Текущий номер
№ 2 . 2022
От редакции

Рахим Мусаевич Хаитов (06.01.1944-11.03.2022)

Резюме
Иммуногенетика

Врожденный T- и НК-клеточный иммунодефицит с нарушением в экспрессии β-интегрина на нейтрофилах у пациента с мутацией в гене KMT2D: клинический случай

Резюме

Введение. Патогенные мутации в генах KMT2D или KDM6A связаны не только с классическими проявлениями синдрома кабуки (СК), характеризующимися постнатальной недостаточностью роста, дисморфическими чертами лица, аномалиями скелета и умственной отсталостью, но и проявлениями общего вариабельного иммунодефицита, выявляемыми не менее чем у 50 % пациентов. У лиц с СК имеется склонность к рецидивирующим инфекциям и гипогаммаглобулинемии.

Цель исследования - продемонстрировать сложности диагностики причин врожденного иммунодефицита у детей и представить алгоритм диагностического поиска.

Материал и методы. Ребенок от неродственного брака, вторых срочных родов. Старшая сестра здорова. Психомоторное развитие до 12 мес без особенностей. С 14-месячного возраста - гнойный конъюнктивит, фарингит и ринит, резистентные к проводимой терапии. В 16 мес отмечены шаткость походки, нарастающая мышечная гипотония, периодические навязчивые движения кистями рук по типу гиперкинезов. Микроцефалия, окружность головы - 44 см (< 5-го центиля). Госпитализирован с диагнозом "двусторонняя пневмония, гнойный конъюнктивит, гнойный левосторонний отит".

Результаты. На фоне гранулематозного поражения легких, доказанного биопсией, энтероколита, пансинусита выявлено отсутствие популяции Т-регуляторных (CD4+CD25highCD127-) и эффекторных НК-клеток (CD16+CD56+CD3-) в периферической крови со снижением уровня CD4+CD3+-Т-лимфоцитов и индекса CD4+/CD8+. Кроме того, на клетках гранулоцитарного ряда отсутствовала экспрессия интегрина-β (CD18). При полноэкзомном секвенировании выявлена делеция в экзоне 24 гена KMT2D, что позволило поставить точный клинический диагноз - СК. При этом у пациента не наблюдалось характерной гипогаммаглобулинемии и дисморфических черт.

Заключение. Тяжелая инфекция не всегда является первичной клинической манифестацией некоторых редких форм врожденных иммунодефицитных состояний. Дебют может быть связан с неинфекционными проявлениями, что не исключает наличие врожденного генетического дефекта, в дальнейшем определяющего комбинацию клинических синдромов, требующую комплексной терапии и взаимодействия врачей различных специальностей.

Клеточная иммунология

Показатели клеточного иммунитета человека в условиях создания искусственной гравитации с помощью центрифуги короткого радиуса

Резюме

Введение. В условиях космического полета организм человека сталкивается с воздействием ряда неблагоприятных факторов. Одним из них является микрогравитация, приводящая к угнетению функций различных физиологических систем, в том числе иммунной. Элиминировать негативные эффекты микрогравитации можно посредством создания искусственной силы тяжести (ИСТ) на борту космического корабля с использованием центрифуги короткого радиуса (ЦКР). Проведенные наземные эксперименты призваны определить оптимальные режимы создания ИСТ на ЦКР с точки зрения безопасности в отношении иммунной системы человека.

Цель исследования - оценка направленности и степени выраженности изменений показателей клеточного иммунитета человека до и после вращения на ЦКР в различных режимах.

Материал и методы. В исследовании приняли участие 10 практически здоровых добровольцев (мужчин) в возрасте 25-40 лет. С каждым испытуемым проведено по 3 вращения на ЦКР. Действующим фактором в испытаниях являлись перегрузки направления "голова-таз" (+Gz). Режимы вращения различались между собой величиной перегрузки на уровне стоп, длительностью "площадки" при разгоне и торможении, а также общим временем вращения. Забор венозной крови осуществлялся в вакуумные пробирки с калиевой солью этилендиаминтетрауксусной кислоты до вращений (фон), а также после каждого вращения на ЦКР.

