Текущий номер
№ 4 . 2020
Клеточная иммунология

Динамика восстановления Т-лимфоцитов после индукции лимфопении циклофосфаном

Резюме

Введение. Химиотерапевтические препараты, применяемые в медицине главным образом для лечения онкологических заболеваний, относятся к группе факторов, вызывающих повреждение иммунной системы. Исследование механизмов восстановления Т-клеточного звена иммунной системы после воздействия цитостатических препаратов имеет важное значение как для понимания патогенеза их повреждающего действия, так и для поиска адекватных способов коррекции возникающих нарушений.

Цель работы - изучить вклад тимуса и периферического отдела иммунной системы в восстановление популяции Т-клеток после воздействия циклофосфана на мышах линии C57BL/6.

Материал и методы. Экспериментальным животным вводили циклофосфан внутрибрюшинно однократно в дозе 125 мг/кг. Мышей забивали на 0, 10, 20, 30, 60-е сутки после введения циклофосфана. В тимусе и селезенке определяли общее количество клеток и субпопуляционный состав методом проточной цитофлуориметрии.

Результаты. Обнаружено, что активно делящиеся клетки тимуса более уязвимы к действию препарата, чем лимфоциты селезенки. В то же время восстановительные процессы в тимусе начинаются раньше (на 20-е сутки) с последующим медленным восстановлением лимфоцитов селезенки (к 60-м суткам). Однако полной регенерации субпопуляции цитотоксических Т-клеток (ЦТЛ) в селезенке не отмечается даже к 60-м суткам. Исследование возрастного фенотипа Т-клеточных субпопуляций показало, что в результате действия циклофосфана происходит усиление конверсии фенотипа наивных Т-клеток в центральные Т-клетки памяти.

Заключение. Циклофосфан оказывает выраженное цитотоксическое действие на Т-клеточное звено иммунной системы мышей линии C57BL/6 с преимущественным поражением быстро делящихся популяций тимоцитов. Тимопоэз не способен компенсировать дефицит периферических Т-клеточных популяций, что ведет к усилению гомеостатической пролиферации Т-клеток, конверсии фенотипа наивных Т-клеток и накоплению Т-хелперов и ЦТЛ с фенотипом центральных Т-клеток памяти. Следствием данных изменений может стать сужение репертуара Т-клеточных рецепторов с нарушением полноценного иммунного надзора и возможным ростом онкологических, аутоиммунных и инфекционных заболеваний в последующем.

Влияние коллагеновых матрикинов на функциональное состояние лейкоцитов человека

Резюме

Введение. Матрикины - биологически активные соединения, образующиеся при частичном протеолизе белков и гликозаминогликанов внеклеточного матрикса, действуют как эндогенные регуляторы многих физиологических и патологических процессов организма. Полученные из коллагеновых белков матрикины (КМ) усиливают пролиферацию клеток соединительной ткани, стимулируют их адгезию, миграцию и синтез различных компонентов экстраклеточного матрикса, цитокинов и ростовых факторов. КМ регулируют тонус и проницаемость сосудов, участвуют в белок-белковых взаимодействиях, изменяющих функции других молекул, способствуют регенерации нервной ткани. Однако воздействие КМ в отношении клеток иммунной системы изучено далеко не полностью.

Цель исследования - комплексная оценка действия низкомолекулярных КМ на функциональную активность лейкоцитов периферической крови человека.

Материал и методы. Фракцию низкомолекулярных КМ (мол. масса <10 кДА) получали гидролизом коллагенового матрикса бактериальной коллагеназой. В зависимости от метода исследования изучение действия КМ проводили либо в цельной гепаринизированной венозной крови, либо во фракции нейтрофилов, выделенных из крови здоровых доноров. Оценивали влияние КМ на поглотительную и переваривающую функции лейкоцитов, а также на продукцию ими активных форм кислорода.

Результаты. Получены данные, что КМ способны изменять эффекторные функции фагоцитов: хотя пептиды и не повышают поглотительную способность клеток, они стимулируют их бактерицидную и синтетическую активность. Эффективность КМ зависит от их концентрации: максимальный эффект наблюдался при низких и средних концентрациях КМ (10-100 мкг/мл) и нивелировался при максимальной концентрации КМ (1000 мкг/мл).

