Введение. К основным способам, с помощью которых антитела реализуют свою защитную функцию, относятся активация и усиление компонентов врожденной иммунной защиты - комплемента и фагоцитов. Поэтому изучение врожденного иммунитета важно для понимания патогенеза и разработки новых подходов к терапии первичных иммунодефицитов (ПИД) с преимущественным нарушением синтеза антител.

Цель исследования - оценить функциональные показатели системы врожденного иммунитета у пациентов с X-сцепленной агаммаглобулинемией (XLA) и общей вариабельной иммунной недостаточностью (ОВИН), в том числе у пациентов с различной эффективностью заместительной терапии внутривенными иммуноглобулинами (ВВИГ).

Материал и методы. Обследовано 38 пациентов с ОВИН и 9 пациентов с XLA. Группу сравнения составили 34 практически здоровых донора. Поглощение и внутриклеточный киллинг флуоресцеин-меченного золотистого стафилококка, экспрессию Fcγ-рецепторов (CD16, CD32, CD64) и рецепторов комплемента (CD35, CD11b, CD11c) нейтрофилами и моноцитами крови исследовали с помощью проточной цитометрии. Продукцию про- и противовоспалительных цитокинов ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10 и фактора некроза опухолей (ФНО) мононуклеарными клетками крови исследовали с помощью иммуноферментного анализа.

Результаты. У пациентов с ОВИН обнаружена сниженная экспрессия рецепторов комплемента нейтрофилами на фоне нормальной поглотительной и бактерицидной активности и нормальных показателей продукции цитокинов. В подгруппе пациентов с ОВИН, требующих дополнительной регулярной антибиотикотерапии на фоне адекватной заместительной терапии ВВИГ, снижение экспрессии рецепторов комплемента нейтрофилами было более выражено, чем у пациентов, которым антибиотикотерапия не требовалась. У пациентов с XLA снижена экспрессия как рецепторов комплемента, так и рецептора CD16 (FcγRIII) нейтрофилами, что коррелирует со сниженной поглотительной способностью нейтрофилов по отношению к стафилококку при различных условиях опсонизации. При этом внутриклеточная бактерицидность у пациентов с XLA сохранена, а продукция ИЛ-1β, ИЛ-6 и ИЛ-10 мононуклеарными клетками крови при стимуляции липополисахаридом - повышена по сравнению с группой доноров.

Заключение. Выявленные нарушения врожденного иммунитета могут вносить вклад в снижение противоинфекционной резистентности при ОВИН и XLA.

Введение. В процессах активации В-лимфоцита важную роль играет взаимодействие рецептора CD40, экспрессированного на поверхности В-лимфоцита, и его лиганда CD40L, расположенного на поверхности Т-хелпера. CD40L в наибольшей степени проявляет свою стимулирующую активность, когда находится в тримеризованном состоянии, которое обеспечивается при экспрессии белка на поверхностной мембране. Для создания бесфидерной системы стимуляции В-лимфоцитов необходимо получить рекомбинантный мультимеризованный CD40L.

Цель исследования - получить растворимый олигомеризованный белок CD40L человека, пригодный для олигоклональной стимуляции В-лимфоцитов in vitro.

Материал и методы. Методами молекулярного клонирования были получены две генетические конструкции, кодирующие рецепторную часть молекулы CD40L, слитую с двумя типами мультимеризующих последовательностей. В одном случае для этого использовался Fc-фрагмент IgG1 человека, соединенный с тримеризующим изолейциновым зиппером. Эта конструкция получила название LIF. В другом случае для мультимеризации применялась последовательность коллагеноподобного домена адипонектина. Эта конструкция получила название LA. Плазмиды, кодирующие LIF и LA, были трансфецированы в клетки HEK293 и наработаны соответствующие растворимые рекомбинантные белки. Молекулярную массу белков определяли с помощью иммунопреципитации с последующим вестерн-блоттингом. Функциональную активность белков LIF и LA определяли в условиях бесфидерной стимуляции В-лимфоцитов in vitro.