В образцах крови испытуемых методом проточной цитометрии оценивали следующие показатели клеточного иммунитета: содержание хелперных Т-лимфоцитов (Th, CD3+CD4+), цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ, CD3+CD8+), В-лимфоцитов (CD3-CD19+), натуральных киллеров (НК, CD3-CD16+CD56+), неклассических моноцитов (CD14+CD16++), моноцитов и гранулоцитов с мембранной экспрессией рецепторов комплемента III типа (CR3, CD11b+CD18+) и толл-подобных рецепторов (TLR) - TLR2, TLR4, TLR6. Полученные данные представлены в виде медианы (Ме) и интерквартильного размаха (Q25-Q75). Для оценки достоверности различий исследуемых показателей использовался непараметрический Т-критерий Вилкоксона для связанных выборок при уровне значимости р < 0,05.

Результаты. В исследовании сравнивались показатели клеточного иммунитета после каждого из 3 вращений на ЦКР с фоновыми значениями (до вращений). Было выявлено снижение содержания НК-клеток (режим вращения 1), моноцитов, экспрессирующих TLR6, и гранулоцитов, экспрессирующих TLR2, (режим вращения 2). Режим вращения 3 не приводил к достоверным изменениям исследуемых показателей иммунной системы.

Заключение. Полученные данные о снижении содержания клеток врожденного иммунитета в периферической крови говорят о возможном угнетении функциональной активности иммунной системы после вращения на ЦКР при режимах 1 и 2. Однако после вращения в режиме 3 значения исследуемых показателей достоверно не отличались от фоновых, что, на наш взгляд, определяет безопасность для иммунной системы использования ЦКР в качестве средства профилактики негативных последствий действия микрогравитации на организм человека.

Экспериментальная модель антиген- и коллаген-индуцированного артрита у мышей

Резюме

Введение. Ревматоидный артрит (РА) - одно из наиболее распространенных аутоиммунных заболеваний со сложным патогенезом. Для разработки и апробации новых методов и подходов терапии РА (биологических препаратов, клеточных технологий) необходима экспериментальная модель со схожими патогенетическими реакциями и иммунологическими изменениями. Одним из таких подходов является разработка моделей комбинированного антиген- и коллаген-индуцированного артрита.

Цель исследования - обосновать применение в исследовательской деятельности и в разработке новых терапевтических подходов модели антиген- и коллаген-индуцированного артрита (АИА/КИА) на основании изучения иммунологических и гистологических показателей, выявленных в данной модели.

Материал и методы. Индукция экспериментального АИА/КИА проводилась по трем разным протоколам у 60 мышей линии Balb/c. Визуальную оценку артрита проводили, измеряя припухлость лап штангенциркулем в разные сроки. Оценка иммунологических изменений включала анализ содержания антител к коллагену II типа методом иммуноферментного анализа, содержания Т-регуляторных клеток методом проточной цитометрии. Кроме того, проводилось гистологическое исследование тканей суставов с последующим анализом полученных данных.

Результаты. На 10-е сутки регистрировали достоверное увеличение толщины лап у животных при индукции экспериментального артрита по 3 разным протоколам. Интенсивность припухлости спадала к 23-м суткам. Достоверное увеличенное содержание антител к коллагену II типа наблюдалось во всех экспериментальных группах, но в группе животных с использованием протокола № 1 количество антител к коллагену II типа было достоверно выше. Высокий уровень Т-регуляторных клеток зарегистрирован на 10-е сутки только в группе мышей с использованием протокола № 1. Гистологические изменения в виде гиперплазии синовиальной оболочки, паннусов, узураций в разной степени наблюдались во всех экспериментальных группах, но наиболее выраженные изменения были в группе животных с применением протокола № 1.

Заключение. У всех экспериментальных животных независимо от использованного протокола индукции артрита наблюдались изменения, наиболее приближенные к РА, при их сравнении с классическими моделями индукции экспериментального артрита. Основываясь на том, что в группе животных с использованием протокола № 1 выявляется увеличение содержания Т-регуляторных клеток, уровни антител к коллагену II типа стабильно находились на высоком уровне, а гистологические изменения были наиболее выражены, можно полагать, что протокол № 1 комбинированной модели АИА/КИА на линии мышей Balb/c более всего подходит для апробации и разработки новых методов терапии РА.