Заключение. Таким образом, КМ проявляют иммунорегуляторную активность в отношении клеток врожденного иммунитета.

Врожденный иммунитет

Сопоставление трех видов клеточных тест-систем для оценки биологической активности агонистов рецептора NOD2

Резюме

Введение. Агонисты рецептора NOD2 представляют собой перспективный класс активаторов врожденного иммунитета. Актуально создание тест-систем для качественного и количественного определения их биологической активности.

Цель работы - сопоставить основные характеристики трех видов репортерных клеток, предназначенных для оценки биологической активности агонистов NOD2: с эндогенной экспрессией NOD2, с временной гиперэкспрессией NOD2 и со стабильной гиперэкспрессией NOD2.

Материал и методы. Репортерные клетки с эндогенной экспрессией NOD2 (293Luc) были получены путем стабильной трансфекции клеток HEK-293T геном люциферазы под контролем NF- κB-зависимого промотора. Клетки с временной гиперэкспрессией NOD2 (293Luc-tNOD2) получали путем временной трансфекции клеток 293Luc плазмидой, кодирующей ген NOD2 под конститутивным промотором. При длительном культивировании NOD2-трансфицированных клеток с селективным антибиотиком были получены клетки, стабильно гиперэкспрессирующие NOD2 (293Luc-stNOD2). Для каждого вида клеток были получены контрольные клетки, позволяющие подтверждать активацию NF- κB через рецептор NOD2. Эти клетки стимулировали 24 ч агонистом NOD2 - мурамилдипептидом (МДП); на выходе измеряли люциферин-зависимую хемилюминесценцию клеточных лизатов.

Результаты. Фоновый сигнал у клеток 293Luc-tNOD2 и 293Luc-stNOD2 был повышен соответственно в 30 и в 170 раз по сравнению с клетками 293Luc, что указывает на активацию NF- κB в отсутствие агониста. В то же время предел количественного определения МДП в среде у клеток 293Luc-stNOD2 был на порядок меньше, чем у 293Luc (1,6 и 20 нМ соответственно). У систем с использованием клеток 293Luc и 293Luc-stNOD2 отмечались приемлемые значения правильности и повторяемости, тогда как клетки 293Luc-tNOD2 характеризовались неудовлетворительной повторяемостью, а также требовали повышенного расхода реактивов и рабочего времени.

Заключение. Клеточные линии 293Luc и 293Luc-stNOD2 могут использоваться для определения биологической активности агонистов рецептора NOD2.

Вакцины и вакцинация

Иммуногенные и защитные свойства рекомбинантного аденовируса человека 5-го серотипа, экспрессирующего ген гликопротеина G вируса бешенства вакцинного штамма РВ-97

Резюме

Введение. Бешенство - это острое инфекционное заболевание, общее для человека и животных. Для профилактики заболевания до контакта с возбудителем применяется предэкспозиционная профилактическая вакцинация (ПрЭП) групп риска. В России для этой цели применяются классические инактивированные культуральные вакцины. Данные вакцины обладают высокой эффективностью, однако могут вызывать сильные побочные реакции и требует многократного введения. Поэтому актуальной является разработка новых безопасных антирабических вакцин, позволяющих добиться протективного эффекта при однократной вакцинации.

Цель исследования - создание репликативно-дефектного вирусного вектора на основе рекомбинантного аденовируса человека 5-го серотипа, несущего ген гликопротеина G вируса бешенства, и изучение его протективных и иммуногенных свойств при иммунизации лабораторных мышей.

Материал и методы. Рекомбинантный аденовирус был получен с помощью набора AdEazy Adenoviral vector system (Stratagen, США). Для оценки защитных свойств и иммуногенности аденовируса Ad5-RV97 мыши линии BALB/c были иммунизированы однократно внутримышечно. Гуморальный иммунный ответ изучали с помощью реакции флуоресцентной вирус-нейтрализации, Т-клеточный ответ - с помощью метода ELISpot.