Результаты. При временной трансфекции в клетки HEK293 наблюдалась внутриклеточная экспрессия белков LIF и LA, а также секреция этих белков в культуральный супернатант. После иммунопреципитации и последующего вестерн-блоттинга препарат LIF мигрировал при электрофорезе полосой ~ 55 кДа в редуцирующих и 100 кДа в нередуцирующих условиях. В аналогичных условиях препарат LA мигрировал полосами, соответствующими 30 и 85 кДа. В присутствии экзогенного интерлейкина (ИЛ)-21 препарат LA обеспечивал пролиферацию В-лимфоцитов, сравнимую с наблюдаемой в фидерной системе. Индекс пролиферации В-лимфоцитов под действием ИЛ-21 и LIF был в 3 раза ниже, чем в фидерной системе. Стимуляция с помощью LA приводила к образованию большего количества плазмабластов, чем с применением LIF. Кроме того, LA обеспечивал дифференцировку части стимулированных В-лимфоцитов в плазматические клетки. На 20-й день стимуляции В-лимфоцитов в бесфидерной системе с помощью LA в супернатантах наблюдалась секреция IgM и IgG даже в культурах, изначально содержавших единичные В-клетки.

Заключение. Рекомбинантные мультимеризованные белки, содержащие рецепторный домен CD40L, обладают хорошей стимулирующей активностью в отношении В-лимфоцитов периферической крови. CD40L, мультимеризованный за счет слияния с коллагеноподобным доменом адипонектина, проявляет более высокую физиологическую активность по сравнению с CD40L, мультимеризованным с помощью Fc-фрагмента IgG и тримеризующего изолейцинового зиппера. Слитый белок адипонектин-CD40L можно использовать для бесфидерной стимуляции единичных В-клеток или олигоклональных популяций В-лимфоцитов.

Введение. В связи с активным развитием новых направлений в клеточной иммунотерапии остро встает вопрос подходов для проведения доклинических исследований безопасности и эффективности. Оптимальным для решения данной задачи является использование опухолевых ксенотрансплантатов для имитации опухолевого роста в организме с поддержанием гомеостаза, метаболизма и возможных механизмов толерантности к терапевтическому агенту. Эффективность такого подхода к анализу эффективности клеточных препаратов привела к следующему шагу: необходимости стандартизации методических подходов по подбору опухолевых клеточных линий человека и линий иммунодефицитных мышей.

Цель исследования - оценка эффективности формирования ксенотрансплантата у иммунодефицитных мышей различных линий для получения оптимальных моделей доклинических исследований препаратов модифицированных клеток человека.

Материал и методы. Для отработки моделей использовали мышей линий NRG (NOD.Cg-Rag1tm1Mom Il2rgtm1Wjl/SzJ) и SCID, а также линии опухолевых клеток человека SW620 (аденокарцинома толстой кишки человека), U-87MG (эпителиальная опухоль головного мозга человека), SK-MEL-37 (меланома), NW-MEL-38 (меланома) и S6 (меланома). Экспериментальным животным подкожно в область правой лопатки вводили 100 мкл суспензии опухолевых клеток в дозах 1, 3 и 5 млн/мышь с последующим измерением размера опухолевого узла.

Результаты. Была проведена оценка эффективности формирования ксенотрансплантатов различных клеточных линий человека в разных линиях мышей с иммунодефицитом. Показано, что линия мышей NRG по сравнению с мышами SCID обладает более высокой способностью по приживлению опухолевых клеточных линий, а сами клеточные линии отличаются по уровням экспрессии опухоль-ассоциированных белков и формируют ксенотрансплантат с разной эффективностью. Оптимальным оказалось использование мышей линии NRG и клеточной линии SK-MEL-37 с высоким уровнем экспрессии антигенов GD2, NY-ESO-1 и MAGE-A4. Эксперимент по терапии солидной опухоли, полученной после трансплантации животным опухолевых клеточных линий человека, с помощью анти-GD2-CAR-T-клеток показал эффективность в снижении размеров опухолевого узла при внутриопухолевом введении модифицированных клеток человека.