Иммунопатология

Влияние глипролиновых нейропептидов на уровень интерлейкинов и нейротрофических факторов в условиях стрессогенного воздействия

Резюме

Введение. В настоящее время особый интерес представляют научные работы, отражающие результаты изучения патологического влияния стрессогенных факторов, в том числе социального характера, на различные системы организма. Стрессогенное воздействие в биохимическом плане проявляется выделением глюкокортикоидов в кровь, относя этот процесс к одному из главных рычагов влияния на иммунную систему посредством изменения секреции иммуноцитами про- и противовоспалительных цитокинов. В настоящее время пристальное внимание уделяется оценке роли интерлейкинов, нейротрофических факторов и других цитокинов в реализации стрессовой реакции, а также поиск средств коррекции данных нарушений.

Цель исследования - изучить влияние глипролиновых соединений на уровень интерлейкинов (ИЛ-1β и ИЛ-6) и нейротрофических (NGF и BDNF) факторов в сыворотке крови белых крыс на модели социального стресса.

Материал и методы. Экспериментальные исследования проводили на 90 нелинейных белых крысах-самцах 6-месячного возраста. Содержание лабораторных животных отвечало требованиям международной и отечественной нормативной документации по работе с животными. В процессе моделирования социального стресса все крысы были разделены по типу поведения на агрессоров и жертв. В исследовании формировались экспериментальные группы (n = 10): контрольные животные; животные, в течение 20 дней подвергавшиеся воздействию стресса; группы крыс, получавших внутрибрюшинно в дозе 100 мкг/кг в сутки, начиная с 1-го дня воздействия стресс-фактора, курсом 20 дней нейропептидные соединения Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro (Селанк), Pro-Gly-Pro и Pro-Gly-Pro-Leu. Уровни интерлейкинов и нейротрофических факторов сыворотки крови белых крыс оценивали методом иммуноферментного анализа.

Результаты. По результатам проведенного исследования было установлено, что в условиях социального стресса отмечалось повышение концентрации провоспалительных интерлейкинов и снижение концентрации BDNF и NGF. Введение нейропептидных соединений на фоне стресса способствовало восстановлению уровня исследуемых показателей, что, вероятнее всего, связано с наличием у нейропептидов нейропротекторного действия за счет индукции синтеза нейротрофических факторов.

Заключение. Таким образом, введение глипролиновых соединений Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Pro-Gly-Pro и Pro-Gly-Pro-Leu в условиях стрессогенного воздействия способствует восстановлению уровней интерлейкинов и нейротрофических факторов, в результате чего наблюдается стресс- и нейропротекторное воздействие исследуемых соединений.

Клиническая иммунология

Цитокиновые паттерны летальных гипервоспалительных состояний, индуцированных вторичным гемофагоцитарным синдромом, бактериальным сепсисом и COVID-19

Резюме

Введение. При тяжелом течении коронавирусной инфекции 2019 (COVID-19) образование легочных инфильтратов сопровождается синдромом "цитокинового шторма" (ЦШ). Помимо COVID-19, причины развития ЦШ включают вторичный гемофагоцитарный синдром (ВГФС) и септический шок (СШ).

Цель данного исследования - сравнение иммунологических профилей пациентов с неблагоприятными исходами COVID-19, ВГФС и СШ.

Материал и методы. Сывороточные концентрации ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-17A, ИЛ-18, ИФН-γ, ФНОα, прокальцитонина, неоптерина, ферритина с определением процента гликозилирования (% ГФ) определяли проспективно у 37 пациентов с COVID-19, поступивших в стационар и скончавшихся в 2020 г.; ретроспективно у 39 пациентов с ВГФС и у 47 пациентов с СШ, поступивших в стационар и скончавшихся за 2018-2019 гг. Группы сравнения также включали образцы сыворотки крови 194 пациентов с благоприятными исходами COVID-19 и 20 здоровых доноров, собранные в течение 2020 г. Концентрации цитокинов, прокальцитонина и неоптерина измеряли с помощью иммуноферментного анализа; уровень ферритина определяли турбидиметрическим методом. Для расчета % ГФ была использована модификация метода M. Worwood и соавт.

