Иммунология

Введение. Пандемия COVID-19, начавшаяся в конце 2019 г. в китайском г. Ухане в разных странах протекала по-разному. Эти различия не всегда можно объяснить разной организацией здравоохранения. Клинические вариации, тяжесть протекания инфекции, благоприятный или летальный исход COVID-19 также могут быть связаны с иммуногенетическими различиями хозяев. Главной функцией классических белков HLA является представление пептидов инфекционных возбудителей на поверхности антиген-представляющих клеток Т-клеткам, что инициирует адаптивный иммунный ответ. Различные аллели HLA представляют разные репертуары пептидов, что потенциально может влиять на иммунный ответ. Показано, что разные аллели HLA-генов были вовлечены в восприимчивость или резистентность хозяина к таким заболеваниям, как туберкулез, малярия, гепатит В, лихорадка денге, грипп и MERS.

Цель исследования - поиск маркеров чувствительности и тяжести заболевания COVID-19 среди аллелей генов HLA-A, HLA-B и HLA-DRB1 в разных возрастных группах пациентов.

Материал и методы. Все субъекты, включенные в исследование, - жители г. Москвы. Популяционный контроль - 98 человек. Больные COVID-19 находились в стационаре ГБУЗ "ИКБ № 1 ДЗМ" в 2020-2021 гг. Присутствие SARS-CoV-2 было подтверждено методом полимеразной цепной реакции. Пациенты с легким/средним течением инфекции и благоприятным исходом 65 лет и моложе (n = 316): м/ж = 160/156, возраст Mе = 48 лет (18-65 лет), старше 65 лет (n = 102): м/ж = 43/59, возраст Mе = 72 года (66-96 лет), пациенты с тяжелым течением болезни и благоприятным исходом, 65 лет и моложе (n = 75): м/ж = 43/32, возраст Mе = 52 года (32-60 лет), старше 65 лет (n = 139): м/ж = 49/90, возраст Mе = 72 года (66-90 лет); пациенты с тяжелым течением инфекции и летальным исходом 65 лет и моложе (n = 23): м/ж = 12/113, возраст Mе = 54 года (29-60 лет), старше 65 лет (n = 88): м/ж = 23/65, возраст Mе = 74 года (66-94 года). Аллели генов HLA-A, HLA-B, HLA-DRB1 были определены методом NGS.

Результаты. После коррекции на количество аллелей обследованные возрастные группы пациентов (65 лет и моложе, старше 65 лет) не отличались от популяционного контроля по частотному профилю HLA-генов. Маркерами тяжелого течения заболевания, но с благоприятным исходом в возрастной группе 65 лет и моложе были B*08:01 и DRB1*11:03. Маркером более легкого течения болезни в возрастной группе старше 65 лет был HLA B*57:01. Маркером летального исхода тяжелого течения инфекции COVID-19 в группе старше 65 лет был HLA B*15:01.

Заключение. Изученные HLA-гены скорее ассоциированы с тяжестью и исходом инфекции, чем с самим фактом заражения.

Введение. В настоящее время высока потребность в поиске новых перспективных средств для терапии инфекций, вызванных респираторными вирусами. Значительная доля таких инфекций, в том числе приводящих к опасным для жизни осложнениям, вызывается респираторно-синцитиальным вирусом человека (РСВ). Синтетические пептиды активно разрабатываются и испытываются в качестве потенциальных противовирусных лекарственных средств. В частности, они могут быть использованы для разработки новых средств для лечения РСВ-инфекции. При создании новых пептидов с предполагаемой противовирусной активностью особое значение имеет рациональное проектирование их структур и изучение физико-химических свойств для определения корреляции между структурой и активностью.

Цели исследования - создать и экспериментально подтвердить структуры новых синтетических противовирусных пептидов, изучить их активности против РСВ.

