Введение. С начала пандемии COVID-19 - заболевания, вызываемого новым коронавирусом SARS-CoV-2, основное внимание специалистов в области биомедицины было сфокусировано на создании профилактических вакцин. При этом существует огромная и неудовлетворенная потребность в специфичных лекарственных препаратах для лечения COVID-19. В статье описана разработка и доклинические исследования оригинального противовирусного препарата, действующего на основе механизма РНК-интерференции.

Цель исследования - оценка противовирусного эффекта миРНК против SARS-CoV-2 in vitro и in vivo, а также разработка лекарственного препарата на их основе.

Материал и методы. Для проектирования молекул миРНК были использованы методы биоинформатики и специализированное программное обеспечение. Спроектировано более 15 000 вариантов миРНК, из них для синтеза было отобрано 13 вариантов.

Для скрининга их активности в экспериментах in vitro использована система, основанная на векторах, экспрессирующих гены SARS-CoV-2, которые были слиты с репортерным геном люциферазы светлячка. Дополнительно использовали модель инфекции SARS-CoV-2 in vitro. Для повышения стабильности наиболее активный вариант миРНК - siR-7 был модифицирован с помощью закрытых нуклеиновых кислот (LNA); модифицированный вариант обозначен как siR-7-EM. Для внутриклеточной доставки миРНК использован дендримерный пептид KK-46. Молекулы миРНК смешивали с этим пептидом в соотношении 1/20 по массе, после чего полученный комплекс (siR-7-EM/KK-46) добавляли в культуру инфицированных клеток или использовали для ингаляций в модели инфекции сирийских хомячков.

Результаты. В результате скрининга библиотеки спроектированных молекул миРНК был идентифицирован наиболее активный вариант - siR-7, мишенью для которого является участок генома вируса, кодирующий жизненно важный фермент - РНК-зависимую РНК-полимеразу (RdRp). Мы показали, что LNA-модификация этой миРНК значительно увеличивает устойчивость молекул к деградации, а также усиливает ее противовирусную активность in vitro. В экспериментах in vivo продемонстрировано, что ингаляционное введение комплекса siR-7-EM/KK-46 инфицированным сирийским хомячкам приводит к уменьшению вирусной нагрузки в легких, а также к снижению вирус-индуцированного воспаления.

Заключение. Предложена терапевтическая стратегия для лечения COVID-19, основанная на ингаляционном введении комплекса молекул миРНК, подавляющих образование фермента RdRp, необходимого для репликации вируса, и пептида-носителя. Антивирусная активность комплекса продемонстрирована в экспериментальных моделях in vitro и in vivo. На основе комплекса siR-7-EM/KK-46 разработан МИР 19^® - первый в мире лекарственный препарат на основе миРНК, специфически подавляющий репликацию SARS-CoV-2.

Введение. В связи с угрозой коронавирусной инфекции возросла потребность в разработке принципиально новых противовирусных препаратов, обладающих повышенной эффективностью и доступностью в применении. Одно из перспективных направлений создания таких препаратов - подавление вирусной репродукции с помощью ингибиторов на основе молекул малых интерферирующих РНК (миРНК).

Цель работы - изучение безопасности препарата МИР 19^® (siCoV/KK46) при одно- и многократном приеме, а также изучение эффективности и выбор дозировки препарата МИР 19^® при лечении госпитализированных пациентов с инфекцией, вызванной SARS-CoV-2 (COVID-19), которым не требуется лечение в отделении реанимации и интенсивной терапии.