Результаты. У пациентов с летальными исходами COVID-19 медианы концентраций ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-18 и прокальцитонина были достоверно выше, чем при благоприятных исходах заболевания. В то же время концентрации ИЛ-8, ИЛ-18, ИФН-γ, ФНОα и ферритина были достоверно ниже при летальном COVID-19 по сравнению с ВГФС и СШ. Концентрации ИЛ-6 и прокальцитонина у пациентов с COVID-19 были достоверно выше, чем при ВГФС, но не отличались от соответствующих показателей в группе СШ. Медиана числа лейкоцитов была наиболее высокой в группе летального COVID-19 (p < 0,05).

Заключение. Каждый вариант летальной гипервоспалительной реакции сопровождался характерными особенностями цитокинового профиля: высокие концентрации ИЛ-6 в сочетании с низкими концентрациями ИФН-γ, ФНОα при COVID-19; высокие концентрации ИЛ-6, ИЛ-8 и низкие ИЛ-17A, ИЛ-2 при СШ; высокие концентрации ИЛ-18 и ИФН-γ, а также ферритина, и низкие концентрации ИЛ-6, прокальцитонина, низкие показатели % ГФ при ВГФС.

Динамика показателей иммунного статуса у пациентов с COVID-19, получающих терапию с включением антагониста рецептора ИЛ-6

Резюме

Введение. Своевременное назначение упреждающей терапии "цитокинового шторма" у пациентов с COVID-19 с применением таргетных препаратов - важная составляющая успеха в лечении данного заболевания. Однако блокада рецепторов к провоспалительным цитокинам, в частности к ИЛ-6, приводит к сдвигам в иммунорегуляторных процессах, характер которых может определить эффективность проводимой терапии и течение постковидного периода реабилитации пациента.

Цель - изучение динамики параметров врожденного и адаптивного иммунитета у пациента с COVID-19 при использовании антагониста рецептора ИЛ-6.

Материал и методы. Обследованы 30 пациентов, госпитализированных с диагнозом "коронавирусная инфекция COVID-19 (подтвержденная), среднетяжелая форма; осложнение: двусторонняя полисегментарная пневмония". Группу сравнения составили 30 практически здоровых доноров. Оценивалась динамика лабораторных показателей (общеклинические, биохимические и иммунологические) на фоне проводимой терапии антагонистом рецептора ИЛ-6.

Результаты. Наличие у пациента лимфопении и повышение уровней С-реактивного белка, лактатдегидрогеназы, фибриногена, лактата, ИЛ-6 требуют применения упреждающей антицитокиновой терапии. Своевременное назначение соответствующих препаратов (в частности антагонистов рецепторов ИЛ-6) оказывает положительный эффект на течение болезни и выздоровление пациентов. В иммунной системе через 2 нед после введения моноклональных антител к рецепторам ИЛ-6 отмечается усиление процессов созревания Т-лимфоцитов, документирующееся увеличением содержания Т-лимфоцитов, обладающих хелперной функцией, с одновременным снижением количества натуральных киллеров, В-лимфоцитов и дисиммуноглобулинемией IgA, IgM и IgG.

Заключение. Применение антагониста рецептора ИЛ-6 у пациентов со среднетяжелой формой COVID-19 приводит к дисрегуляторным процессам в иммунной системе с их постепенной нормализацией ко 2-й неделе после введения.

Субпопуляционный состав B-лимфоцитов крови, коэкспрессирующих CD5 и хемокиновые рецепторы, у пациентов с хронической обструктивной болезнью легких

Резюме

Введение. В легочной ткани больных хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) обнаружены аутоантитела к собственным клеткам легких, компонентам клеток и белкам внеклеточного матрикса. Существенным источником этих аутоантител могут являться CD5+-B-лимфоциты. Однако количественные изменения и способность к миграции в очаг воспаления этой субпопуляции лимфоцитов у пациентов с ХОБЛ не выяснены.

Цель исследования - определить количественные изменения субпопуляций B-лимфоцитов, несущих на своей поверхности молекулу CD5 и хемокиновые рецепторы, в периферической крови пациентов с ХОБЛ.