Заключение. Полученные результаты подтверждают эффективность использования ксенотрансплантатов для оценки эффективности противоопухолевого иммунного ответа препаратов модифицированных клеток в условиях in vivo.

Введение. Подавляющее большинство аллерговакцин в своем составе содержат природные аллергены, так как они изготавливаются из экстрактов природного сырья. Это накладывает ограничения на их использование: часто возникают нежелательные эффекты, а также такие вакцины не применяют для профилактики у здоровых лиц и не используют в период беременности и лактации, чтобы избежать сенсибилизации. Недавно была создана рекомбинантная гипоаллергенная вакцина ABP-Vax для лечения и профилактики аллергии на пыльцу березы и перекрестные аллергены. Благодаря своим гипоаллергенным свойствам эта вакцина имеет профилактический потенциал применения, а также потенциально может использоваться в период беременности.

Цель данной работы - экспериментальное изучение влияния аллерговакцины ABP-Vax на показатели генеративной функции (фертильности) самок крыс, а также на пре- и постнатальное развитие их потомства.

Материал и методы. Самкам крыс вводили многократно подкожно аллерговакцину ABP-Vax до спаривания и во время беременности. Курс инъекций охватывал период до зачатия и продолжался до периода лактации. Самок, получавших инъекции, спаривали с интактными самцами и определяли индексы генеративной функции самок, а также показатели эмбриотоксического действия аллерговакцины в пре- и постнатальный период.

Результаты. Анализ показателей пренатального развития потомства не выявил никаких признаков эмбриотоксического действия аллерговакцины. В части исследования по изучению постнатального развития потомства также не установлено влияния вакцины на физическое развитие потомства. Показатели репродуктивной функции экспериментальных животных имели нормальный уровень.

Заключение. Не установлено негативного влияния аллерговакцины ABP-Vax на генеративную функцию самок крыс, а также на пре- и постнатальное развитие их потомства. Результаты исследования подтверждают предположение о возможности применения ABP-Vax в период до зачатия, во время беременности и лактации.

Введение. Полипозный риносинусит (ПРС) и бронхиальная астма (БА) являются гетерогенными воспалительными заболеваниями дыхательных путей. Несмотря на то, что БА и ПРС в настоящее время рассматриваются как отдельные заболевания, они часто сочетаются у одного пациента и, возможно, оказывают взаимное влияние друг на друга. В связи с недостаточной эффективностью существующей терапии тяжелых форм БА, особенно при сочетании с ПРС, актуальной задачей является поиск новых подходов к диагностике и лечению этих заболеваний, что невозможно без детального понимания молекулярных и клеточных механизмов их патогенеза.

Цель исследования - изучение особенностей течения ПРС у пациентов с тяжелой БА.

Материал и методы. 96 участников исследования были распределены на 4 группы, по 24 в каждой: I группа - пациенты с гипертрофическим ринитом без БА и атопии (группа сравнения), II группа - пациенты с ПРС, III группа - пациенты с ПРС в сочетании с аллергической БА, IV группа - пациенты с ПРС в сочетании с неаллергической БА. С помощью иммуноферментного анализа определяли концентрацию цитокинов в супернатантах мононуклеаров периферической крови (МНПК) и в гомогенатах ткани полипа. С помощью гистологического анализа оценена степень инфильтрации ткани полипа провоспалительными клетками. Методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (РВ-ПЦР) оценивали уровни экспрессии генов цитокинов в лизатах МНПК и ткани полипов. Эпителиальные клетки ткани полипа с получены помощью проточной сортировки.

