекции выявленных нарушений в ИС и системе интерферонов разработана комплексная программа реабилитации иммунной системы (ИС), включающая пролонгированную локальную (гель) и системную (суппозитории) терапию рИФНα2b в комплексе с антиоксидантами, а также гексапептид (имунофан). Показана высокая клинико-иммунологическая эффективность проводимой интерфероно- и иммунотерапии, позволяющая достичь контроля симптомов КАР, статистически значимо снизить частоту эпизодов рОРВИ в 3 раза и обострений рХГВИ в 1,9 раз, а также зафиксировать тенденцию к восстановлению имеющихся дисрегуляторных нарушений в ИС. Показана актуальность разработки программ реабилитации ИС с включением интерфероно- и иммуномодулирующей терапии для иммуннокомпроментированных пациентов, страдающих КАР, ассоциированным с рОРВИ и рХГВИ.

Литература

1. Татаурщикова Н.С., Летяева О.И., Максимова А.В., Левкова Е.А. Герпетическая инфекция и аллергия как глобальная проблема современной медицины. Эффективная фармакотерапия. 2023; 19 (28): 24-9. DOI: https://doi.org/10.33978/2307-3586-2023-19-28-24-29
2. Нестерова И.В., Халтурина Е.О. Моно- и микст- герпесвирусные инфекции: ассоциированность с клиническими синдромами иммунодефицита. Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Медицина. 2018; 22 (2): 226-34. DOI: https://doi.org/10.22363/2313-0245-2018-22-2-226-234
3. Халтурина Е.О., Нестерова И.В., Маркова Т.П. Оптимизированная программа таргетной комбинированной интерфероно- и иммунотерапии в лечении атипичных хронических активных герпесвирусных ко-инфекций. Эффективная фармакотерапия. 2022; 18 (12): 58-63. DOI: https://doi.org/10.33978/2307-3586-2023-18-12-58-63
4. Халтурина Е.О., Гарскова Н.В., Шеметова А.Д. Персонифицированный подход к реабилитации иммунной системы у пациентов с круглогодичным аллергическим ринитом, страдающих рекуррентными ОРВИ и рецидивирующими герпесвирусными инфекциями. Инфекция и иммунитет. 2024; 14 (3): 623-31. DOI: https://doi.org/10.15789/2220-7619-PAT-16826
5. Халтурина Е.О., Нестерова И.В., Миронов А.Ю. Клиническая лабораторная диагностика интерферонопатий у иммунокомпрометированных пациентов с атипичными хроническими активными герпесвирусными инфекциями. Клиническая лабораторная диагностика. 2023; 68 (5): 266-71. DOI: https://doi.org/10.51620.0869-2084-2023-68-5-266-271

Garskova N.V.¹, Balakhanova V.I.², Sharov E.S.², Artamonov N.S.², Kuznetsov I.I.², Artemov D.M.², Shumitskaya V.A.², Khalturina E.O.²

Possibilities and prospects of using a personalized program for the rehabilitation of the immune system of patients with perennial allergic rhinitis suffering from recurrent acute respiratory viral infections and recurrent herpes viral infections

¹ Academy of postgraduate education of the FSCC STMCMT of the FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation

² I.M. Sechenov First Moscow State Medical University of the MOH of Russia (Sechenov University), Moscow, Russian Federation

Introduction. A relevant and complex problem in the practice of clinical immunologist is the treatment of immunocompromised patients suffering from allergic diseases (AD) associated with recurrent viral infections, such as recurrent acute respiratory viral infections (rARVI) and frequently recurrent chronic herpes virus infections (rCHVI) [1-3]. The diverse disturbances in both innate and adaptive immune responses in these patients, occurring against a background of chronic allergic inflammation and persistent viral infection, contribute to the development of co-infections, wor­sening the course of AD, reducing the efficiency of pharmacotherapy, and deteriorating patients’ quality of life [4, 5]. The study of the immunopathogenesis of AD in conjunction with rARVI and rCHVI is fundamental to creating new, personalized therapeutic approaches aimed at rehabilitating the immune system and recovering the balance in mucosal and systemic immunity.

Theaim of this study is to identify the peculiarities of immune system functioning in patients with year-round allergic rhinitis (YAR) associated with rARVI and rCHVI, upon which a personalized rehabilitation program for the immune system will be developed, including targeted interferon and immunotherapy, with subsequent assessment of its clinical-immunolo­gical efficacy.

Material and methods. The study group (SG) consisted of 36 adult patients of both genders 24-64 years old suffering from YAR in association with rARVI and rCHVI. The comparison group (CG) included 50 conditionally healthy individuals matched by sex and age to the SG patients. All SG patients underwent physical, immunological, and allergological examinations, using serological (ELISA, ImmunoCAP), molecular-genetic (PCR-RT) methods, flow cytometry, and other methods. Informed consent was obtained from all patients prior to their participation in the study. Statistical analysis was performed using standard computer programs StatPlus.

Results and discussion. Clinico-immunological criteria for immunocompromised were identified in patients with YAR associated with rARVI and rCHVI. Clinical assessment revealed that the severity of PAR symptoms, measured by the Visual Analog Scale (VAS), was 5.5 [4.0; 6.5], with the frequency of rARVI being 7.5 [4.8; 10.5] episodes per year, and the rate of rCHVI exacerbations being 6.5 [5.3; 11.5] per year. Immunological examination indicated a deficiency in the induced production of IFN-α II-III stages, a decrease in the number of natural killer cells (NK) CD3^-CD16⁺CD56⁺, with a reduction in cytotoxic T lymphocytes (CTLs).

To correct the identified disturbances in the immune system (IS) and the interferon system, a complex rehabilitation program for the IS was developed, which included prolonged local (gel) and systemic (suppositories) therapy with recombinant IFNα2b combined with antioxidants, as well as the hexapeptide Immunofan. High clinical-immunological efficacy of the administered interferon and immunotherapy was demonstrated, making possible to control over YAR symptoms, statistically significantly reduce the frequency of rARVI episodes by 3 times and exacerbations of rCHVI by 1.9 times, as well as continuing a trend towards the restoration of dysregulatory disturbances in the IS.

The relevance of developing rehabilitation programs for the IS including interferon and immunomodulatory therapy for immunocompromised patients suffering from YAR associated with rARVI and rCHVI was demonstrated.

References

1. Tataurshchikova N.S., Letyaeva O.I., Maksimova A.V., Levkova E.A. Herpes infection and allergy as a global problem of modern medicine. Effective pharmacotherapy. 2023; 19 (28): 24-9. DOI: https://doi.org/10.33978/2307-3586-2023-19-28-24-29 (in Russian)
2. Nesterova I.V., Khalturina E.O. Mono- and mixed-herpesvirus infections: association with clinical syndromes of immunodeficiency. RUDN Journal of Medicine. 2018; 22 (2): 226-34. DOI: https://doi.org/10.22363/2313-0245-2018-22-2-226-234 (in Russian)
3. Khalturina E.O., Nesterova I.V., Markova T.P. An optimized program of targeted combined interferono- and immunotherapy in the treatment of atypical chronic active herpesvirus co-infections. Effective pharmacotherapy. 2022; 18 (12): 58-63. DOI: https://doi.org/10.33978/2307-3586-2023-18-12-58-63 (in Russian)
4. Khalturina E.O., Garskova N.V., Shemetova A.D. Personalized approach to immune system rehabilitation in patients with year-round allergic rhinitis suffering from recurrent ARVI and recurrent herpes virus infections. Russian Journal of Infection and Immunity. 2024; 14 (3): 623-31. DOI: https://doi.org/10.15789/2220-7619-PAT-16826 (in Russian)
5. Khalturina E.O., Nesterova I.V., Mironov A.Yu. Clinical laboratory diagnostics of interferonopathies in immunocompromised patients with atypical chronic active herpesvirus infections. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika (Russian Clinical Laboratory Diagnostics). 2023; 68 (5): 266-71. DOI: https://doi.org/10.51620.0869-2084-2023-68-5-266-271 (in Russian)

Гринько Е.К.¹, Донецкова А.Д.^2-4

Индукция толерантности к аллотрансплантату кожи у костномозговых химер C57BL/6→BALB/c

¹ ФГБУ "ГНЦ Институт иммунологии" ФМБА России, Москва, Российская Федерация

² ФГБНУ "НИИМТ им. акад. Н.Ф. Измерова" Минздрава России, Москва, Российская Федерация

³ ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России (Пироговский Университет), Москва, Российская Федерация

⁴ ФГАОУ ВО "РУДН им. Патриса Лумумбы" Минобрнауки России, Москва, Российская Федерация

Кожа является периферическим органом иммунной системы. В ней диффузно расположено большое количество лимфоидных элементов (интраэпидермальные и дермальные Т-лимфоциты, в том числе CD8αα и γδТ, врожденные лимфоидные клетки - ILC), кератиноциты эпидермиса, тучные клетки, макрофаги дермы и два основных варианта дендритных клеток - миелоидные и клетки Лангерганса [1]. Эти особенности кожи делают ее сложной для трансплантации с высокой вероятностью развития отторжения. Предотвращение отторжения возможно при формировании толерантности - развитии гемопоэтического химеризма после трансплантации костного мозга. Для освобождения костномозговой ниши реципиента и приживления донорских гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) необходимо проведение кондиционирования, желательно с минимальным повреждением остальных клеток и органов реципиента [2]. Мы приводим результаты по индукции толерантности к аллогенным кожным трансплантатам посредством создания гемопоэтического химеризма у реципиентов с помощью немиелоаблативного кондиционирования и моноклональных антител (МкАт).