Результаты. Рекомбинантный аденовирус Ad5-RV97 показал 100 % защиту лабораторных мышей от заражения вирусом бешенства. Уже на 14-й день после иммунизации у животных зафиксированы высокие уровни вирус-нейтрализующих антител, продолжающие расти вплоть до 42-го дня после иммунизации. Был обнаружен значимый уровень спленоцитов (как CD4+-, так и СD8+-клеток), продуцирующих ИФН-γ в ответ на стимуляцию антигеном.

Заключение. Полученные данные позволяют расценивать аденовирус Ad5-RV97 в качестве основы для создания кандидатной антирабической вакцины, которая может применяться для ПрЭП различных групп риска.

Онкоиммунология

Популяция СD8+-лимфоцитов периферической крови и ее значение для непосредственных и отдаленных результатов лечения больных трижды негативным раком молочной железы

Резюме

Введение. Трижды негативный рак молочной железы (ТН РМЖ) характеризуется агрессивным течением и высокой вероятностью рецидивирования. Важную роль в регуляции роста злокачественных новообразований, а также в эффективности различных видов противоопухолевой терапии играет иммунная система. Определение взаимосвязи СD8+-популяций лимфоцитов периферической крови (ПК) с эффективностью лечения больных ТН РМЖ может помочь в установлении иммунологических предиктивных и прогностических факторов и в повышении эффективности лечения пациенток.

Цель настоящего исследования - определение значимости исходного количества клеток СD8+-популяций лимфоцитов периферической крови (CD8+, CD3+CD8+, CD8+CD28+, CD8+CD28-, CD3-CD8+)для непосредственных (степень лечебного патоморфоза опухоли) и отдаленных (прогрессирование заболевания и выживаемость) результатов лечения больных трижды негативным раком молочной железы.

Материал и методы. У больных со II-III стадиями (n = 72; медиана возраста 50 лет) до начала неоадъювантной химиотерапии (цисплатин + паклитаксел) определяли процентное содержание CD8+, CD3+CD8+, CD8+CD28+, CD8+CD28, CD3CD8+-лимфоцитов ПК с помощью многопараметрового цитометрического анализа. Исследовалась взаимосвязь исходного количества клеток данных популяций со степенью лечебного патоморфоза опухоли (ЛПО), прогрессированием заболевания и выживаемостью пациенток. Период наблюдения составил 60 мес.

Результаты. Процентное содержание CD8+CD28+-лимфоцитов и величина соотношения CD8+CD28+/CD8+CD28 до лечения были статистически значимо выше у больных с высокой степенью (IV) ЛПО, у пациенток без прогрессирования заболевания (ПЗ) и у выживших больных, по сравнению с пациентками с ЛПО I-III степени, больными с ПЗ и умершими пациентками. Повышение исходного количества CD8+CD28+-лимфоцитов ПК и величины соотношения CD8+CD28+/CD8+CD28- ассоциировалось с увеличением безрецидивной и общей выживаемости пациенток по сравнению с больными, у которых эти показатели были снижены. У пациенток, умерших в течение периода наблюдения, до начала химиотерапии было повышено количество CD3-CD8+-лимфоцитов. Повышение числа этих клеток сочеталось также с уменьшением ОВ больных.

Заключение. Популяция CD8+CD28+-лимфоцитов периферической крови и величина соотношения CD8+CD28+/CD8+CD28- могут быть возможными предиктивными факторами у пациенток со II-III стадиями ТН РМЖ, получавших неоадъювантную химиотерапию цисплатином и паклитакселом.

Клиническая иммунология

Роль сывороточного амилоида А и С-реактивного белка в прогнозировании послеоперационных осложнений и обострения туберкулезного процесса после хирургического вмешательства у детей старшего возраста и подростков

Резюме

Введение. Поиск ранних лабораторных маркеров, указывающих на развитие обострения или осложнения основного процесса у детей и подростков, оперированных по поводу туберкулеза, является актуальной проблемой.