Материал и методы. В исследовании приняли участие 51 курящий пациент с ХОБЛ, 21 курящий здоровый человек и 20 здоровых некурящих лиц, в клетках периферической крови которых с помощью метода проточной цитометрии проведена оценка коэкспрессии молекулы CD5 и хемокиновых рецепторов CXCR3, CXCR4, CXCR5 и CCR7.

Результаты. Установлено, что у курящих пациентов, страдающих ХОБЛ, по сравнению со здоровыми курящими и некурящими людьми в клетках периферической крови увеличено процентное содержание CD5+-B-клеток, а также B-лимфоцитов, коэкспрессирующих CD5 и CXCR3. Относительное количество B-клеток крови, обладающих хемокиновыми рецепторами CXCR3, но лишенных молекулы CD5, также выше у больных ХОБЛ, чем у здоровых курильщиков и у здоровых некурящих людей. Процентное содержание CD5+CXCR3high-B-клеток повышено у больных с поздними (3-4-й) стадиями ХОБЛ (в соответствии с критериями GOLD) по сравнению с пациентами, имеющими 2-ю стадию заболевания. Обнаружена прямая корреляционная связь количества баллов по тесту CAT, отражающему качество жизни больных ХОБЛ, с долей CD5+CXCR3high- и CD5-CXCR3high-B-лимфоцитов крови. Отсутствуют различия доли CD5+- и CD5--B-лимфоцитов, экспрессирующих хемокиновые рецепторы CXCR4, CXCR5 и CCR7, между больными ХОБЛ и здоровыми людьми. У всех 3 групп обследованных лиц процентное содержание CD5+-B-клеток, экспрессирующих рецепторы CXCR3 и CXCR4, выше, а содержащих рецепторы CXCR5 - ниже, чем относительное количество CD5--B-лимфоцитов, несущих соответствующие рецепторы.

Заключение. Результаты проведенного исследования демонстрируют изменение профиля хемокиновых рецепторов B-лимфоцитов в периферической крови пациентов с ХОБЛ в зависимости от коэкспрессии молекулы CD5.

Методы

Разработка критериев иммобилизации эритроцитов человека фенотипов R1R1 и R2R2 на твердой фазе при определении содержания анти-D-антител IgG в препаратах иммуноглобулина человека антирезус Rho(D) методом иммуноферментного анализа

Резюме

Введение. Содержание анти-D-антител (Ат) IgG в препаратах иммуноглобулина человека антирезус Rho(D) оценивают методом прямого конкурентного иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием международного стандартного образца (МСО) анти-D-иммуноглобулина, коммерческих реагентов и антигенов (Аг) для приготовления иммуносорбента. Свежеприготовленные и консервированные D-положительные эритроциты I(0) группы крови человека фенотипов R1R1 и R2R2, полученные не менее чем от 3 доноров - это Аг, которые иммобилизуют на твердой фазе в лабораторных условиях. Особенности их распределения на твердой фазе при приготовлении иммуносорбента не изучены, данный этап воспроизведения метода не стандартизован.

Цель исследования - разработать критерии иммобилизации эритроцитов человека фенотипов R1R1 и R2R2 на твердой фазе при определении содержания анти-D-Ат IgG в препаратах иммуноглобулина человека антирезус Rho(D) методом прямого конкурентного ИФА.

Материал и методы. В работе использовали эритроциты доноров I(0) группы крови человека фенотипов R1R1 и R2R2, МСО анти-D-иммуноглобулина, стандартный образец иммуноглобулина человека нормального, не содержащего анти-D-Ат IgG, биотинилированные моноклональные анти-D-Ат. Иммуносорбент готовили путем иммобилизации предварительно отмытых и гидролизованных папаином эритроцитов в лунках полистиролового планшета, количественную оценку их распределения на твердой фазе проводили с помощью микроскопии и компьютерной морфометрии. Для установления значений критериев иммобилизации проводили количественную оценку содержания анти-D-Ат IgG в растворах испытуемых образцов с известным содержанием анти-D-Ат IgG методом прямого конкурентного ИФА.