Результаты. Неаллергическая БА в сочетании с ПРС характеризуется более тяжелым и менее контролируемым течением. ПРС сопровождается прежде всего локальным, а не системным воспалением. Неаллергическая БА приводит к агрессивному и рецидивирующему течению ПРС, при котором в ткани полипа развивается воспаление с привлечением эозинофилов и нейтрофилов. Аллергическая БА в сочетании с ПРС ассоциирована с супрессией Th1- и активацией Th2-иммунного ответа, а также с повышенной экспрессией генов IL25 и TSLP в эпителиальных клетках полипов. В то же время неаллергическая БА в сочетании с ПРС характеризовалась активацией Th17-иммунного ответа и высокой экспрессией IL25, TSLP, IL33 и IL37.

Заключение. БА и ПРС являются гетерогенными заболеваниями, включающими множество фенотипов, которые развиваются по различным молекулярным механизмам. В нашем исследовании было показано взаимное влияние ПРС и БА. Бронхиальная астма, прежде всего неаллергическая, является фактором более агрессивного течения ПРС.

Введение. Выделяют два фенотипа старения: физиологический (успешный) и патологический. Последний крайне нежелателен, сопровождается развитием возраст-ассоциированных патологий. В последние годы внимание ученых сосредоточено на исследовании роли хронического воспаления в формировании старения.

Цель исследования - изучение роли инфламмасомного комплекса NLRP3 (Nod-like receptor 3), CASP1 (Caspase-1), цитокинов ИЛ-1β и ИЛ-10 в формировании патологического фенотипа старения.

Материал и методы. В основную группу вошли 56 долгожителей. Группу сравнения составили 25 здоровых доноров. Из клеток периферической крови выделяли нуклеиновые кислоты и методом полимеразной цепной реакции в реальном времени определяли уровень экспрессии генов NLRP3, CASP1, IL1B, IL10. Концентрацию ИЛ-1β и ИЛ-10 в сыворотке определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа.

Результаты. Показана гиперэкспрессия генов инфламмасомного комплекса NLRP3 и CASP1 и провоспалительного цитокина IL1B, а также повышение концентрации ИЛ-1β в основной группе по отношению к группе сравнения. Концентрация противовоспалительного цитокина ИЛ-10 в основной группе была снижена. Впервые у долгожителей с высоким индексом коморбидности выявлено увеличение экспрессии генов NLRP3 и CASP1, IL1B, IL10 и повышение концентрации цитокинов ИЛ-1β и ИЛ-10 по сравнению с долгожителями с низким индексом коморбидности.

Введение. Патогенез акне, одного из наиболее распространенных заболеваний кожи, не до конца понятен и сложен, и воспалительная реакция является одной из преобладающих в развитии этого дерматоза. Недавними исследованиями установлено, что путь TLR4/NF-κB/p38 MAPK и цитокины ИЛ-6, ИЛ-1β и ФНОα имеют ведущее значение в воспалительной реакции при акне. Результаты исследований показывают участие транскрипционных факторов, включая NF-κB, в патогенезе ряда заболеваний, в том числе акне, однако эти механизмы до настоящего времени не установлены.

Цель - определение и анализ вариантов нуклеотидной последовательности генов семейства транскрипционных факторов NF-κB RNF31, CARD14, CARD11, SETBP1, BACH2 у пациентов с акне тяжелого течения.

Материал и методы. Для достижения поставленной цели в 2017-2020 гг. было проведено проспективное открытое нерандомизированное одноцентровое сравнительное исследование. Под нашим наблюдением в клинических условиях на кафедре кожных болезней и косметологии ФДПО ФГАОУ ВО "РНИМУ им. Н.И. Пирогова" Минздрава России находились 70 человек в возрасте от 15 до 46 лет (медиана - 22,1 [10,2; 25,4] года). Молекулярно-генетическая диагностика была проведена всем 50 пациентам основной группы и 20 условно здоровым участникам группы сравнения методом высокопроизводительного секвенирования ДНК - секвенирование "нового поколения" (next-generation sequencing, NGS) в лаборатории молекулярной биологии ФГБУ "НМИЦ ДГОИ им. Дм. Рогачева" Минздрава России. Результаты обработаны с использованием программного обеспечения XLSTAT2019. Для оценки связи номинальных и порядковых признаков строили таблицы сопряженности и на их основе рассчитывали критерий χ² Пирсона. Для оценки факторов риска рассчитывали отношение шансов (ОШ). Статистически значимыми различия считали при р < 0,05.