Материал и методы. На I фазе клинического исследования была изучена безопас­ность препарата МИР 19^® при одно- и многократном использовании. В качестве критериев безопасности оценивали частоту развития любых нежелательных явлений (НЯ) и серьезных нежелательных явлений (СНЯ) по данным жалоб, результатов физикального осмотра, результатов оценки частоты сердечных сокращений и артериального давления, частоты дыхательных движений (ЧДД) и температуры тела, а также по данным лабораторного мониторинга показателей клинического и биохимического анализа крови, общего анализа мочи. Также для регистрации и мониторинга НЯ использовали инструментальные методы исследования: ЭКГ и спирографию. Далее было проведено открытое рандомизированное контролируемое многоцентровое исследование II фазы (NCT05184127), оценивающее безопасность и эффективность ингаляционного препарата МИР 19^® (3,7 и 11,1 мг/сут: низкая и высокая доза соответственно) в сравнении со стандартным лечением этиотропными препаратами (группа сравнения) у пациентов с коронавирусной инфекцией/COVID-19, которым на момент включения в исследование не требовалось проведения искусственной вентиляции легких (ИВЛ) (n = 52 для каждой группы).

Результаты. По итогу I фазы клинического исследования можно сделать вывод о безопасности одно- и многократного использования препарата МИР 19^® у здоровых добровольцев. II фаза клинических исследований показала, что пациенты из группы реципиентов низкой дозы достигли первичной конечной точки, определяемой одновременным достижением снижения температуры, нормализации ЧДД, уменьшения кашля и насыщения крови кислородом > 95 % в течение 48 ч, значительно раньше (медиана - 6 дней), чем пациенты из группы сравнения (медиана - 8 дней). В группе реципиентов высокой дозы не наблюдалось большей клинической эффективности по отношению к группе сравнения. Ни одно НЯ не было связано с приемом МИР 19^®.

Заключение. МИР 19^®, этиотропный препарат, специфически подавляющий репликацию SARS-CoV-2, является безопасным при одно- и многократном использовании, хорошо переносится и значительно сокращает время до клинического улучшения у пациентов, госпитализированных с COVID-19 средней степени тяжести, по сравнению со стандартной терапией в рандомизированном контролируемом исследовании. В настоящее время препарат МИР 19^® зарегистрирован (регистрационное удостоверение ЛП-007720), включен во Временные методические рекомендации Минздрава России "Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19)" и активно применяется в клинической практике.

Введение. Коронавирусная инфекция, вызванная первыми разновидностями вируса SARS-CoV-2, не приводила к обострению туберкулеза у детей. В научной литературе нам не встретилось исследований, характеризующих Т- и В-клеточный специфический иммунный ответ к SARS-CoV-2 у детей и подростков, больных туберкулезом.

Цель исследования - изучение выраженности и длительности клеточного и гуморального иммунного ответа на SARS-CoV-2 у детей и подростков, больных туберкулезом органов дыхания, переболевших или имевших контакт с больными коронавирусной инфекцией, вызванной штаммом омикрон.

Материал и методы. Проведено когортное проспективное исследование с участием 34 пациентов в возрасте от 2 до 17 лет с различными формами туберкулеза органов дыхания, находившихся на лечении в детско-подростковом отделе ФГБНУ "ЦНИИТ" Минобрнауки России, переболевших или имевших контакт с больными новой коронавирусной инфекцией (штамм омикрон). Лабораторная диагностика коронавирусной инфекции у пациентов с клиническими проявлениями острой респираторной вирусной инфекции (ОРВИ) проводилась по положительному результату исследования мазков из носо- и ротоглотки на РНК SARS-CoV-2 (штамм омикрон). Состояние клеточного иммунитета оценивали при помощи теста T-SPOT.COVID (Oxford Immunotec, Великобритания) на панели А (COV-A) (Spike antigens) и панели В (COV-B) (Nucleocapsid antigens). Определяли специфические IgM- и IgG-антитела к нуклеокапсидному белку (ARCHITECT, Abbott, США) с оценкой коэффициента позитивности (КП). Результаты качественных признаков выражены в абсолютных числах с указанием долей (%), расчет статистической значимости проведен с помощью критерия χ² Пирсона. Сопоставление показателей Т-клеточного и гуморального ответов через 1 и 3 мес проводили с использованием Т-критерия Вилкоксона.