Материал и методы. Структуры пептидов были составлены на основе анализа структур лигандов нуклеолина - клеточной мишени РСВ, а также на основе более ранних работ авторского коллектива. Пептиды были получены методом твердофазного синтеза, качественно охарактеризованы с помощью масс-спектрометрии, количественно охарактеризованы с помощью автоматического элементного анализа, их чистота была определена зонным капиллярным электрофорезом. Противовирусные свойства определяли в культуре клеток in vitro. Цитотоксичность определяли с помощью MTT-теста.

Результаты. Все полученные пептиды обладали выраженными противовирусными свойствами. Предполагается, что наибольший эффект достигается при комбинации в структуре пептида ароматических и катионогенных аминокислотных остатков, в частности Y, F, R, K, O. Противовирусными свойствами обладали как разветвленные пептиды, так и линейные. Положительный совокупный номинальный заряд пептида и/или выраженная амфипатичность способствовали проявлению противовирусных свойств. Данные структурные свойства характерны для противовирусных, клеточно-проникающих и противомикробных пептидов, в том числе природных.

Заключение. Показана эффективность примененной методологии при разработке новых эффективных синтетических противовирусных пептидов; приведены закономерности, наблюдаемые между строением пептидов и их активностью.

Введение. Одним из осложнений иммунного ответа при туберкулезе является избыточное плохо контролируемое воспаление в легких. Повышенная продукция ИЛ-6 в легких достоверно коррелирует с прогрессированием туберкулеза у чувствительных мышей. При этом тотальный дефицит ИЛ-6 на фоне устойчивого к туберкулезу фенотипа приводит к развитию чувствительности. В связи с этим роль цитокина ИЛ-6 в иммунном ответе при туберкулезе у генетически чувствительных и более устойчивых организмов может различаться.

Цель исследования - изучить влияние дефицита провоспалительного цитокина ИЛ-6 на изменение восприимчивости к Mycobacterium tuberculosis в модели туберкулеза на конгенных по MHC-II линиях мышей, чувствительных к инфекции.

Материал и методы. Самок мышей с дефицитом ИЛ-6 B6.I.100.IL-6KO и B6.I.9.3.IL-6KO и дикого типа B6.I.100 и B6.I.9.3 использовали для аэрозольного заражения M. tuberculosis H37Rv [100 колониеобразующих единиц (КОЕ)/мышь]. Определение числа КОЕ в органах зараженных животных проводили путем посева суспензий клеток легкого и селезенки на агар Дюбо и подсчетом макроколоний через 21 день. Поверхностный фенотип клеток и внутриклеточную продукцию цитокинов после стимуляции клеток легкого микобактериальными антигенами микобактерий in vitro оценивали с помощью цитофлуориметрического анализа. Криопрепараты легкого были окрашены гематоксилином и эозином.

Результаты. Мы показали, что при заражении туберкулезом у мышей конгенных линий B6.I.100.IL-6KO и B6.I.9.3.IL-6KO с дефицитом цитокина ИЛ-6 значимо сокращен срок жизни по сравнению с контрольными животными B6.I.100 и B6.I.9.3, соответственно. На фоне отсутствия ИЛ-6 наблюдается повышенная миграция нейтрофилов в легкие мышей мутантной линии B6.I.9.3.IL-6KO в начале развития инфекции. Кроме того, в условиях дефицита ИЛ-6 в легких в значительно меньшей степени формируются специфически продуцирующие ИЛ-17 Th17-лимфоциты, но наблюдается более высокий уровень ФНОα. На поздних стадиях развития туберкулезной инфекции у мышей с дефицитом ИЛ-6 возникает диффузное воспаление в легких, тогда как у животных дикого типа формируются более сконцентрированные участки воспаления, отделенные от незараженной дышащей ткани легкого.

Заключение. Дефицит ИЛ-6 на фоне генетически обусловленной высокой чувствительности к туберкулезу утяжеляет инфекционный процесс, что происходит за счет механизмов, отличающихся от реализуемых при дефиците ИЛ-6 на фоне устойчивого фенотипа.