Исследование проводили в модели на мышах линий Balb/c (доноры) и C57BL/6 (реципиенты). Мыши были разделены на 5 групп в зависимости от режима кондиционирования (по 3 мыши в каждой группе). Всем животным была проведена трансплантация аллогенного костного мозга (аТКМ) через сутки после облучения и кожного лоскута (КЛ) на 60-е сутки после аТКМ. Режим кондиционирования был немиелоаблативным и включал облучение всего тела (ТОТ) в дозе 3 Гр, введение МкАт против CD8 на -2 сут и CD40L за 6 ч до аТКМ (1-я группа). 2-я группа получала дополнительно МкАт против CD4 совместно с МкАт против CD8. 3-я группа - МкАт против CD40L в день пересадки КЛ. Мышам 4-й группы дополнительно проводили инфузию донорских лимфоцитов (ДЛИ). Контрольная 5-я группа получала только ТОТ в дозе 3 Гр. Данные представлены в виде медианы и межквартильного размаха при сравнении групп использовали непараметрический критерий Манна-Уитни.

У всех реципиентов экспериментальных 1-4-й групп развился многолинейный стабильный смешанный химеризм и прижились кожные трансплантаты (наблюдение > 180 дней). В 1-й группе содержание донорских лейкоцитов составило 72,9 % (69,9-88,6). Во 2-й группе, которая дополнительно получала МкАт против CD4, было 88,8 % (58,6-94,5) донорских клеток. В 3-й группе, получавшей дополнительно МкАт против CD40L в день пересадки КЛ, содержание донорских лейкоцитов было 64,4 % (60,7-86,4), однако среди мышей этой группы одна мышь пала после трансплантации кожи (развились тромбоэмболические осложнения). В 4-й группе с дополнительной инфузией донорских лимфоцитов уровень донорского химеризма составил 77,3 % (74,0-95,9). В контрольной группе гемопоэтические химеры получены не были, наблюдалось отторжение КЛ на 17 (14-19) сут (р < 0,001) при сравнении со всеми экспериментальными группами.

Таким образом, в ходе исследования нами получены костномозговые химеры C57BL/6→BALB/c. Химеризм был смешанным (присутствие в крови клеток донора и реципиента), стабильным, формировался к 14-м суткам, сохранялся в клетках как миелоидной, так и лимфоидной линий (Т- и В-лимфоциты). Аллогенные кожные трансплантаты успешно прижились у всех экспериментальных мышей. Следовательно, предложенный нами режим кондиционирования (1-я группа) позволяет получать стабильный смешанный химеризм с толерантностью к аллотрансплантату кожи на модели мышей. Дополнительные воздействия, направленные на формирование периферической толерантности (2-4-я группы), не оказывают значительного влияния как на уровень химеризма, так и на успешность приживления кожных аллотрансплантатов.

Литература

1. Bigenzahn S., Pree I., Klaus C., Pilat N., Mahr B., Schwaiger E., Nierlich P., Wrba F., Wekerle T. Minor antigen disparities impede induction of long lasting chimerism and tolerance through bone marrow transplantation with costimulation blockade. J. Immunol. Res. 2016; 8635721. DOI: https://doi.org/10.22363/2313-0245-2018-22-2-226-234
2. Palchaudhuri R., Saez B., Hoggatt J., Schajnovitz A., Sykes D.B., Tate T.A., Czechowicz A., Kfoury Y., Ruchika F., Rossi D.J., Verdine G.L., Mansour M.K., Scadden D.T. Non-genotoxic conditioning for hematopoietic stem cell transplantation using a hematopoietic-cell-specific internalizing immunotoxin. Nat. Biotechnol. 2016; 34 (7): 738-45. DOI: https://doi.org/10.22363/2313-0245-2018-22-2-226-234

Grinko E.K.¹, Donetskova A.D.^2-4

Induction of tolerance to skin allograft in bone marrow chimeras C57BL/6→BALB/c

¹ NRC Institute of Immunology of the FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation

² N.F. Izmerov RIOH of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation

³ N.I. Pirogov RNRMU of the MOH of Russia (Pirogov University), Moscow, Russian Federation

⁴ RUDN University n. a. P. Lumumba, MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation

The skin is a peripheral organ of the immune system. It contains a diffusely distributed large number of lymphoid elements (intraepidermal and dermal T-lymphocytes, including CD8αα and γδT cells, innate lymphoid cells - ILC), epidermal keratinocytes, dermal mast cells, macrophages, and two main types of dendritic cells - myeloid and Langerhans cells [1]. These features make skin transplantation challenging, with a high likelihood of rejection. Rejection prevention is possible through tolerance induction, achieved via hematopoietic chimerism following bone marrow transplantation. For successful donor hematopoietic stem cell (HSC) engraftment and recipient bone marrow niche conditioning, it is desirable to minimize damage to other cells and organs of the recipient [2]. This study presents the results of tolerance induction to allogeneic skin grafts through hematopoietic chimerism in recipients using non-myeloablative conditioning and monoclonal antibodies (mAbs).

The study was conducted using mouse models of Balb/c (donors) and C57BL/6 (recipients). Mice were divided into five groups based on conditioning regimens (3 mice per group). All animals underwent allogeneic bone marrow transplantation (aBMT) one day after irradiation, followed by skin flap grafting (SF) on day 60 post-aBMT. The non-myeloablative conditioning regimen included total body irradiation (TBI) at 3 Gy, administration of anti-CD8 mAbs on day -2, and anti-CD40L mAbs 6 hours before aBMT (Group 1). Group 2 additionally received anti-CD4 mAbs along with anti-CD8. Group 3 received anti-CD40L mAbs on the day of SF transplantation. Group 4 underwent additional donor lymphocyte infusion (DLI). Control Group 5 received only TBI at 3 Gy. Data were presented as medians and interquartile ranges, and comparisons between groups were performed using the nonparametric Mann-Whitney test.

All recipients in experimental Groups 1-4 developed multilineage stable mixed chimerism and accepted skin grafts (observed for over 180 days). In Group 1, donor leukocytes accounted for 72.9 % (69.9-88.6). Group 2, which additionally received anti-CD4 mAbs, showed 88.8 % (58.6-94.5) donor cells. Group 3, with additional anti-CD40L mAbs on the day of SF transplantation, had 64.4 % (60.7-86.4) donor leukocytes, though one mouse in this group died post-transplant due to thromboembolic complications. Group 4, with additional DLI, had 77.3 % (74.0-95.9) donor chimerism levels. In the control group, hematopoietic chimeras were not established, and SF rejection occurred by day 17 (14-19), p < 0.001 compared to all experimental groups.

Thus, the study successfully produced bone marrow chimeras C57BL/6→BALB/c. The chimerism was mixed (presence of both donor and recipient cells in the blood), stable, formed by day 14, and preserved in both myeloid and lymphoid lineages (T- and B-lymphocytes). Allogeneic skin grafts were successfully engrafted in all experimental mice. Therefore, the proposed conditioning regimen (Group 1) allows for stable mixed chimerism with tolerance to skin allografts in the mouse model. Additional interventions targeting peripheral tolerance (Groups 2-4) did not significantly influence chimerism levels or the success of skin allograft engraftment.

References

1. Bigenzahn S., Pree I., Klaus C., Pilat N., Mahr B., Schwaiger E., Nierlich P., Wrba F., Wekerle T. Minor antigen disparities impede induction of long lasting chimerism and tolerance through bone marrow transplantation with costimulation blockade. J Immunol Res. 2016; 8635721. DOI: https://doi.org/10.22363/2313-0245-2018-22-2-226-234
2. Palchaudhuri R., Saez B., Hoggatt J., Schajnovitz A., Sykes D.B., Tate T.A., Czechowicz A., Kfoury Y., Ruchika F., Rossi D.J., Verdine G.L., Mansour M.K., Scadden D.T. Non-genotoxic conditioning for hematopoietic stem cell transplantation using a hematopoietic-cell-specific internalizing immunotoxin. Nat Biotechnol. 2016; 34 (7): 738-45. DOI: https://doi.org/10.22363/2313-0245-2018-22-2-226-234

Кадушкин А.Г.¹, Макаревич В.В.¹, Таганович А.Д.¹, Колесникова Т.С.¹, Дядичкина О.В.¹, Левандовская О.В.², Шиловский И.П.³, Хаитов М.Р.^{3, 4}

Угнетение цитокин-секретирующей функции мононуклеарных клеток крови пациентов с аллергическим ринитом под влиянием ингибиторов митоген-активируемых протеинкиназ

¹ УО "Белорусский государственный медицинский университет", Минск, Республика Беларусь

² ГУ "Минский научно-практический центр хирургии, трансплантологии и гематологии", Минск, Республика Беларусь

³ ФГБУ "ГНЦ Институт иммунологии" ФМБА России, Москва, Российская Федерация

⁴ ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России (Пироговский Университет), Москва, Российская Федерация

Введение. В основе патогенеза аллергического ринита (АР) лежит развитие воспалительной реакции, которая сопровождается активацией митоген-активируемых протеинкиназ (МАПК) с последующей секрецией медиаторов воспаления. Как следствие, использование ингибиторов МАПК может снизить интенсивность воспалительного процесса и улучшить эффективность лечения пациентов с АР.