Результаты. Коронавирусная инфекция во всех случаях протекала в легкой форме, клиническая картина ОРВИ наблюдалась в 67,6 % (23/34) случаев, а РНК SARS-CoV-2 обнаружена лишь у 74 % пациентов с клиническими проявлениями заболевания. IgМ-антитела отсутствовали у всех обследованных пациентов уже через 1 мес от начала заболевания/нахождения в контакте, IgG-антитела выявлены у 76,5 % через 1 мес и у 53 % пациентов через 3 мес (р < 0,01). Положительные результаты оценки специфического Т-клеточного ответа получены у 97,1 % через 1 мес и у 79,4 % пациентов через 3 мес. При этом показатели специфического Т-клеточного иммунитета (панель А и панель В) статистически значимо снижались к 3 мес исследования (р < 0,01). Тенденции изменения показателей Т-клеточного иммунитета (панель А и панель В) в группах пациентов с клиническими проявлениями заболевания и без таковых были различные. Если в группе с клиническими проявлениями количество спотов статистически значимо не менялось при сравнении результатов через 1 и 3 мес наблюдения, то в группе без клинических признаков отмечено их статистически значимое снижение к 3-му месяцу по панели В при отсутствии значимой динамики по панели А.

Заключение. В проведенном исследовании коронавирусная инфекция у больных туберкулезом детей и подростков во всех случаях протекала в легкой форме, характеризовалась наличием выраженного специфического Т-клеточного ответа у 97,1 % и продукцией специфических IgG-антител у 76,5 % пациентов через 1 мес исследования с последующим статистически значимым снижением показателей к 3 мес наблюдения - 79,4 и 53 % соответственно.

Введение. Участие цитокинов в реакциях адаптации и формировании коморбидной соматической патологии на различных стадиях стрессовой реакции не вызывает сомнений. Длительность сохранения цитокинового дисбаланса может служить маркером оценки состояния резервных механизмов гомеостаза у военнослужащих - участников боевых действий (БД), страдающих коморбидной патологией.

Цель исследования - изучение соотношения про- и противовоспалительных цитокинов при хронической стресс-индуцированной коморбидной патологии у комбатантов в отдаленном периоде наблюдения.

Материал и методы. Обследованы 100 военнослужащих запаса, разделенных на 2 группы: 1-я группа - военнослужащие с артериальной гипертензией, впервые дебютировавшей во время участия в БД на территории Чеченской Республики (1994-2001 гг.), 2-я группа - военнослужащие, имеющие артериальную гипертензию в анамнезе, но не принимавшие участия в БД. Оценивали содержание цитокинов: интерлейкинов (ИЛ)-4, -6, фактора некроза опухоли (ФНО)α, интерферонов (ИФН)-α и -γ в сыворотке крови при различных вариантах течения коморбидной стресс-индуцированной патологии в отдаленном периоде наблюдения.

Результаты. В отдаленном периоде наблюдения у офицеров запаса, страдающих стресс-индуцированной коморбидной патологией, сохраняется цитокиновый дисбаланс, который проявляется увеличением содержания ИЛ-6, ФНОα и ИФН-α.

Заключение. У офицеров запаса, страдающих стресс-индуцированной сердечно-сосудистой патологией с разными вариантами коморбидности, в отдаленном периоде наблюдения сохраняется превалирование активного провоспалительного цитокинового компонента. Отсутствие адекватного переключения в сторону противоспалительного ответа можно рассматривать как маркер длительно существующей дезадаптации.

Введение. Развитие аутоиммунного тиреоидита (АИТ) определяется дефектами иммунной системы у индивидуумов с генетической предрасположенностью к этому заболеванию.

Цели - изучение уровней аутоантител, как органоспецифических - антитела к тиреопероксидазе (Aт-ТПO) и антитела к тиреоглобулину (Ат-ТГ), так и органонеспецифических - антитела к нативной ДНК (Ат-нДНК) и антитела к денатурированной ДНК (Ат-дДНК), у пациентов с различными формами АИТ; анализ корреляционной связи между уровнем Ат-нДНК и уровнем Ат-ТПО в зависимости от функционального состояния щитовидной железы.