Цель исследования - изучить изменения уровня белков острой фазы воспаления - сывороточного амилоида А (САА) и С-реактивного белка (СРБ) - до операции, через 1 нед и 1-6 мес после ее проведения для раннего прогнозирования послеоперационных осложнений и обострения туберкулеза.

Материал и методы. Исследованы 28 пациентов, которым на разных сроках химиотерапии (ХТ) проведены оперативные вмешательства различного объема. Сформированы 2 группы: 1-я - 22 пациента (без осложнений и прогрессирования туберкулеза), 2-я - 6 пациентов (послеоперационные осложнения - 4, прогрессирование туберкулеза - 2). Уровни САА и СРБ изучали методом иммуноферментного анализа.

Результаты. В 1-й группе уровень САА до оперативного вмешательства составлял 13,11 ± 0,63 мкг/мл, во 2-й группе - 14,86 ± 0,72 мкг/мл, эти значения достоверно не различались. Через 1 нед после операции в 1-й группе уровень САА был достоверно ниже, чем во 2-й группе (12,3 ± 0,57 мкг/мл и 15,2 ± 0,6 мкг/мл; р = 0,001747). Подобные различия сохранялись и через 1 мес (13,57 ± 0,46 мкг/мл и 18,5 ± 0,21 мкг/мл, р = 0,0096; соответственно). Уровень СРБ в исследованных группах имел сходную динамику. Через 1 нед и через 1 мес после операции во 2-й группе отмечен достоверный подъем уровня СРБ: 18,8 ± 0,76 мг/л и 14,75 ± 1,4 мг/л = 0,017581), и 18,6 ± 1,1 мг/мл и 12,8 ± 1,73 мг/мл = 0,009067) соответственно.

Заключение. Одновременное повышение уровней СРБ и САА на ранних сроках после операции служит прогностическим критерием послеоперационного осложнения (экссудативный плеврит) или обострения туберкулеза.

Клиническая оценка В- и Т-лимфоцитов у пациентов с хирургическим сепсисом

Резюме

Введение. Иммунные нарушения при сепсисе включают в себя широкий спектр реакций от "цитокинового шторма" до глубокой иммуносупрессии. Клеточные реакции врожденного и адаптивного иммунитета ответственны за меняющийся сценарий на разных этапах заболевания. Исследований, касающихся аспектов механизмов иммунного ответа со стороны клеток адаптивного иммунного ответа при сепсисе, мало. Отмечены важные изменения количественного состава и роль В- и Т-лимфоцитов в регуляции воспаления на различных этапах течения сепсиса. Вопрос о возможности их использования в качестве биомаркеров при септических состояниях и критериев при диагностике его фенотипов и эндотипов остается открытым.

Цель исследования - провести расширенное исследование клеточного звена адаптивного иммунитета при различных клинических вариантах течения сепсиса в динамике.

Материал и методы. Представлены данные проспективного исследования, в котором были проанализированы результаты состояния клеток адаптивного иммунитета 43 пациентов. С учетом тяжести состояния и выраженности органной недостаточности они были распределены на группы по шкале - SOFA (Sepsis-related Organ Failure Assessments Score Sequential Organ Failure Assessment). Забор крови проводился у пациентов в первые 48 ч после поступления в отделение интенсивной терапии и на 21-28-е сутки заболевания. Определение уровня В- и Т-лимфоцитов (CD3+CD19+, CD3+CD19-, CD3+CD4+, CD3+CD8+), а также субпопуляций Т-лимфоцитов Th1 (CD3+CD4+ИФНγ+), Th2 (CD3+CD4+H3-4+), Treg (CD3+CD4+CD25brightCD127negCD45+) осуществляли методом проточной цитометрии.

Результаты. Отмечена лимфопения на 21-28-е сутки заболевания в группе с более тяжелым течением сепсиса < 0,05), как относительно группы сравнения, так и по отношению к показателям дебюта болезни. Уровень CD19+-лимфоцитов был снижен в группе с более выраженной тяжестью органной дисфункции относительно группы сравнения < 0,05) на 21-28-е сутки. В группах с различной степенью органной дисфункции на начальной стадии заболевания (первые 48 ч) не выявлено дисбаланса соотношения Th1 и Th2. На более поздних стадиях (21-28-е сутки) преобладает Th2-субпопуляция Т-лимфоцитов < 0,05), а в группе с выраженной органной дисфункцией зарегистрировано повышенное содержание Treg < 0,01).