Цель настоящего исследования - оценить влияние ингибиторов p38 МАПК (памапимод) и киназы ERK1/2 (SCH772984) на секрецию фактора некроза опухоли α (ФНОα), интерферона-γ (ИФН-γ), интерлейкина-9 (ИЛ- 9), ИЛ-13 и ИЛ-17А активированными мононуклеарными клетками периферической крови (МПК) пациентов с АР.

Материал и методы. МПК пациентов с АР (n = 6) выделяли из периферической крови и инкубировали с памапимодом (0,5 мкМ) и SCH772984 (1 мкМ) в течение 1 ч, после чего стимулировали в присутствии ИЛ-2 и ИЛ-12 (для индукции Th1-типа иммунного ответа), ИЛ-2, ИЛ-25, ИЛ-33 и тимического стромального лимфопоэтина (для индукции Th2-типа иммунного ответа), ИЛ-1b и ИЛ-23 (для индукции Th17-типа иммунного ответа) в течение 3 суток. В дальнейшем клеточные супернатанты собирали и в них определяли концентрацию цитокинов методом иммуноферментного анализа.

Результаты. Инкубация МПК, активированных по Th1-, Th2- и Th17-типам иммунного ответа, сопровождалась повышением секреции ФНОα, ИФН-γ, ИЛ-9, ИЛ-13 и ИЛ-17А по сравнению с клетками, культивированными в отсутствии рекомбинантных белков. Индукция Th1-, Th2- и Th17-го типов иммунного ответа с последующим внесением памапимода приводила к снижению уровней ФНОα, ИФН-γ, ИЛ-9, ИЛ-13 и ИЛ-17А в клеточных супернатантах. SCH772984 также угнетал продукцию указанных цитокинов после стимуляции клеток одной из трех комбинаций рекомбинантных белков. В целом памапимод и SCH772984 обладали сходным профилем ингибирующего воздействия на цитокин-секретирующую функцию МПК.

Заключение. Инкубация МПК-клеток пациентов с АР, активированных по Th1-, Th2- и Th17-типам иммунного ответа, с ингибиторами p38 МАПК (памапимод) и киназы ERK1/2 (SCH772984) сопровождается снижением продукции ФНОα, ИФН-γ, ИЛ-9, ИЛ-13 и ИЛ-17А. Полученные данные открывают перспективы использования ингибиторов p38 МАПК и киназы ERK1/2 при лечении АР.

Работа выполнена в рамках НИР по договору с БРФФИ № М23РНФ-021, № ГР 20230281.

Kadushkin A.G.¹, Makarevich V.V.¹, Taganovich A.D.¹, Kolesnikova T.S.¹, Dyadichkina O.V.¹, Levandovskaya O.V.², Shilovsky I.P.³, Khaitov M.R.^{3, 4}

Suppression of cytokine-secreting function of peripheral blood mononuclear cells in patients with allergic rhinitis by MAPK inhibitors

¹ BSMU, Minsk, Republic of Belarus

² Minsk SPC STH, Minsk, Republic of Belarus

³ NRC Institute of Immunology FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation

⁴ N.I. Pirogov RNRMU of the MOH of Russia (Pirogov University), Moscow, Russian Federation

Introduction. The pathogenesis of allergic rhinitis (AR) involves an inflammatory response mediated by the activation of mitogen-activated protein kinases (MAPKs), leading to the secretion of inflammatory mediators. Consequently, the use of MAPK inhibitors may reduce inflammation and improve treatment efficacy in AR patients. This study aimed to assess the effects of p38 MAPK (pamapimod) and ERK1/2 kinase (SCH772984) inhibitors on the secretion of tumor necrosis factor α (TNFα), interferon-γ (IFN-γ), interleukin-9 (IL-9), IL-13, and IL-17A by activated peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in AR patients.

Material and methods. PBMC were isolated from AR patients (n = 6), incubated with pamapimod (0.5 μM) and SCH772984 (1 μM) for 1 hour, and subsequently stimulated for 3 days with recombinant cytokines to induce Th1 (IL-2 and IL-12), Th2 (IL-2, IL-25, IL-33, and thymic stromal lymphopoietin), and Th17 (IL-1β and IL-23) immune responses. Cytokine concentrations in supernatants were measured using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).

Results. PBMC activation via Th1, Th2, and Th17 pathways resulted in increased secretion of TNFα, IFN-γ, IL-9, IL-13, and IL-17A compared to cells cultured without recombinant proteins. The addition of pamapimod to PBMC cultures significantly reduced the levels of these cytokines. SCH772984 exhibited a similar inhibitory profile, reducing cytokine secretion following stimulation with recombinant protein combinations.

Conclusion. Incubation of PBMC from AR patients with p38 MAPK (pamapimod) and ERK1/2 kinase (SCH772984) inhibitors resulted in a marked decrease in TNFα, IFN-γ, IL-9, IL-13, and IL-17A production. These findings highlight the potential application of p38 MAPK and ERK1/2 inhibitors in AR treatment.

This work was conducted under the research grant BRFFI No. M23RNF-021, registration number GR 20230281.

Казиханова М.А., Воротникова Н.А.

Особенности личности подростков с бронхиальной астмой, получающих таргетную терапию

ФГБОУ ВО СГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России, Саратов, Российская Федерация

Бронхиальная астма (БА) - это гетерогенное заболевание, развитие которого обусловлено взаимодействием ряда аллергических, инфекционных и психосоматических факторов [1-3]. Механизмы возникновения эмоциональных реакций, характер восприятия заболевания и методы психологической защиты у подростков с БА изучены недостаточно, что указывает на необходимость исследования влияния индивидуальных психологических характеристик подростков на формирование патологической психосоматической функциональной системы [4, 5].

Цель нашей работы - выявление особенностей психоэмоциональной сферы подростков с БА, получающих длительную комбинированную контролирующую терапию ингаляционными глюкокортикостероидами (ИГКС), длительно действующие β₂-агонисты (ДДБА) в сочетании с генно-инженерной биологической терапией (омализумаб). В отделении детской пульмонологии детском пульмонологии УКБ № 1 имени С.Р. Миротворцева ФГБОУ ВО СГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России проведено комплексное обследование 28 пациентов 12-17 лет с верифицированным диагнозом БА.

Диагноз БА был установлен в соответствии с критериями, указанными в согласительных документах (Национальная программа, Клинические рекомендации РФ: Бронхиальная астма у детей (2021) "Бронхиальная астма у детей" (2021) и GINA-2023 [1-3]. Группу сравнения (n = 28) составили учащиеся II-III курса медицинского колледжа ФГБОУ ВО СГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России 15-17 лет, без хронических соматических патологий. Для оценки психологического состояния подростков основной группы и группы сравнения использовали авторскую анкету (64 вопроса) и проективную рисуночную методику Дж. Бука "Дом. Человек. Дерево", разработанную в 1948 г. Все пациенты с БА во время проведения находились в межприступном периоде астмы.

Среди пациентов основной группы преобладали дети младшего подросткового возраста 12-14 лет - 18 (64 %) человек, остальные 10 человек - старшего подросткового возраста 15-17 лет (36 %). Распределение по полу: 16 (57 %) мальчиков и 12 (43 %) девочек. Течение БА по степени тяжести: среднетяжелое частично контролируемое течение - у 15 человек (54 %), тяжелое частично контролируемое течение - у 13 человек (46 %).

При оценке рисуночного теста учитывали 4 критерия: прорисовку предметов (слабый или сильный нажим), наличие в доме окон и трубы, тип дерева и образ человека. Слабая прорисовка всех предметов выявлена у 21 человека (75 %) - это 13 (72 %) пациентов со среднетяжелым течением БА и 8 (38 %) пациентов с тяжелой астмой.

Слабая прорисовка элементов рисунка свидетельствует о том, что пациенты находятся в состоянии тревоги и угнетения вследствие своего хронического заболевания. В группе сравнения этот критерий был выявлен лишь у 4 (14 %) студентов.

Практически все пациенты основной группы - 27 (96 %) человек изобразили дом с окнами, что можно расценить как признак открытости и доступности к общению. У студентов группы сравнения все нарисованные дома были с окнами. Недостаток тепла в семейных отношениях был выявлен у 17 (61 %) пациентов основной группы: 11 (65 %) пациентов со среднетяжелым течением и 6 (35 %) пациентов с тяжелым течением БА - по данным рисуночного теста на доме отсутствовала труба.