Материал и методы. Проведено нерандомизированное исследование, в ходе которого проводилось комплексное обследование сыворотки крови 58 пациентов с АИТ (24 мужчины и 34 женщины в возрасте от 18 до 64 лет). Группу сравнения составили 32 человека без патологий щитовидной железы и других аутоиммунных заболеваний, 14 мужчин и 18 женщин в возрасте от 20 до 65 лет. Пациенты были разделены на 2 группы: группа пациентов с АИТ с субклиническим течением заболевания (субклинический гипотиреоз) и группа пациентов с манифестной формой заболевания. У пациентов с субклинической формой заболевания отмечались отдельные слабовыраженные проявления гипотиреоза. У всех участников исследования определяли уровень Ат-нДНК и Ат-дДНК в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа на автоматическом анализаторе "EL 808 Bio-Tek Instruments, Inc." (Diagnostic Products Corporation, CIIIA).

Результаты. Анализ уровня антител к ДНК показал их более высокие уровни у пациентов по сравнению со значениями в группе сравнения. Медиана уровня Ат-нДНК у пациентов с АИТ составила 4,4 (2,3; 9,9) Ед/мл, что было статистически значимо по по отношению к показателю группы сравнения, который составил 2,6 (1,5; 3,6) Ед/мл (р < 0,001). В то же время не выявлено достоверных межгрупповых отличий по уровням AT-дДНК у пациентов с различными формами гипотиреоза.

Заключение. Изучение содержания IgG-Aт к ДНК в сыворотке крови пациентов с АИТ в зависимости от функционального состояния щитовидной железы и уровня Ат-ТПО может иметь прогностическое значение и использоваться в качестве дополнительного критерия развития аутоиммунного процесса. По результатам нашего исследования уровень Ат-нДНК в сыворотке крови пациентов с АИТ положительно коррелирует с уровнем Ат-ТПО.

Мини-обзор посвящен ответу на вопрос "Можно ли комбинировать пассивную иммунотерапию лекарственным препаратом паливизумаб и плановую вакцинацию у детей раннего возраста, включая недоношенных?". Данный вопрос все чаще приходит от неонатологов и педиатров, а обращен он к клиническим иммунологам и фармакологам. Паливизумаб - гуманизированное терапевтическое моноклональное антитело, использующееся для профилактики респираторно-синцитиальной вирусной (РСВ) инфекции. Препарат относится к классу таргетных лекарств, что обозначает его высокую селективность в отношении только РСВ и только в отношении одного белка этого вируса, обеспечивающего вирулентность и отвечающего за слияние с клеткой зараженного хозяина (F-белок). Прямых указаний на возможность комбинирования анти-РСВ-профилактики и вакцинации в инструкции по медицинскому применению паливизумаба нет. Однако, основываясь на точно описанном механизме действия и по всем канонам клинической иммунологии и фармакологии, терапия паливизумабом не может изменить эффективность и безопасность вакцинации. За более чем 25-летнюю историю клинического применения паливизумаба был накоплен большой опыт, который отразился в международных и отечественных клинических рекомендациях. Финальный вывод этих рекомендаций на сегодняшний день: комбинация оправдана и рекомендована.

Введение. Высокая степень гиперчувствительности к яду пчелы медоносной, высокие показатели анафилаксии при ужалении пчелой (в РФ до 6,4 %), отсутствие в широкой аллергологической практике лечебных препаратов, позволяющих осуществлять проведение единственно эффективного и надежного метода лечения и профилактики - аллерген-специфической иммунотерапии - больным инсектной аллергией к яду пчел, позволяющей снизить или полностью исключить риск развития реакций анафилактического типа, в том числе анафилактического шока с летальным исходом, свидетельствуют об актуальности проблемы создания отечественных лечебных препаратов.

Цели работы - разработка технологии получения и экспериментальная оценка аллергоида из пчелиного яда.