Заключение. Выявлены минимальные изменения со стороны клеток адаптивного иммунитета на начальных стадиях сепсиса, независимо от тяжести течения и степени органной дисфункции. На более поздних сроках (21-28-е сутки) зафиксировано снижение CD19+-лимфоцитов, преобладание Th2-субпопуляции над Th1 < 0,05), повышенное содержание Treg. Одним из маркеров, позволяющих определять наступление иммуносупрессивной фазы сепсиса, может явиться количество Treg.

Взаимообусловленность влияний I и II типов воспаления на процессы липопероксидации и антиоксидантной защиты у пациентов с механической желтухой желчнокаменного генеза в послеоперационном периоде

Резюме

Введение. Патогенез механической желтухи (МЖ) сложен, характеризуется развитием местной и системной воспалительных реакций, эндотоксикоза и сопутствующих органных и гистодеструктивных изменений. Воспалительная активация иммунных клеток стимулирует транскрипцию генов, ответственных за окислительный стресс; активные формы кислорода разрушают мембраны иммунокомпетентных клеток, пролонгируя локальное воспаление.

Цель исследования - оценка вклада иммуновоспалительных изменений в процессы липопероксидации и функционирование антиоксидантной защиты в формировании послеоперационных осложнений у больных МЖ желчнокаменного генеза.

Материал и методы. Обследованы 70 больных с клинической картиной МЖ. Изучена концентрация 6 цитокинов: I (ИЛ-2, ИЛ-8, ФНОα, ИФН-γ) и II (ИЛ-4, ИЛ-10) типов воспаления методом иммуноферментного анализа. Содержание малонового диальдегида и активность антиоксидантных ферментов изучали в эритроцитах спектрофотометрическими методами. Статистические данные анализировали с помощью прикладных программ Statistica 10.

Результаты. Продемонстрирована преимущественная роль в патогенезе МЖ с осложненным послеоперационным периодом воспалительного процесса I типа, а в патогенезе МЖ с неосложненным послеоперационным периодом - воспаления I и II типов. Обнаружено значительное повышение содержания малонового диальдегида в эритроцитах у больных обеих сравниваемых групп, что подтверждает усиление процессов липопероксидации в раннем послеоперационном периоде. Вместе с тем выявленные в нашей работе результаты, указывающие на усиление активности антиоксидантной защиты, увеличение активности ферментов супероксиддисмутазы и каталазы, которые способствуют снижению проявлений окислительного стресса и свидетельствуют скорее о протекторной роли воспаления II типа у больных МЖ с неосложненным послеоперационным периодом.

Заключение. У больных МЖ с осложненным послеоперационным периодом выявляется усиление процессов липопероксидации, снижение активности ферментов антиоксидантной защиты и преимущественный I тип воспаления. У больных МЖ с неосложненным послеоперационным периодом проявления окислительного стресса компенсируются повышением активности энзимов антиоксидантной защиты, выявляются I и II типы воспаления.

Методы

Сравнительный анализ современных методов диагностики аллергических реакций немедленного типа