Результаты. Установлено, что эритроциты фенотипов R1R1 и R2R2 распределяются на поверхности твердой фазы неравномерно, со склонностью к агрегации в зависимости от фенотипа. Предложены формулы и рассчитаны площадь равномерного распределения эритроцитов на твердой фазе - относительная площадь (Sотн.), суммарная площадь агрегированных эритроцитов изученных фенотипов (∑S) и коэффициенты их распределения (Красп.) на твердой фазе. Разработаны критерии иммобилизации Аг на твердой фазе: для эритроцитов фенотипа R1R1 Sотн. должна быть ≥ 88 %, Красп. - ≤ 0,22; для эритроцитов фенотипа R2R2 Sотн. - ≥ 70 %, Красп. - ≤ 0,23. Показано, что результаты определения содержания анти-D-Ат IgG в препаратах иммуноглобулина человека антирезус Rho(D) методом прямого конкурентного ИФА соответствуют критериям приемлемости при соблюдении установленных критериев иммобилизации эритроцитов.

Заключение. Разработанные критерии иммобилизации эритроцитов фенотипов R1R1 и R2R2 рекомендуется использовать для стандартизации этапа приготовления иммуносорбента при определении содержания анти-D-Ат IgG в препаратах иммуноглобулина человека антирезус Rho(D) методом прямого конкурентного ИФА.

Обзоры

Иммунопатогенез мультисистемного воспалительного синдрома, связанного с COVID-19, у детей

Резюме

В настоящем обзоре представлены сведения о роли иммунной системы в развитии мультисистемного воспалительного синдрома у детей (MIS-C), ассоциированного с новой коронавирусной инфекцией (COVID-19). Представлены основные клинические критерии установления диагноза, описаны клиническая картина и характеристика биомаркеров при MIS-C. Основной причиной развития мультисистемного воспалительного синдрома большинство исследователей считают активацию иммунной системы с развитием гиперергической воспалительной реакции. При этом гетерогенность MIS-C лежит в основе различных гипотез его развития. Роль предрасполагающих факторов к развитию различных вариантов иммунного реагирования при MIS-C еще предстоит установить, исследования продолжаются.

Особенности аносмии при COVID-19 и аллергическом рините. Влияние масок на выраженность симптомов

Резюме

SARS-CoV-2 вызывает заболевание COVID-19, оказывающее серьезное влияние как на нижние дыхательные пути, вызывая двустороннюю пневмонию и острый респираторный синдром, так и на верхние дыхательные пути, вызывая ринорею, зуд и аносмию.

Обоняние - одно из важнейших чувств, которое необходимо для получения информации об окружающей среде. Нарушения обоняния являются важными диагностическими симптомами COVID-19, которые выявляются почти в 90 % случаев. Аносмия может быть первым и даже единственным симптомом, а также она может появиться раньше других симптомов инфекции SARS-CoV-2. Аносмию можно рассматривать как клинический критерий диагностики, когда лабораторные тесты недоступны. Аносмия может проявляться как при COVID-19, так и при аллергическом рините (АР), что может затруднять дифференциацию происхождения симптомов и постановку диагноза.

Результаты исследований указывают на то, что АР не является отягчающим фактором по отношению к COVID-19, а сопутствующая патология АР не влияет на уменьшение обоняния у пациентов с COVID-19. Пациентам с АР рекомендуется использовать антигистаминные препараты и интраназальные кортикостероиды для купирования симптомов. Контроль симптомов АР может способствовать предотвращению распространения инфекции SARS-CoV-2. Можно предположить, что как местное, так и пероральное применение кортикостероидных препаратов при COVID-19 можно считать эффективным при лечении обонятельной дисфункции. Для восстановления обоняния у пациентов с АР и COVID-19 специалисты рекомендуют регулярно проводить обонятельные тренировки, которые на данный момент являются единственной современной научно обоснованной терапией для восстановления поствирусной потери обоняния.

Использование хирургических масок и респираторов во время пандемии направлено на минимизацию воздействия аллергенов и вируса SARS-CoV-2. Однако длительное ношение масок и респираторов еще больше затрудняет дыхание при рините, вызванном АР или COVID-19, что снижает качество жизни и ухудшает клиническую картину.

Хроника

Здоровье иммунной системы: путь, который еще не пройден

Резюме

Материалы данного сайта распространяются на условиях лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License («Атрибуция - Всемирная»)


Журналы «ГЭОТАР-Медиа»