Материал и методы. Провели очистку пчелиного яда-сырца, препаративную и аналитическую хроматографию и электрофорез в полиакриламидном геле. Для анализа примесей применяли газовую хроматографию. Провели конкурентный иммуноферментный анализ (ИФА) для определения специфических циркулирующих IgE-антител у экспериментальных животных и человека.

Результаты. Был изготовлен аллергоид из очищенного пчелиного яда. Анализ связывания очищенного пчелиного яда, аллергена и аллергоида при конкуренции с биотинилированным аллергеном пчелиного яда в конкурентном реверсивном ИФА показал, что в результате обработки формальдегидом аллергоид утратил большее количество сайтов связывания для специфических IgЕ-антител к белкам пчелиного яда. Оценка иммуногенности аллергоида, проведенная с помощью ИФА, показала, что в сыворотках 104 иммунизированных самцов мышей спустя 1, 2, 3 и 4 нед после начала иммунизации животных определяются циркулирующие специфические IgG-антитела и наблюдается постепенный рост их уровня.

Заключение. Разработанный аллергоид обладает высокой способностью к индукции образования специфических IgG-антител, что свидетельствует о возможности его практического применения для проведения аллерген-специфической иммунотерапии.

Введение. Фармакологическое действие лекарственных препаратов иммуноглобулина человека (ИГЧ) антирезус Rh_о(D) характеризуется специфической активностью - способностью анти-D-антител (Ат) IgG к избирательному блокированию нежелательного иммунного ответа на антиген D резус-положительных эритроцитов плода, попавших в кровоток матери, а также дозой вводимого препарата. Дозу препарата рассчитывают исходя из количественного содержания анти-D-IgG-Ат, выраженного в международных единицах (МЕ) или в микрограммах (мкг). Зарубежные производители содержание анти-D-IgG-Ат в препаратах количественно определяют методами гемагглютинации, проточной цитофлуориметрии и иммуноферментного анализа. Результат выражают в МЕ или мкг (5 МЕ = 1 мкг) по отношению к международному стандартному образцу (МСО) анти-D-иммуноглобулина или стандартному образцу (СО), откалиброванному относительно МСО. Отечественные производители определяли содержание анти-D-IgG-Ат в титрах с помощью непрямой пробы Кумбса без использования СО. Отсутствие национального СО, аттестованного в МЕ (или в мкг), не позволяло отечественным производителям препаратов ИГЧ антирезус Rh_о(D) установить норму содержания анти-D-IgG-Ат в препарате в МЕ (или мкг) для расчета дозы введения в соответствии с международными требованиями к его клиническому применению, что могло стать причиной отсутствия требуемого терапевтического эффекта, гемолиза эритроцитов или развития других нежелательных реакций.

Цель исследования - разработать фармакопейный стандартный образец (ФСО) для количественного определения активности ИГЧ антирезус Rh_o(D).

Материал и методы. В работе использовали образцы кандидата в ФСО, МСО анти-D-иммуноглобулина, СО Европейской фармакопеи (ЕФ) с содержанием анти-D-IgG-Ат, определяемых в реакции агглютинации (1 : 8), эритроциты человека фенотипов R1R1 и R2R2, rr. Для установления аттестуемой характеристики ФСО использовали иммуноферментный анализ и метод гемагглютинации в геле.

Результаты. Разработан национальный ФСО 3.1.000452 Государственной фармакопеи Российской Федерации (ГФ РФ) "Стандартный образец для определения активности ИГЧ антирезус Rh_o(D) (содержания анти-D-антител IgG)" cо значением активности 516 МЕ/мл (103 мкг/мл) и расширенной неопределенностью: ±100 МЕ/мл (±20 мкг/мл) (коэффициент охвата 2, доверительный уровень 95%). Установлено, что доступный валидированный иммуноферментный метод с применением эритроцитов фенотипов R1R1 или R2R2 для самостоятельного приготовления иммуносорбента обеспечивает точное количественное определение анти-D-IgG-Ат в ФСО ГФ РФ. Показано, что применение иммуноферментного анализа и метода гемагглютинации в геле для установления аттестуемой характеристики ФСО ГФ РФ обеспечивает прослеживаемость и сопоставимость получаемых результатов.