Резюме

Эффективность лечения аллергических заболеваний (АЗ), большинство которых возникает из-за развития у пациентов аллергических реакций немедленного типа (АРНТ), напрямую связана с диагностикой. Для специфической диагностики АЗ, обусловленных развитием АРНТ, применяют тесты как in vivo, так и in vitro, которые связаны с образованием комплекса аллерген - антитело класса IgE. Один из диагностических методов in vivo - кожные пробы - прост в постановке, результат исследования известен через 20 мин. Однако для постановки кожных проб имеется ряд противопоказаний, несоблюдение которых может спровоцировать нежелательные осложнения, в том числе и анафилактический шок. Современные тесты in vitro (REAST и аллергочип) противопоказаний для проведения не имеют и позволяют более точно установить причинно-значимый аллерген. Они относятся к методам молекулярной диагностики (МД), поскольку при их применении используют отдельные компоненты природного аллергенного комплекса, включающего несколько различных антигенных детерминант, которые разделяются на мажорные и минорные. Главные (мажорные) компоненты аллергенного комплекса вызывают сенсибилизацию у 50 % и более пациентов, минорные компоненты аллергенного комплекса - менее чем у 10 % пациентов. С помощью методов МД был изучен механизм возникновения перекрестных аллергических реакций на аллергены, к которым у пациента не было первичной сенсибилизации, и разработаны карты перекрестной иммунореактивности. Методы МД более затратны по сравнению с кожными пробами, однако по их результатам можно оценить эффективность аллерген-специфической иммунотерапии (АСИТ), что приводит к существенному снижению стоимости лечения. Если у пациентов выявлена сенсибилизация к главным компонентам аллергенного комплекса, то АСИТ будет эффективна, поскольку препараты аллергенов, используемые для ее проведения, представляют собой водно-солевые экстракты только природных аллергенов, в которых присутствуют в значительных количествах главные аллергенные компоненты.

Обзоры

Заболевания пародонта и атеросклероз: микроэкологические, метаболические и иммунологические механизмы взаимосвязи

Резюме

Обзор содержит анализ литературных данных последних десятилетий, посвященный микроэкологическим, метаболическим и иммунологическим механизмам связи между заболеваниями пародонта и атеросклеротическим поражением сосудов. Показана роль липидного обмена и иммунных механизмов, подтвержденная современными представлениями о патогенезе атеросклероза. Обсуждена концепция о потенциальном значении инфекционных агентов как компонентов биопленки зубодесневой борозды в патогенезе атеросклероза с позиций данных последних лет о свойствах бактерий-персистеров. Представлены доказательства участия пародонтопатогенных бактерий в формировании атеросклеротических бляшек и рассмотрены механизмы такого участия. В итоге удалось показать, что одним из главных связующих компонентов для заболеваний пародонта и атеросклероза служит этиологический фактор, включающий способность пародонтопатогенных бактерий влиять на липидный обмен в тканях, проникать внутрь макрофагов, персистировать в кровотоке, участвовать в формировании пенистых клеток и атеросклеротических бляшек, влиять на прогрессирование атеросклеротического и аутоиммунного процесса.

Вирус Эпштейна-Барр: разработка вакцин

Резюме

Введение. Вакцинация - один из наиболее эффективных способов снижения заболеваемости. Инфекция, вызванная вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ), при отсутствии вакцинации представляет серьезную проблему здравоохранения.

Целью систематического обзора стало изучение разработки средств специфической иммунопрофилактики ВЭБ-инфекции.

Материал и методы. Поиск осуществлялся в базах eLibrary, Cyberleninka, The Cochrane Library, PubMed, clinicaltrials.gov и на сайте Researchgate в соответствии с разработанной стратегией с учетом критериев включения и невключения. Глубина поиска составила 20 лет. Период поиска 04.05.2020-19.05.2020. Окончательный список публикаций включал 10 исследований.

Результаты. Из 10 отобранных работ семь отображали результаты испытаний канди-датных вакцин, нацеленных на предотвращение инфицирования ВЭБ, три - описывали кандидатные вакцины для иммунизации инфицированных ВЭБ индивидуумов для экстренной профилактики развития инфекции или лечения ВЭБ-ассоциированных опухолей. Клинические испытания (I фаза) были проведены для двух кандидатных вакцин, одна из которых в последующем прошла II фазу. Однако полученные результаты не позволили продолжить испытания данной кандидатной вакцины.

Заключение. Ни одна из кандидатных вакцин на настоящий момент не прошла все фазы клинических испытаний.

Юбилей

Владимир Александрович КОЗЛОВ

Резюме

Материалы данного сайта распространяются на условиях лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License («Атрибуция - Всемирная»)


Журналы «ГЭОТАР-Медиа»