Введение. Рак яичников (РЯ) считается одной из самых агрессивных гинекологических злокачественных опухолей. К сожалению, методы, которые в настоящее время считаются "золотым стандартом" его лечения, в большинстве случаев через ограниченный промежуток времени приводят к частым рецидивам и прогрессированию заболевания. Так как прогноз данной патологии зачастую ассоциирован с инфильтрацией опухоли иммунными клетками, ингибиторы иммунных контрольных точек могут быть использованы для активации противоопухолевого иммунного ответа при лечении опухолей данного типа. Однако на сегодняшний день недостаточно данных для эффективного отбора пациентов, способных в полной мере отвечать на подобную терапию.

Цель исследования - изучение растворимых форм PD-1 и PD-L1 (sPD-1 и sPD-L1) при новообразованиях яичников, их клинической и прогностической значимости.

Материал и методы. В исследование включены 136 пациенток и 35 здоровых женщин (группа сравнения), проходивших лечение в ФГБУ "НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина" Минздрава России. Клинический диагноз у всех пациенток подтвержден данными морфологического исследования опухоли согласно Международной гистологической классификации опухолей яичников, принятой ВОЗ в 2014 г. В исследование включены пациентки с эпителиальным РЯ трех гистологических типов: серозным (77), эндометриоидным (13) и муцинозным (8); доброкачественными новообразованиями (22) и пограничными опухолями (10) яичников, а также неэпителиальными опухолями яичников: дисгерминомой (3), сертолиомой (1) и гранулезно-клеточной опухолью (2). Концентрацию белков sPD-L1 и sPD-1 определяли в плазме крови, полученной по стандартной методике до начала специфического лечения, с помощью иммуноферментного анализа. Статистический анализ полученных результатов проводили с использованием GraphPad Prizm v. 10. При сравнении показателей и анализе их взаимосвязей использовали непараметрические критерии Манна-Уитни, Краскела-Уоллиса, коэффициент ранговой корреляции Спирмена. Анализ общей выживаемости проводили путем построения кривых дожития по методу Каплана-Майера. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05.

Результаты. Проведенное исследование показало, что медиана уровня sPD-1 в плазме крови здоровых женщин группы сравнения составила 43,8 (33,6-54,6) пг/мл, а в группе пациенток с РЯ - 47,1 (35,1-61,6) пг/мл. Медиана уровня sPD-L1 в плазме крови в группе сравнения составила 60,8 (26,2-91,7) пг/мл и была незначимо выше, чем у пациенток с РЯ 40,5 (15,7-78,9) пг/мл (р = 0,075). Уровень sPD-L1 в плазме крови пациенток достоверно снижен при доброкачественных и неэпителиальных злокачественных опухолях яичников (p = 0,022 и p = 0,006 соответственно) по отношению к группе сравнения. Следует отметить, что уровень sPD-L1 у пациенток с неэпителиальными опухолями яичников достоверно ниже по сравнению с таковым у пациенток с эпителиальными опухолями (p = 0,02). Для уровня sPD-L1 наблюдается значимая ассоциация с факторами опухолевой прогрессии. Так, уровень sPD-L1 значимо выше на поздних стадиях заболевания, в случае опухолей большего размера, при наличии асцита и регионарных метастазах. Проведенный анализ прогностической значимости показал, что высокий уровень белка sPD-L1 в плазме пациенток со злокачественными опухолями яичников является значимым неблагоприятным прогностическим фактором (HR = 2,28; p = 0,023).

Заключение. Проведенное исследование показало, что уровень sPD-L1 в плазме крови у пациенток с опухолями яичников отражает степень распространенности опухолевого процесса и потенциально может быть эффективным инструментом для мониторинга течения данного заболевания. Также полученные нами результаты и данные литературы свидетельствуют в пользу перспективности использования анализа уровня sPD-L1 в качестве маркера эффективности терапии РЯ, а стало быть, прогноза заболевания.