В группе сравнения студенты не изобразили трубу лишь на 2 (7 %) рисунках. 19 (68 %) пациентов основной группы: 12 (63 %) пациентов со среднетяжелым течением БА и 7 (37 %) пациентов с тяжелым течением БА продемонстрировали интуитивный тип личности (высокая истощаемость центральной нервной системы, повышенная чувствительность), изобразив пикнический тип дерева на своих рисунках. В группе сравнения высокую истощаемость нервной системы продемонстрировали только 7 (20 %) человек. Образ человека исключительно в виде куклы (анфас) нарисовали 96 % детей основной группы, это говорит о тревожности и признаке доминирования окружения над пациентом. Студенты группы сравнения оказались менее подвержены тревожности, образ человека в виде куклы изобразили 9 (32 %). Один 12-летний пациент с тяжелой БА категорически отказался от изображения дома и человека в своем рисунке, что может свидетельствовать о проявлении крайней агрессии к семье.

Таким образом, проведя настоящее исследование, можно заключить:

1. У 2/3 пациентов (75 %), получающих контролирующую терапию в сочетании с ГИБП, нами диагностировано состояние тревоги и угнетения. У здоровых студентов группе сравнения данный признак выявлен лишь у 4 (19 %) человек.
2. У 19 (68 %) подростков с БА, независимо от степени тяжести бронхиальной астмы, была выявлена высокая истощаемость нервной системы в сочетании с повышенной чувствительностью, независимо от степени тяжести бронхиальной астмы. Данная особенность диагностирована у каждого 5-го студента колледжа ФГБОУ ВО СГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России (20 %).
3. Здоровые студенты медицинского колледжа ФГБОУ ВО СГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России, несмотря на большую насыщенность учебной программы, продемонстрировали высокую выносливость нервной системы, оптимистическое мышление, аналитический склад ума, склонность к лидерству.

Литература

1. Федеральные клинические рекомендации по ведению больных бронхиальной астмой [электронный ресурс]. Москва : Российская ассоциация аллергологов и клинических иммунологов, Союз педиатров России, Ассоциация врачей и специалистов медицины труда, Российское респираторное общество, 2024. URL: https://cr.minzdrav.gov.ru/view-cr/359_3
2. Национальная программа "Бронхиальная астма у детей. Стратегия лечения и профилактика", IV издание. Москва, 2012. 182 с.
3. Global initiative for asthma. Global strategy for asthma management and prevention, 2020. URL: www.ginasthma.org
4. Колосов Г.А. Бронхиальная астма: психосоматический концепт в пользу персонализированного подхода. Психология: традиции и инновации: материалы III Международной научной конференции, Самара, март 2018 года. Самара : ООО "Издательство АСГАРД". 2018; 39-41.
5. Лусс Л.А. Роль психосоматических расстройств в клинике бронхиальной астмы. Возможности коррекции. Доктор.Ру. 2008; 39 (2): 33-7.

Kazikhanova M.A., Vorotnikova N.A.

Personality traits of adolescents with bronchial asthma receiving targeted therapy

SSMU n. a. V.I. Razumovsky of the MOH of Russia, Saratov, Russian Federation

Bronchial asthma (BA) is a heterogeneous disease caused by interactions among allergic, infectious, and psychosomatic factors [1-3]. The mechanisms of emotional reactions, perception of the disease, and psychological defense methods in adolescents with BA remain insufficiently studied, highlighting the need to investigate the influence of individual psychological characteristics on the formation of a pathological psychosomatic functional system [4, 5]. The aim of this study was to identify psycho-emotional features of adolescents with BA receiving long-term combination therapy with inhaled corticosteroids (ICS), long-acting β₂-agonists (LABA), and genetically engineering biological therapy (omalizumab).

A comprehensive examination of 28 patients aged 12 to 17 years with a verified diagnosis of bronchial asthma was conducted at the Department of Pediatric Pulmonology, S.R. Mirotvortsev University Clinical Hospital No. 1, SSMU of the MOH of Russia. The diagnosis of BA was established based on criteria specified in consensus documents (National Program, Russian Clinical Guidelines: Bronchial Asthma in Children (2021), and GINA-2023) [1-3]. The comparison group (n = 28) consisted of 2^nd-3^rd-year students of the medical college at Saratov State Medical University aged 15-17 years without chronic somatic pathologies.

To assess the psychological state of adolescents in the study and control groups, a 64-question proprietary questionnaire and the projective drawing technique "House-Tree-Person" by J. Buck (1948) were used. All patients with BA were assessed during the inter-attack period.

Among the main group, younger adolescents aged 12-14 years prevailed - 18 (64 %) individuals, while 10 (36 %) individuals were older adolescents aged 15-17 years. Gender distribution: 16 (57 %) boys and 12 (43 %) girls. The severity of BA: moderate partially controlled - 15 (54 %) patients and severe partially controlled - 13 (46 %) patients. The drawing test assessed four criteria: object detailing (light or heavy strokes), presence of windows and chimneys in the house, tree type, and human figure portrayal.

Weak detailing was observed in 21 (75 %) patients, including 13 (72 %) with moderate BA and 8 (38 %) with severe BA, indicating anxiety and depression due to their chronic condition. In the comparison group this criterion was noted in only 4 (14 %) students. Most participants in the main group - 27 (96 %) patients - drew houses with windows, suggesting openness and social accessibility. In the control group, all participants included windows.

A lack of warmth in family relationships was identified in 17 (61 %) patients of the main group: 11 (65 %) with moderate BA and 6 (35 %) with severe BA, as indicated by the absence of chimneys in their drawings. In the comparison group, chimneys were omitted in only 2 (7 %) drawings.

19 (68 %) patients from the main group, including 12 (63 %) with moderate BA and 7 (37 %) with severe BA, exhibited an intuitive personality type (high nervous system exhaustion and sensitivity) by drawing "pyknic"-type trees. In the comparison group, only 7 students (20 %) demonstrated high nervous exhaustion.

The human figure was portrayed as a doll (frontal view) by 96 % of participants in the main group, reflecting anxiety and dominance of the environment over the patient. In the comparison group, this was observed in 9 (32 %) students. One 12-year-old patient with severe BA refused to draw a house or a person, suggesting extreme aggression toward the family.

Conclusion

1. Two-thirds of patients (75 %) receiving combination therapy with ICS, LABA, and biologics exhibited anxiety and depression. Among healthy students in the comparison group, this trait was observed in only 4 individuals (19 %).
2. High nervous exhaustion combined with sensitivity was diagnosed in 19 (68 %) adolescents with BA, irrespective of severity, compared to 20 % of healthy students.
3. Healthy students at SSMU of the MOH of Russia demonstrated resilience, optimistic thinking, and analytical skills inclined toward leadership, despite a demanding academic program.

References

1. Federal clinical guidelines for the management of patients with asthma. Russian Association of Allergology and Clinical Immunology, Union of Pediatricians of Russia, Association of Doctors and Occupational Medicine Specialists, Russian Respiratory Society, 2024. URL: https://cr.minzdrav.gov.ru/view-cr/359_3 (in Russian)
2. National Program "Bronchial asthma in children. Treatment and prevention strategies". Moscow. 2021, 182 p. (in Russian)
3. Global initiative for asthma. Global strategy for asthma management and prevention, 2020. URL: www.ginasthma.org
4. Kolosov G.A. Bronchial asthma: psychosomatic concept for personalized approaches. Psychology: traditions and innovations: proceedings of the III International Scientific Conference, Samara, March 2018. Samara: ASGARD Publishing. 2018; 39-41. (in Russian)
5. Luss L.A. Role of psychosomatic disorders in the clinic of bronchial asthma. Correction Possibilities. Doctor.Ru. 2008; 39 (22): 33-7. (in Russian)

Коваленко Д.В., Шуматова Т.А.

Генетическая регуляция уровня витамина D среди пациентов с аллергической энтеропатией

ФГБОУ ВО ТГМУ Минздрава России, Владивосток, Российская Федерация

Актуальность. Не вызывает сомнений тот факт, что ведущую роль в патогенезе аллергического воспаления кишечника играет состояние кишечного барьера, строение и функции которого были давно описаны. Однако в последние годы в научном сообществе появляются данные о влиянии витамина D на поддержание целостности кишечного барьера [1, 2]. Проходя ряд метаболических превращений в организме, активная форма витамина D осуществляет свое действие путем связывания с рецептором витамина D (VDR) [3]. Продукция белка рецептора витамина D регулируется геном VDR, для которого описан ряд полиморфизмов, одним из наиболее изученных является полиморфизм BsmI [4]. Однако в литературе нет данных о влиянии полиморфизма BsmI гена VDR на целостность стенки кишечника.

Цель работы - изучение содержания 25-OH витамина D и распределение аллелей и генотипов полиморфизм BsmI у пациентов с аллергической энтеропатией.

Материал и методы. Проведено обследование двух групп детей: основная группа - 23 ребенка раннего возраста с аллергической энтеропатией, группа сравнения - 15 здоровых детей, сопоставимых по полу и возрасту, без отягощенного аллергологического анамнеза. Метод иммуноферментного анализа применялся для оценки уровня 25-OH витамина D в сыворотке крови, а распределение аллелей и генотипов полиморфизма BsmI гена VDR проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Методы непараметрической статистики использовались для статистичес­кой обработки.