Заключение. Разработанный ФСО включен в реестр ФСО биологического происхождения ГФ РФ, а также внедрен в нормативную документацию на препарат, производимый в РФ (МНН "Иммуноглобулин человека антирезус Rh_o(D)"). Применение ФСО позволяет установить значения содержания анти-D-IgG-Ат в препарате в МЕ/мл (или в мкг/мл), что способствует адекватному расчету дозы введения при его клиническом применении для специфической перинатальной профилактики резус-иммунизации женщин с резус-отрицательной принадлежностью крови.

Распространенность аллергических заболеваний с каждым годом растет. Жители Центрального округа Российской Федерации наиболее часто страдают от аллергии на домашнюю кошку: триггерные белки содержатся в перхоти и биологических жидкостях животного. Сегодня известно о 8 аллергенах домашней кошки, однако в практике для диагностики IgE-ассоциированной гиперчувствительности используют нативный экстракт шерсти, в котором представлены практически все аллергенные молекулы. Для персонализированного подхода в лечении необходима оценка индивидуального молекулярно-аллергологического профиля пациентов. Мы провели анализ исследований, в которых изучались молекулярные особенности аллергенов кошки и обобщили наиболее ценные и клинически значимые данные. На основании проведенного обзора литературы мы пришли к выводу, что необходимо продолжать изучение белков, особенно минорных, поскольку информации об их аллергической активности и клинических проявлениях недостаточно. Наиболее изучен аллерген Fel d 1, сенсибилизация к которому наиболее часто определяется у пациентов. Специфичность определения причинно-значимого аллергена кошки при использовании нативных аллергенов низка, что в свою очередь снижает эффективность проводимого лечения. Для более точного определения показаний к аллерген-специфической иммунотерапии, которая находится в стадии активной разработки, важна оценка молекулярно-аллергологического профиля пациентов и выявление аллергена, с которым ассоциирована клиническая картина сенсибилизации.

Хронический риносинусит (ХРС) представляет собой многообразную по этиологии и патогенезу группу заболеваний, проявляющуюся стойким воспалением слизистой оболочки носа и околоносовых пазух (ОНП), и подразделяется на ХРС без полипов, который составляет более 2/3 случаев, и полипозный риносинусит (ПРС). Патогистологически ПРС характеризуется инфильтрацией слизистой оболочки ОНП воспалительными клетками (эозинофилами, лимфоцитами, плазмацитами, нейтрофилами и т.д.), модификациями дифференцировки эпителиальных клеток и ремоделированием тканей. Последнее включает утолщение базальной мембраны, деградацию эпителия, отек и фиброз подслизистого слоя с накоплением внеклеточного матрикса (ВКМ), базальноклеточную дисплазию. Поляризованные эпителиальные клетки трансформируются в мезенхимальные формы с потерей типичной морфологии. Эти клетки отличаются резистентностью к апоптозу, повышенной инвазивностью и способностью к миграции, потерей полярности, адгезивности, уменьшением плотности межклеточных контактов, а также гиперпродукцией белков ВКМ, накопление которых является критическим параметром процесса, ведущего к патологической реконструкции слизистой оболочки ОНП. Металлопротеиназы (ММР), активация и биологическая активность которых регулируются тканевыми ингибиторами металлопротеиназ (TIMPs), являются основными протеолитическими ферментами, отвечающими за ремоделирование ВКМ. Баланс между ММPs и TIMPs определяет процессы продукции и деградации отдельных компонентов ВКМ, влияя на патогенез воспаления.

Обзор посвящен рассмотрению роли ММPs в процессах ремоделирования слизистой оболочки верхних дыхательных путей при ХРС. Обобщены экспериментальные данные о молекулярных и клеточных механизмах действия ММPs. Систематизация этих данных позволит выявить оптимальные биомишени для разработки средств терапии ХРС.