Введение. Гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК) - самый распространенный тип рака печени с низкой выживаемостью из-за его позднего выявления. Цитокин ИЛ-27 играет ключевую роль, активируя факторы STAT1 и STAT3, что влияет на развитие ГЦК. Недавние исследования указывают на важность сигнального пути IL-27R в контроле врожденных цитотоксических клеток, что может быть значимо для диагностики и лечения ГЦК на ранних стадиях.

Цель - изучить роль IL-27R-сигналинга на ранних стадиях развития ГЦК.

Материал и методы. В исследовании использовались лабораторные мыши с генетическими модификациями в гене α-субъединицы рецептора ИЛ-27 (Il27r^-/- и Il27ra^+/-), подвергнутые внутрибрюшинному введению диэтилнитрозамина (DEN) для анализа апоптоза и пролиферации гепатоцитов. Количественный анализ нейтрофилов проводили методом проточной цитофлуориметрии. Уровень пролиферации определяли по окрашиванию маркера Ki67 на срезах печени, а для детекции апоптоза использовался TUNEL-анализ на срезах печени мышей. Анализ фосфорилирования транскрипционного фактора STAT3 в печени мышей проведен методом вестерн-блоттинга. Уровни экспрессии гена Ifng и генов Il10, Retnla, Chil3l1, Cd44, ассоциированных с репарацией в печени мышей, были проанализированы с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ).

Результаты. Через 48 ч после введения DEN у мышей Il27ra^-/- наблюдались снижение уровня пролиферации и апоптоза в печени, а также уменьшение количества нейтрофилов. В течение 24 ч после введения DEN отмечалось повышение экспрессии генов, связанных с репарацией ткани, в печени мышей Il27ra^-/-.

Заключение. Результаты исследования свидетельствуют о воздействии сигнального пути, связанного с IL-27R, на процессы воспаления, апоптоза и пролиферации гепатоцитов, а также на процессы репарации печени. Эти данные предоставляют возможность оценки уровня воспаления в печени. Важно отметить, что хроническое воспаление в долгосрочной перспективе может привести к развитию ГЦК, и измерение уровня ИЛ-27 после повреждающего воздействия на печень позволяет оценить данное воздействие.

Х-сцепленный лимфопролиферативный синдром второго типа (ХЛП2) - редкое первичное иммунодефицитное состояние, характеризующееся высокой частотой развития таких тяжелых осложнений, как гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз и воспалительные заболевания кишечника. В основе заболевания лежат патогенные варианты гена XIAP (X-linked inhibitor of apoptosis, или X-сцепленный ингибитор апоптоза), кодирующего одноименный белок, обеспечивающий передачу сигнала через рецептор NOD2. На текущий момент крайне актуальным вопросом является разработка методов диагностики, позволяющих своевременно установить диагноз пациентам с ХЛП2.

Цель настоящей работы - исследование экспрессии фактора некроза опухоли (ФНО) моноцитами у пациентов с ХЛП2 в ответ на стимуляцию лигандом рецептора NOD2 мурамилдипептидом (МДП).

Материал и методы. В исследование были включены 4 пациента с ХЛП2, 3 матери с генетически верифицированным носительством патогенных вариантов гена XIAP, а также 21 условно здоровый донор старше 18 лет. Из образцов периферической крови выделяли фракцию мононуклеарных клеток. Стимуляция рецептора NOD2 проводилась путем инкубации клеток в растворе МДП. В качестве положительного контроля использовали раствор липополисахарида, отрицательного - полную культуральную среду. Оценку экспрессии ФНО моноцитами проводили c помощью проточной цитометрии.

Результаты. Нами было сформировано пороговое значение для оценки ответа на стимуляцию МДП. Во всех образцах от условно здоровых доноров наблюдался значимый прирост доли ФНО-продуцирующих моноцитов в ответ на стимуляцию. У матерей - носительниц патогенных вариантов гена XIAP ответ был сравним с таковым у здоровых доноров. В образцах от всех пациентов, включенных в исследование, несмотря на наличие остаточной экспрессии белка XIAP, наблюдалось отсутствие ответа на стимуляцию L18-МДП. Дополнительно на образцах 5 условно здоровых доноров и одного пациента продемонстрирована возможность использования криоконсервированных мононуклеаров в качестве материала для исследования.