Результаты. В гене RNF31 нами выявлено 5 SNPs, в гене CARD14 - 1 SNPs, в гене CARD11 - 5 SNPs, в гене SETBP1 - 2 SNPs и в гене BACH2 - 2 SNPs (описаны нами впервые). По результатам расчета ОШ из всех диагностированных нами SNPs изучаемых генов в экзонах при акне тяжелого течения 2 SNPs гена BACH2 достоверно ассоциированы с повышенным риском развития акне. В гене RNF31 нами выявлено 10 SNPs в интронах и 3 SNPs в регионе 5’-UTR, в гене CARD14 - 4 SNPs в интронах и 1 SNPs - в регионе 5’-UTR, в гене CARD11 - 6 SNPs в интронах, в генах SETBP1 и BACH2 - по одному SNPs в интронах. При расчете ОШ достоверно ассоциированы с повышенным риском развития акне 2 SNPs гена RNF31 и 2 SNPs гена CARD11 в интронах.

Заключение. Учитывая, что важным медиатором каскада распознавания C. acnes посредством TLR 2 и 4 является транскрипционный фактор NF-κB, возможно, происходит нарушение регуляции экспрессии ключевых генов, ассоциированных с воспалением. Нарушение активации NF-κB и сигнального каскада TLR-MyD88 может быть связано с патогенетическим механизмом затяжного течения тяжелой формы акне.

Введение. Роль иммунной системы в клиническом течении новой коронавирусной инфекция 2019 г. (COVID-19) представляет большой интерес. Медицинские работники подвергаются большему риску инфицирования, чем население в целом.

Цели исследования - оценить постинфекционные отклонения в иммунной системе у переболевших медицинских работников, выявить точки уязвимости иммунитета, а также разработать соответствующие меры профилактики.

Материал и методы. С помощью мультипараметровой проточной цитометрии определяли показатели клеточного иммунитета у 170 медицинских работников ФГБУ "НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина" Минздрава России в период карантинных мероприятий (март-июль 2020 г.). Образцы сыворотки крови тестировали с помощью иммуноферментного анализа на наличие специфических IgG-антител к SARS-CoV-2.

Результаты. Наличие специфических анти-SARS-CoV-2-антител у перенесших инфекцию сотрудников выявлено только в 72 % (65/90) случаев. Высокий титр специфических анти-SARS-CoV-2-антител обнаружен у 17 % (14/80) сотрудников, не имевших клинических проявлений перенесенной коронавирусной инфекции. Не отмечено статистически значимых различий показателей клеточного иммунитета в группах переболевших и неболевших сотрудников с наличием специфических анти-SARS-CoV-2-антител или их отсутствием. Корреляционный анализ выявил слабую прямую статистически значимую зависимость между титром специфических анти-SARS-CoV-2-антител и уровнем CD4⁺CD25⁺CD127^--клеток и обратную зависимость с уровнем CD3⁺CD4⁺-клеток.

Заключение. Зафиксировано начало формирования коллективного иммунитета у обследованных медицинских работников в период первой волны пандемии вне зависимости от наличия/отсутствия клинических проявлений перенесенной коронавирусной инфекции, предшествующей исследованию, или специфических анти-SARS-CoV-2-антител.

Введение. Эффективность гуморального иммунного ответа имеет решающее значение для элиминации патогена при респираторных вирусных инфекциях. Гуморальный иммунный ответ на инфицирование организма SARS-CoV-2 обеспечивается вовлечением в иммунный процесс В-клеток, что приводит к выработке специфических антител. Однако к настоящему времени все еще недостаточно данных о напряженности гуморального иммунного ответа к вирусу SARS-CoV-2 спустя год и более после перенесенной инфекции.