Результаты. У пациентов основной группы зарегистрировано снижение уровня 25-OH витамина D в 1,5 раза по отношению к группе сравнения. Частота встречаемости аллеля G у детей группы сравнения составила почти 63 %, а аллеля А - в 1,7 раза меньше. Распределение аллелей у детей основной группы статистически не отличалось от распределения аллелей в группе сравнения: частота встречаемости аллеля G была на 2 % больше, а мутантного аллеля А - на 2 % меньше. Генотипы полиморфизма BsmI гена VDR у детей группы сравнения встречались со следующей частотой: G/G - 44 %, G/A - 42 %, A/A - 14 % и соответствовали равновесию Харди-Вайнберга. Среди детей основной группы гомозиготные генотипы G/G, A/A полиморфизма BsmI встречались с частотой в 0,7 и 0,9 раза меньше по сравнению со здоровыми детьми, а частота встречаемости гетерозиготного генотипа G/A была в 1,3 раза чаще среди пациентов основной группы, что подтверждено статистически (p < 0,05).

Заключение. Полиморфизм BsmI расположен рядом с 3'-нетранслируемой областью (UTR) гена VDR в интроне между экзонами 8 и 9. Область 3'-UTR гена VDR участвует в регуляции экспрессии генов, отвечая за стабильность и уровень экспрессии мРНК. Таким образом, высокая представленность гетерозиготного генотипа G/A полиморфизма BsmI может обеспечивать повышенную проницаемость кишечного барьера и развитие заболевания. Низкий уровень витамина D среди пациентов основной группы требует его коррекции для улучшения состояния пациентов и нормализации состояния кишечного барьера.

Литература

1. Fleet J.C. Vitamin D and gut health. Adv. Exp. Med. Biol. 2022. 1390: 155-67. DOI: https://doi.org/10.1007/978-3-031-11836-4_9
2. Fakhoury H.M.A., Kvietys P.R., AlKattan W., Anouti F.A., Elahi M.A., Karras S.N., Grant W.B. Vitamin D and intestinal homeostasis: Barrier, microbiota, and immune modulation. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2020; 200: 105663. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jsbmb.2020.105663
3. Saponaro F., Saba A., Zucchi R. An update on vitamin D metabolism. International Journal of Molecular Sciences. 2020; 21 (18): 6573. DOI: https://doi.org/10.3390/ijms21186573
4. Imani D., Razi B., Motallebnezhad M., Rezaei R. Association between vitamin D receptor (VDR) polymorphisms and the risk of multiple sclerosis (MS): an updated meta-analysis. BMC Neurol. 2019; 19 (1): 339. DOI: https://doi.org/10.1186/s12883-019-1577-y

Kovalenko D.V., Shumatova T.A.

Genetic regulation of vitamin D level in patients with allergic enteropathy

PSMU of the MOH of Russia, Vladivostok, Russian Federation

Introduction. It is well-established that the integrity of the intestinal barrier plays a key role in the pathogenesis of allergic intestinal inflammation, with its structure and function long described. However, recent studies have highlighted the impact of vitamin D on maintaining intestinal barrier integrity [1, 2]. After undergoing several metabolic transformations in the body, the active form of vitamin D exerts its effects by binding to the vitamin D receptor (VDR) [3]. The production of the VDR protein is regulated by the VDR gene, which has several polymorphisms, one of the most studied being the BsmI polymorphism [4]. Nevertheless, there is a lack of data in the literature regarding the influence of the BsmI polymorphism of the VDR gene on intestinal wall integrity.

Aim. This study aimed to investigate 25-OH vitamin D levels and the distribution of alleles and genotypes of the BsmI polymorphism in patients with allergic enteropathy.

Material and methods. Two groups of children were examined: the main group consisted of 23 young children with allergic enteropathy, and the control group included 15 healthy children matched by age and gender, without a history of allergic diseases. The level of 25-OH vitamin D in serum was measured using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and allele and genotype distributions of the BsmI polymorphism of the VDR gene were analyzed by PCR. Non-parametric statistical methods were used for data processing.

Results. Patients in the main group showed 1.5 times lower levels of 25-OH vitamin D compared to the comparison group. In the comparison group, the G allele frequency was nearly 63 %, while the A allele frequency was 1.7 times lower. The allele distribution in the main group did not statistically differ from the comparison group: G allele frequency was 2 % higher, and the mutant A allele frequency was 2 % lower. The genotypes of the BsmI polymorphism in the comparison group were distributed as follows: G/G - 44 %, G/A - 42 %, A/A - 14 %, consistent with Hardy-Weinberg equilibrium. Among patients in the main group, homozygous genotypes G/G and A/A occurred 0.7 and 0.9 times less frequently than in the comparison group, while the heterozygous G/A genotype was 1.3 times more frequent, a statistically significant result (p < 0.05).

Conclusion. The BsmI polymorphism is located near the 3'-untranslated region (UTR) of the VDR gene, between exons 8 and 9. The 3'-UTR region regulates gene expression by controlling mRNA stability and expression levels. Thus, the high prevalence of the heterozygous G/A genotype of the BsmI polymorphism may contribute to increased intestinal permeability and disease development. The low vitamin D levels observed in the main group require correction to improve patient outcomes and normalize intestinal barrier function.

References

1. Fleet J.C. Vitamin D and gut health. Adv Exp Med Biol. 2022. 1390: 155-67. DOI: https://doi.org/10.1007/978-3-031-11836-4_9
2. Fakhoury H.M.A., Kvietys P.R., AlKattan W., Anouti F.A., Elahi M.A., Karras S.N., Grant W.B. Vitamin D and intestinal homeostasis: Barrier, microbiota, and immune modulation. J Steroid Biochem Mol Biol. 2020; 200: 105663. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jsbmb.2020.105663
3. Saponaro F., Saba A., Zucchi R. An update on vitamin D metabolism. International Journal of Molecular Sciences. 2020; 21 (18): 6573. DOI: https://doi.org/10.3390/ijms21186573
4. Imani D., Razi B., Motallebnezhad M., Rezaei R. Association between vitamin D receptor (VDR) polymorphisms and the risk of multiple sclerosis (MS): an updated meta-analysis. BMC Neurol. 2019; 19 (1): 339. DOI: https://doi.org/10.1186/s12883-019-1577-y

Коробова З.Р.¹, Максименко М.В.², Завитаева А.П.², Кокоева А.Э.³, Кучеренко Н.Г.³

Аутоантитела к ИФН-α в ассоциации с постковидным синдромом

¹ ФБУН НИИЭМ им. Пастера Роспотребнадзора, Санкт-Петербург, Российская Федерация

² ФГБОУ ВО СПбГПМУ Минздрава России, Санкт-Петербург, Российская Федерация

³ ФГБУ СЗОНКЦ им. Л.Г. Соколова ФМБА России, Санкт-Петербург, Российская Федерация

Введение. По данным Всемирной организации здравоохранения, постковидный синдром - это неспецифическая патология, в рамках которой выделяют более 200 симптомов [1]. Часто данный синдром сопровождается изменениями со стороны иммунной системы, манифестацией аутоиммунных заболеваний [2]. Именно поэтому маркеры аутоиммунных изменений могут стать актуальными в диагностике постковидных осложнений. Одним из таких маркеров является наличие аутоантител к ИФН-α - важному компоненту противовирусного иммунитета в острой фазе COVID-19 [3].

Цель работы - оценить информативность аутоантител к ИФН-α как пролонгированного маркера изменений со стороны иммунной системы в острой фазе COVID-19 и в постковидном синдроме с разными фенотипическими проявлениями.

Материал и методы. В исследование вошли взрослые пациенты в острой фазе COVID-19 (n = 11) и пациенты с сохранившимися после инфекции нарушениями со стороны дыхательной системы (n = 17), проходившие лечение в СЗОНКЦ им. Л.Г. Соколова ФМБА России, пациенты с впервые возникшей на фоне перенесенного COVID-19 неврологической патологией (n = 12), обратившиеся в Медицинский центр ФБУН НИИЭМ им. Пастера Роспотребнадзора, и условно здоровые доноры (ЗД, n = 13), не предъявлявшие жалоб после перенесенной коронавирусной инфекции. Известно, что данные пациенты не получали терапии препаратами ИФН-α ни в период COVID-19, ни после него. Установка диагноза "постковидный синдром" осуществлялась при наличии впервые возникших жалоб, сохраняющихся более 12 нед с момента перенесенного заболевания. Оценка уровня аутоантител в плазме крови осуществлялась методом иммуноферментного анализа, с использованием набора реагентов "Интерферон-аутоиммунные антитела-ИФА-БЕСТ" ("Вектор Бест", Новосибирск).

Результаты. В плазме крови пациентов с постковидными осложнениями определялись повышенные концентрации аутоантител к ИФН-α, как при сравнении с пациентами в острой фазе, так и с группой сравнения. При этом наибольший уровень антител отмечался у пациентов с жалобами на нарушения со стороны дыхательной системы (p < 0,0001 при сравнении со ЗД), медиана составила 10 нг/мл [0; 60]. У пациентов с неврологической патологией медиана концентрации составила 5 нг/мл (0; 25, p = 0,0026 при сравнении с ЗД). У пациентов в острой фазе медиана 2 нг/ мл (0; 5, p > 0,05), а у здоровых доноров антитела к ИФН-α отсутствовали.

Заключение. Известно, что в острой фазе COVID-19 наличие у пациентов в системном кровотоке циркулирующих аутоантител к ИФН-α является важным маркером более тяжелого инфекционного процесса [4]. При этом определение показателей аутоантител к ИФН-α в постковидном синдроме значительно меньше представлено в литературе, однако полученные нами данные согласуются с исследованием K.S. Hansen и соавт. [5]. Выявленное нами повышение уровня антител к ИФН-α требует дальнейшего изучения в контексте постковидного синдрома, особенно взаимосвязи между симптомами заболевания и показателями аутоиммунных процессов.

Литература

1. Post COVID-19 condition (Long COVID). URL: https://www.who.int/europe/news-room/fact-sheets/item/post-covid-19-condition
2. Sharma C., Bayry J. High risk of autoimmune diseases after COVID-19. Nat. Rev. Rheumatol. 2023; 19: 399-400. DOI: https://doi.org/10.1038/s41584-023-00964-y
3. Wang E.Y., Mao T., Klein J., Dai Y., Huck J.D., Liu F., Zheng N.S., Zhou T., Israelow B., Wong P., Lucas C., Silva J., Oh J.E., Song E., Perotti E.S., Fischer S., Campbell M., Fournier J.B., Wyllie A.L., Vogels C.B.F., Ott I.M., Kalinich C.C., Petrone M.E., Watkins A.E.; Yale IMPACT Team; Cruz C.D., Farhadian S.F., Schulz W.L., Grubaugh N.D., Ko A.I., Iwasaki A., Ring A.M. Diverse functional autoantibodies in patients with COVID-19. Nature. 2021; 595 (7866): 283-8. DOI: https://doi.org/10.1038/s41586-021-03631-y
4. Петриков С.С., Боровкова Н.В., Попугаев К.А., Сторожева М.В., Квасников А.М., Годков М.А. Аутоантитела к интерферону альфа и их значение при COVID-19. Инфекция и иммунитет. 2022; 12 (2): 279-87. DOI: https://doi.org/10.15789/2220-7619-AAA-1789
5. Hansen K.S., Jørgensen S.E., Skouboe M.K., Agergaard J., Schiøttz-Christensen B., Vibholm L.K., Tolstrup M., Østergaard L., Leth S., Mogensen T.H. Examination of autoantibodies to type I interferon in patients suffering from long COVID. J. Med. Virol. 2023; 95 (9): e29089. DOI: https://doi.org/10.1002/jmv.29089

Korobova Z.R.¹, Maksimenko M.V.², Zavitaeva A.P.², Kokoeva A.E.³, Kucherenko N.G.³

Autoantibodies to IFN-α associated with post-COVID syndrome

¹ Pasteur RIEM of Rospotrebnadzor, St. Petersburg, Russian Federation

² SPbSPMU of the MOH of Russia, St. Petersburg, Russian Federation

³ Sokolov NWMRC of the FMBA of Russia, St. Petersburg, Russian Federation

Introduction. According to the World Health Organization, post-COVID syndrome is a nonspecific condition characterized by over 200 symptoms [1]. This syndrome often involves immune system alterations and autoimmune disease manifestations [2]. Therefore, autoimmune markers may become relevant in diagnosing post-COVID complications. One such marker is the presence of autoantibodies against IFN-α, a critical component of antiviral immunity during the acute phase of COVID-19 [3]. This study aimed to assess the relevance of anti-IFN-α autoantibodies as prolonged markers of immune system changes during acute COVID-19 and post-COVID syndrome with different phenotypic manifestations.

Material and methods. The study included adult patients in the acute phase of COVID-19 (n = 11), patients with persistent respiratory issues post-infection (n = 17) treated at the Sokolov NWMRC of the FMBA of Russia, patients with newly diagnosed neurological pathologies post-COVID-19 (n = 12) evaluated at the Medical Center of Pasteur RIEM of Rospotrebnadzor, and conditionally healthy donors (HD, n = 13) without complaints after recovering from COVID-19. None of the participants received IFN-α therapy during or after COVID-19. The diagnosis of post-COVID syndrome was established based on the presence of newly emerged symptoms persisting for more than 12 weeks post-infection. Anti-IFN-α autoantibody levels in plasma were measured using ELISA kits (Interferon Autoimmune Antibodies ELISA-BEST, Vector Best, Novosibirsk).

Results. Patients with post-COVID complications demonstrated elevated concentrations of anti-IFN-α autoantibodies compared to both those in the acute phase and the comparison group. The highest antibody levels were found in patients with respiratory complaints (p < 0.0001 compared to HD), with a median of 10 ng/ml [0; 60]. Patients with neurological symptoms showed a median concentration of 5 ng/ml (0; 25, p = 0.0026 vs HD). Patients in the acute phase exhibited a median of 2 ng/ml (0; 5, p > 0.05), while healthy donors had no detectable anti-IFN-α antibodies.

Conclusion. The presence of circulating anti-IFNα autoantibodies during the acute phase of COVID-19 is a known marker of more severe infection [4]. However, their role in post-COVID syndrome has been less studied. Our findings align with K.S. Hansen et al. [5], demonstrating elevated anti-IFN-α levels in post-COVID cases. Further investigation is required to understand the link between disease symptoms and autoimmune markers.

References

1. Post COVID-19 condition (Long COVID). URL: https://www.who.int/europe/news-room/fact-sheets/item/post-covid-19-condition
2. Sharma C., Bayry J. High risk of autoimmune diseases after COVID-19. Nat Rev Rheumatol. 2023; 19: 399-400. DOI: https://doi.org/10.1038/s41584-023-00964-y
3. Wang E.Y., Mao T., Klein J., Dai Y., Huck J.D., Liu F., Zheng N.S., Zhou T., Israelow B., Wong P., Lucas C., Silva J., Oh J.E., Song E., Perotti E.S., Fischer S., Campbell M., Fournier J.B., Wyllie A.L., Vogels C.B.F., Ott I.M., Kalinich C.C., Petrone M.E., Watkins A.E.; Yale IMPACT Team; Cruz C.D., Farhadian S.F., Schulz W.L., Grubaugh N.D., Ko A.I., Iwasaki A., Ring A.M. Diverse functional autoantibodies in patients with COVID-19. Nature. 2021; 595 (7866): 283-8. DOI: https://doi.org/10.1038/s41586-021-03631-y
4. Petrikov S.S., Borovkova N.V., Popugaev K.A., Storozheva M.V., Kvasnikov A.M., Godkov M.A. Autoantibodies to interferon alpha and their role in COVID-19. Infection and Immunity. 2022; 12 (2): 279-87. DOI: https://doi.org/10.15789/2220-7619-AAA-1789 (in Russian)
5. Hansen K.S., Jørgensen S.E., Skouboe M.K., Agergaard J., Schiøttz-Christensen B., Vibholm L.K., Tolstrup M., Østergaard L., Leth S., Mogensen T.H. Examination of autoantibodies to type I interferon in patients suffering from long COVID. J Med Virol. 2023; 95 (9): e29089. DOI: https://doi.org/10.1002/jmv.29089

Кривская С.А.¹, Камаев А.В.², Яцемирский Г.С.¹

Динамика результатов теста активации базофилов у пациентов с аллергическим ринитом и астмой, вызванными пыльцой березы, в ходе сублингвальной иммунотерапии

¹ ЦКТ "Покровский", Санкт-Петербург, Российская Федерация

² ФГБОУ ВО ПСПБГМУ им. И.П. Павлова Минздрава России, Санкт-Петербург, Российская Федерация

Введение. В настоящее время в мировом научном сообществе не достигнут консенсус о способах оценки эффективности аллерген-специфической иммунотерапии (АСИТ). Количественные методы исследования результатов АСИТ у конкретного пациента нуждаются в дополнительных доказательствах, в том числе в реальной клинической практике. Оценка активации базофилов с помощью проточной цитометрии в динамике рассматривается актуальными согласительными документами и руководствами как перспективный метод изучения эффективности АСИТ [1-3].

Материал и методы. В исследование были включены 37 пациентов от 5 до 37 лет (Me = 11,5 [7; 29]) с клиническими проявлениями поллиноза не менее двух сезонов и подтвержденной причинно-значимой сенсибилизацией к пыльце березы, ранее не получавшие болезнь-модифицирующей терапии. Сформированы две группы: стандартные фармакологические препараты по показаниям и первый курс сублигвальной АСИТ (Сталораль береза) (СЛИТ+, n = 22) и та же фармакотерапия, за исключением иммунотерапии (СЛИТ-, n = 15). Группы значимо не различались по демографическим характеристикам и доле пациентов с коморбидной бронхиальной астмой. Всем пациентам дважды проведен тест активации базофилов методом проточной цитометрии; оценивали долю активированных базофилов (%), экспрессирующих поверхностный маркер CD203, с аллергеном березы: до начала цветения (январь) и на пике выброса пыльцы (май).