Цель - изучить динамику лабораторных показателей постинфекционного гуморального иммунитета к SARS-CoV-2 в течение 16 мес от момента появления симптомов.

Материал и методы. В исследование было включено 15 здоровых добровольцев и 87 пациентов, перенесших COVID-19. Переболевшие участники были разделены на 3 обследуемые группы в зависимости от времени, прошедшего с момента появления первых симптомов до момента взятия образцов крови для исследования (от 14 до 500 сут). Для всех образцов было выполнено определение уровня специфических антител к S1-, S2-, RBD-, N-белкам SARS-CoV-2, вирус-нейтрализующей активности и авидности антител, индекса антитело-зависимого клеточного фагоцитоза, а также доли S- и RBD-специфических В-клеток памяти.

Результаты. Показано, что уровень антител к S1-белку и RBD-фрагменту незначительно снижается в течение первого года после инфекции, а затем выходит на плато. Уровень антител к N-белку снижается после полугода от проявления симптомов. Показатели авидности антител и антитело-зависимого клеточного фагоцитоза постепенно повышаются в течение всего наблюдаемого периода, в то время как нейтрализующая активность изучаемых сывороток снижается. Также было обнаружено снижение нейтрализующей активности антител для Дельта-варианта SARS-CoV-2 в сравнении с диким типом. Доля В-клеток памяти в периферической крови постепенно нарастает с первых дней инфекции, достигает пика примерно к 200 сут для S-специфических и к 300 сут для RBD-специфических клеток, а затем постепенно снижается.

Заключение. Уровень антител в периферической циркуляции и их функциональность являются маркерами эффективности гуморального иммунного ответа на инфекцию SARS-CoV-2. Мы показали, что даже через 500 сут от появления симптомов у более чем 2/3 переболевших уровень нейтрализующих антител к S1-белку остается выше протективного порога для варианта Ухань SARS-CoV-2. Однако появление вирусных вариантов со сниженной чувствительностью к нейтрализации заставляет осторожно подходить к оценке протективной способности антител.

Опухолевая ткань формирует сложное микроокружение, которое состоит из клеток опухоли, клеток иммунной системы, клеток соединительной ткани и межклеточного матрикса. Исследование такой системы требует особого подхода, учитывающего контакты между всеми типами клеток и межклеточным матриксом. Переход от привычного двумерного (2D) сокультивирования клеток на поверхности культурального пластика к трехмерным (3D) моделям злокачественных опухолей позволяет точнее воспроизвести in vitro сложные взаимодействия между клетками, а также между клетками и внеклеточным матриксом, происходящие только in vivo. Ключевое влияние на развитие опухолевого процесса и на эффективность терапии злокачественных новообразований оказывают взаимодействия клеток опухоли и клеток иммунной системы. В данном обзоре мы рассматриваем основные виды 3D-моделей злокачественных опухолей, уделяя особое внимание тем из них, которые предназначены для исследования взаимодействий опухолевых клеток и макрофагов. Приведены примеры использования 3D-моделей злокачественных опухолей для доклинических исследований лекарственных препаратов, направленных на модуляцию функций макрофагов.

Используемые в настоящее время методы лечения аутоиммунных заболеваний имеют недостатки, которые могут приводить к инфекционным и онкологическим заболеваниям или быть недостаточно эффективными. Важные характеристики аутоиммунных заболеваний - утрата толерантности и индукция иммунного ответа к собственным антигенам, приводящие к повреждению клеток и тканей организма. Разработка новых методов терапии, направленных на восстановление иммунной толерантности, является актуальной и перспективной задачей. В данном обзоре освещены несколько иммунотерапевтических методов с применением мезенхимальных стромальных клеток, толерогенных дендритных клеток и регуляторных Т-клеток, а также новые технологии с использованием Т-клеточных рецепторов и химерных антигенных рецепторов. Каждый метод имеет свои преимущества и недостатки.