Результаты. Предложена новая методика расчета результатов активации базофилов в виде разницы доли CD203c⁺⁺-клеток в тесте с аллергеном и спонтанно (BAT allergen - BAT neg). Результаты базофильного теста перед сезоном цветения деревьев в группе СЛИТ+ Ме = 73,0 [54,5; 76,8] % и в группе сравнения (СЛИТ-) Ме = 78,3 [45,2; 86,4] %, статистически значимо не отличались (р = 0,12). В период пика цветения березы в группе СЛИТ+ (3 мес лечения), отмечали снижение активации базофилов до Ме = 63,9 [53,6; 71,5] %, в то время как в группе СЛИТ- этот показатель увеличился до Ме = 84,4 [61,0; 88,8] %. В относительном выражении снижение активации базофилов в группе СЛИТ+ произошло на Me = -4,25 [-14; -0,4] %, в то время как в группе СЛИТ-, наоборот, произошло увеличение активации базофилов на Me = 0,25 [-0,75;2] % (р = 0,021). Наблюдается отчетливый тренд на расхождение результатов групп при присоединении АСИТ к стандартной фармакотерапии. Значимой корреляции результатов теста активации базофилов и выраженности клиники поллиноза и/или потребности в препаратах в исследуемых группах не получено. Пациенты (n = 5), у которых угнетение активации базофилов в ходе лечения составило -14 % и менее, демонстрировали снижение результатов вопросника на 6,75-28 баллов, в среднем 14,7 ± 3,77 балла.

Заключение. АСИТ оказывает влияние на реактивность базофилов периферической крови у пациентов, сенсибилизированных к пыльце березы. В нашем исследовании продемонстрировано, что эффекторные клетки периферической крови не рефрактерны в сезон цветения и 3 мес СЛИТ - это достаточный срок для отслеживания начальных изменений иммунного ответа. Тест аллерген-индуцированной активации базофилов может быть использован при комплексной оценке эффективности АСИТ. У сложных пациентов, планирующих или получающих АСИТ (полисенсибилизация, поздний или недостаточный эффект лечения, нежелательные явления) демонстрация снижения активации базофилов может быть важным дополнительным аргументом в принятии клинических решений. Требуются более масштабные исследования по использованию этой инновационной методики в мониторинге и комплексной оценке эффективности АСИТ.

Литература

1. Shamji M.H., Kappen J.H., Akdis M., Jensen-Jarolim E., Knol E.F., Kleine-Tebbe J., Bohle B., Chaker A.M., Till S.J., Valenta R., Poulsen L.K., Calderon M.A., Demoly P., Pfaar O., Jacobsen L., Durham S.R., Schmidt-Weber C.B. Biomarkers for monitoring clinical efficacy of allergen immunotherapy for allergic rhinoconjunctivitis and allergic asthma: an EAACI Position Paper. Allergy. 2017; 72 (8): 1156-73. DOI: https://doi.org/10.1111/all.13138
2. Alvaro-Lozano M., Akdis C.A., Akdis M., Alviani C., Angier E., Arasi S., Arzt-Gradwohl L., Barber D., Bazire R., Cavkaytar O., Comberiati P., Dramburg S., Durham S.R., Eifan A.O., Forchert L., Halken S., Kirtland M., Kucuksezer U.C., Layhadi J.A., Matricardi P.M., Muraro A., Ozdemir C., Pajno G.B., Pfaar O., Potapova E., Riggioni C., Roberts G., Rodríguez Del Río P., Shamji M.H., Sturm G.J., Vazquez-Ortiz M. EAACI Allergen Immunotherapy User’s Guide. Pediatr. Allergy Immunol. 2020; 31 (25): 1-101. DOI: https://doi.org/10.1111/pai.13189
3. Тимошенко Д.О., Павлова К.С., Курбачева О.М. Поиск предиктивных биомаркеров эффективности аллергенспецифической иммунотерапии на основе современных представлений о механизмах ее действия. Российский аллергологический журнал. 2023; 20 (2): 187-200. DOI: https://doi.org/10.36691/RJA7526

Krivskaya S.A.¹, Kamaev A.V.², Yatsimirsky G.S.¹

Dynamics of basophil activation test results in patients with birch pollen-induced allergic rhinitis and asthma during sublingual immunotherapy

¹ Pokrovsky CCT, St. Petersburg, Russian Federation

² Pavlov First SPbSMU of the MOH of Russia, St. Petersburg, Russian Federation

Introduction. Currently, there is no consensus in the scientific community regarding methods for evaluating the efficacy of allergen-specific immunotherapy (AIT). Quantitative methods for assessing AIT outcomes in individual patients require further evidence, particularly in real clinical practice. Basophil activation testing using flow cytometry is considered a pro­mising approach for evaluating AIT effectiveness according to recent consensus documents and guidelines [1-3].

Material and methods. The study included 37 patients aged 5 to 37 years (Me = 11.5 [7; 29]) with clinical symptoms of pollen allergy for at least two seasons and confirmed sensitization to birch pollen. None had previously received disease-modifying therapy. Two groups were formed: one group received standard pharmacological treatment and their first course of sublingual AIT (Staloral Birch) (SLIT+, n = 22), and the other received pharmacotherapy without immunotherapy (SLIT-, n = 15). The groups did not differ significantly in demographic characteristics or the proportion of patients with comorbid bronchial asthma. Basophil activation tests were performed twice using flow cytometry to assess the proportion of activated basophils (%) expressing the CD203 marker. Tests were conducted with birch allergen both before the pollen season (January) and at its peak (May).

Results. A new method was proposed for calculating basophil activation results as the difference between CD203c⁺⁺ cells in allergen-stimulated and unstimulated samples (BAT allergen - BAT neg). Before the pollen season, basophil activation levels in the SLIT+ group were Me = 73.0 [54.5; 76.8] % and Me = 78.3 [45.2; 86.4] % in the SLIT- group, with no significant difference (p = 0.12). At the peak of the pollen season (after 3 months of SLIT), basophil activation decreased to Me = 63.9 [53.6; 71.5] % in the SLIT+ group, whereas it increased to Me = 84.4 [61.0; 88.8] % in the SLIT- group. Relative basophil activation decreased by Me = -4.25 [-14; -0.4] % in the SLIT+ group, while it increased by Me = 0.25 [-0.75; 2] % in the SLIT- group (p = 0.021). These results highlight the emerging trend of divergent outcomes between groups when SLIT is added to standard pharmacotherapy. No significant correlation was found between basophil activation results and clinical severity of symptoms or medication use. However, five patients (n = 5) who showed basophil activation suppression of -14 % or more also demonstrated a questionnaire score reduction of 6.75-28 points, with an average decrease of 14.7 ± 3.77 points.

Conclusion. AIT influences peripheral blood basophil reactivity in patients sensitized to birch pollen. This study demonstrated that effector cells in peripheral blood remain responsive during the pollen season, and 3 months of SLIT is sufficient to track initial changes in immune response. Allergen-induced basophil activation testing may be used as part of a comprehensive evaluation of AIT effectiveness. For complex cases undergoing or planning AIT (e. g., polysensitization, delayed or insufficient treatment effects, adverse events), basophil activation reduction may serve as an additional argument for clinical decision-ma­king. Further large-scale studies are needed to explore this innovative method for monitoring and evaluating AIT efficacy.

References

1. Shamji M.H., Kappen J.H., Akdis M., Jensen-Jarolim E., Knol E.F., Kleine-Tebbe J., Bohle B., Chaker A.M., Till S.J., Valenta R., Poulsen L.K., Calderon M.A., Demoly P., Pfaar O., Jacobsen L., Durham S.R., Schmidt-Weber C.B. Biomarkers for monitoring clinical efficacy of allergen immunotherapy for allergic rhinoconjunctivitis and allergic asthma: an EAACI Position Paper. Allergy. 2017; 72 (8): 1156-73. DOI: https://doi.org/10.1111/all.13138
2. Alvaro-Lozano M., Akdis C.A., Akdis M., Alviani C., Angier E., Arasi S., Arzt-Gradwohl L., Barber D., Bazire R., Cavkaytar O., Comberiati P., Dramburg S., Durham S.R., Eifan A.O., Forchert L., Halken S., Kirtland M., Kucuksezer U.C., Layhadi J.A., Matricardi P.M., Muraro A., Ozdemir C., Pajno G.B., Pfaar O., Potapova E., Riggioni C., Roberts G., Rodríguez Del Río P., Shamji M.H., Sturm G.J., Vazquez-Ortiz M. EAACI Allergen Immunotherapy User’s Guide. Pediatr Allergy Immunol. 2020; 31 (25): 1-101. DOI: https://doi.org/10.1111/pai.13189
3. Timoshenko D.O., Pavlova K.S., Kurbacheva O.M. Search for predictive biomarkers of allergen-specific immunotherapy effectiveness based on modern concepts of its mechanisms. Russian Allergology Journal. 2023; 20 (2): 187-200. DOI: https://doi.org/10.36691/RJA7526 (in Russian)

Масютина А.М., Пащенков М.В.

Молекулярные особенности синергически индуцируемых генов провоспалительных цитокинов в макрофагах человека

ФГБУ "ГНЦ Институт иммунологии" ФМБА России, Москва, Российская Федерация

Введение. Активация паттерн-распознающих рецепторов приводит к запуску защитного воспалительного ответа. Однако при одновременной активации нескольких рецепторов, что характерно для инфекционного заболевания, может происходить синергическое усиление экспрессии генов провоспалительных цитокинов [1]. Последствием этого может стать развитие "цитокинового шторма". Понимание молекулярных особенностей экспрессии генов провоспалительных цитокинов позволит управлять активностью врожденного звена иммунной системы при инфекционных заболеваниях.

Цель исследования - изучить молекулярные механизмы, регулирующие экспрессию провоспалительных генов в макрофагах человека при сочетанной стимуляции паттерн-распознающих рецепторов NOD1 и TLR4, играющих ключевую роль в распознавании грамотрицательных бактерий.

Материал и методы. Макрофаги человека получали культивированием моноцитов, выделенных из периферической крови здоровых доноров, с ГМ-КСФ в течение 6 дней. Далее макрофаги активировали добавлением агониста рецептора NOD1 (C12-iE-DAP), агониста рецептора TLR4 (ЛПС) или их сочетания. Для установления уровней мРНК был проведен полнотранскриптомный анализ (RNA-seq) макрофагов 3 здоровых доноров. Положение нуклеосом оценивали путем обработки хроматина микрококковой нуклеазой с последующей детекцией фрагментов ДНК методом полимеразной цепной реакции в реальном времени. Методом иммунорасщепления хроматина (Cut-and-Run) были проанализированы гистоновые модификации H3K4me3, характерные для активных промоторов.

По результатам RNA-seq была выделена группа генов с синергическим типом активации экспрессии в ответ на сочетанную стимуляцию рецепторов NOD1 и TLR4. Данная группа являлась малочисленной и составила 32 гена, или 5 % от общего числа индуцируемых генов, однако включала гены основных медиаторов воспаления (TNF, IL6, IL1B, IL23A, IL12B и др.).

Особенностью указанной группы генов была низкая базальная экспрессия и высокая индуцибельность при раздельной и, особенно, при сочетанной активации рецепторов. Было проанализировано изменение содержания метки H3K4me3 в промоторах (интервал [-1000 bp; TSS]) и в телах генов (интервал [TSS; 1000 bp]) при сочетанной стимуляции рецепторов. Активация клеток в течение 4 ч сопровождалась накоплением метки H3K4me3 в промоторах и телах синергически индуцируемых генов (СИГ), что соответствовало изменению уровней мРНК этих генов по данным RNA-seq.

У 21/32 СИГ, характеризующихся накоплением метки через 4 ч, это накопление возрастало по мере увеличения срока стимуляции (1-2-4 ч). У 5 СИГ (PTX3, IL36G, ETS1, FSD1L, SERPINB2) накопление метки отмечалось в более ранние сроки (1-2 ч), но отсутствовало через 4 ч. У 6 СИГ (CXCL2, RASL11A, TNIP3, IER3, MMP10, CCL3L1) количество метки при стимуляции никак не менялось. По данным бионформационного анализа, в промоторных областях СИГ, характеризовавшихся накоплением H3K4me3 при сочетанной активации рецепторов, были гиперпредставлены сайты связывания факторов транскрипции (ФТ) семейств NF-κB и AP-1.

Можно предположить, что эти ФТ дополняют друг друга при сочетанной стимуляции. Анализ нуклеотидного состава промоторов показал, что для СИГ характерно низкое содержание гуанина и цитозина, наличие ТАТА-бокса в интервале [-35; -25 bp] от сайта старта транскрипции (TSS), низкая представленность CpG-островков, а также вероятное расположение блокирующей нуклеосомы вблизи сайта старта транскрипции (TSS). Положение нуклеосом было проанализировано на примере генов IL6 и IL12B. При одновременной активации рецепторов NOD1 и TLR4 происходил сдвиг нуклеосомы вправо относительно TSS. Этот сдвиг был более выражен как при более длительной стимуляции рецепторов (4 против 1 и 2 ч), так и при сочетанной стимуляции по сравнению с активацией рецепторов по отдельности.

Заключение. Полученные данные позволяют предположить причину низкой базальной экспрессии СИГ: характерная для СИГ низкая представленность CpG-островков, часто ассоциированных с более "открытой" конформацией ДНК, а также низкое содержание GC в промоторах способствуют связыванию нуклеосомы вблизи TSS и ТАТА-бокса, что создает стерическое препятствие для сборки преинициационного комплекса и продвижения РНК-полимеразы. В то же время при сочетанной стимуляции происходит масштабное ремоделирование промоторов СИГ (сдвиг нуклеосом вправо от TSS, активационные модификации гистонов), что облегчает инициацию транскрипции и приводит к резкому увеличению уровней мРНК СИГ, включая мРНК провоспалительных цитокинов.

Работа выполнена в рамках гранта РНФ № 21-15-00211.

Литература

Pashenkov M. V., Murugina N.E., Budikhina A.S. et al. Synergistic interactions between NOD receptors and TLRs: Mechanisms and clinical implications. J. Leukoc. Biol. 2019; 105 (4): 669-80. DOI: https://doi.org/10.1002/JLB.2RU0718-290R

Masyutina A.M., Pashenkov M.V.

Molecular features of synergistically induced pro-inflammatory cytokine genes in human macrophages

NRC Institute of Immunology FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation

Introduction. Activation of pattern recognition receptors triggers a protective inflammatory response. However, simultaneous activation of multiple receptors, typical in infectious diseases, can synergistically enhance the expression of pro-inflammatory cytokine genes [1]. This may lead to the development of cytokine storms. Understanding the molecular characteristics of pro-inflammatory cytokine gene expression can help regulate innate immune responses during infections.

Objective. To study the molecular mechanisms regulating the expression of pro-inflammatory genes in human macrophages upon combined stimulation of pattern recognition receptors NOD1 and TLR4, which play key roles in recognizing Gram-negative bacteria.

Material and methods. Human macrophages were cultured from monocytes isolated from peripheral blood of healthy donors using GM-CSF for 6 days. Macrophages were then activated by adding a NOD1 receptor agonist (C12-iE-DAP), a TLR4 receptor agonist (LPS), or a combination of both. RNA-seq analysis was performed on macrophages from three healthy donors to determine mRNA levels. Chromatin structure was assessed using micrococcal nuclease digestion followed by qPCR detection. Histone modifications, specifically H3K4me3, were analyzed using the Cut-and-Run assay to identify active promoter regions.

Results. RNA-seq identified a group of genes with synergistic activation in response to combined NOD1 and TLR4 receptor stimulation. This group comprised 32 genes (5 % of all induced genes) but included key inflammation mediators (TNF, IL6, IL1B, IL23A, IL12B, etc.). These genes exhibited low basal expression and high inducibility, particularly under combined stimulation.

Histone modification analysis revealed increased H3K4me3 marks in the promoters (-1000 bp to TSS) and gene bodies (TSS to +1000 bp) of synergistically induced genes (SIGs) after 4 hours of stimulation, correlating with mRNA levels measured by RNA-seq. For 21 out of 32 SIGs, H3K4me3 accumulation increased with longer stimulation (1-2-4 hours). In five SIGs (PTX3, IL36G, ETS1, FSD1L, SERPINB2), early accumulation (1-2 hours) diminished by 4 hours, while in six SIGs (CXCL2, RASL11A, TNIP3, IER3, MMP10, CCL3L1), no changes were observed.

Bioinformatics analysis of promoter regions showed overrepresented transcription factor (TF) binding sites for NF-κB and AP-1 families, suggesting complementary TF activity during combined stimulation. Promoters of SIGs were characterized by low GC content, presence of a TATA box [-35 to -25 bp], low CpG island density, and potential nucleosome positioning near TSS, which may act as a steric barrier to transcription initiation.

Nucleosome positioning analysis (e. g. IL6 and IL12B genes) revealed a rightward nucleosome shift relative to TSS during combined NOD1 and TLR4 activation. This shift was more pronounced with longer stimulation (4 hours vs 1-2 hours) and combined stimulation compared to single-receptor activation.

Conclusion. The low basal expression of SIGs is likely due to the lack of CpG islands, low GC content, and nucleosome positioning near TSS, creating a steric barrier to pre-initiation complex assembly and RNA polymerase progression. Combined stimulation induces extensive promoter remodeling, including nucleosome shifts and histone modifications, facilitating transcription initiation and significantly increasing SIG mRNA levels, including pro-inflammatory cytokines.

This work was supported by the Russian Science Foundation (grant No. 21-15-00211).

References

Pashenkov M.V., Murugina N.E., Budikhina A.S., et al. Synergistic interactions between NOD receptors and TLRs: Mechanisms and clinical implications. J Leukoc Biol. 2019; 105 (4): 669-80. DOI: https://doi.org/10.1002/JLB.2RU0718-290R

Материалы данного сайта распространяются на условиях лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License («Атрибуция - Всемирная»)