Заключение. Вышеописанный метод в комбинации с оценкой экспрессии белка XIAP позволяет в короткий срок подтвердить наличие у пациента диагноза ХЛП2.

Введение. Изучение особенностей протекания COVID-19 и его последствий остается актуальной задачей, поскольку сохраняется риск появления новых опасных штаммов SARS-CoV-2 и иных инфекционных агентов со схожими механизмами действия. Настоящее исследование вносит вклад в понимание функционирования иммунной системы при COVID-19, а его результаты могут быть полезны для практического здравоохранения.

Цель исследования - определить прогностический потенциал sCD40L, MDC, FKN, IP-10 и VEGF в отношении особенностей течения и исхода COVID-19.

Материал и методы. В исследование были отобраны образцы сыворотки крови 1614 пациентов с различной тяжестью течения COVID-19, в том числе 302 - с летальным исходом. В образцах методом мультиплексного иммунофлуоресцентного анализа определяли уровни sCD40L, MDC, FKN, IP-10 и VEGF.

Результаты. При тяжелом и летальном течении заболевания уровни MDC и sCD40L были значимо ниже, а IP-10 - выше, чем у пациентов с более легкими формами COVID-19. При этом при анализе данных некоморбидных пациентов без сопутствующей патологии (индекс Чарлсон) ≤ 2) значимость различий уровня sCD40L пропадает. Уровень FKN при поступлении в стационар был значимо ниже у пациентов, у которых в итоге развился "цитокиновый шторм".

Заключение. Уровни MDC и IP-10 можно использовать в качестве прогностических маркеров исхода при COVID-19. Уровень FKN обладает прогностическим потенциалом в отношении "цитокинового шторма" на ранних стадиях заболевания.

Клеточное старение - один из фундаментальных биологических процессов, который заключается в необратимой блокировке деления клетки под действием внешних или внутренних факторов. Клеточное старение необходимо для формирования и поддержания нормальной структуры тканей и органов, а также для предотвращения развития злокачественных опухолей. Однако в пожилом возрасте накопление стареющих клеток в тканях становится важным повреждающим фактором, способствующим развитию возраст-ассоциированных заболеваний. Негативное влияние стареющих клеток реализуется через секрецию провоспалительных цитокинов в рамках особого секреторного фенотипа, ассоциированного со старением (СФАС). Увеличение числа стареющих клеток иммунной системы способствует генерализации повреждения тканей, снижению защиты от инфекционных заболеваний. Удаление стареющих клеток в эксперименте позволяет отсрочить развитие заболеваний, связанных со старением, увеличивает продолжительность жизни животных. Ведутся интенсивные доклинические и клинические исследования сенотерапевтических препаратов, предназначенных для лечения возраст-ассоциированных заболеваний путем элиминации стареющих клеток или модуляции СФАС.

Легочный фиброз представляет собой патологический процесс, который характеризуется разрастанием фиброзно-рубцовой ткани в паренхиме легких, приводящим к разрушению альвеолярных структур и развитию дыхательной недостаточности. Рост числа пациентов с фиброзом легких, в том числе после пандемии новой коронавирусной инфекции, и отсутствие эффективных методов лечения диктуют необходимость более глубокого осмысления патогенеза данного заболевания. При этом все большее внимание уделяется исследованиям иммунных механизмов развития фиброза. Макрофаги, представленные в ткани легких гетерогенной популяцией клеток, различающиеся по локализации, происхождению и функциям, играют ключевую роль в патогенезе фиброза. В обзоре представлены современные данные о различных подтипах легочных макрофагов, их роли в фибротическом процессе, а также о некоторых механизмах, регулирующих процесс фиброгенеза.

Аллергический ринит (АР) - воспалительное заболевание слизистой оболочки носовой полости, от которого страдает до 30 % населения в Европе и до 20 % в Российской Федерации. Несмотря на то, что АР не является тяжелой патологией, он наносит значительный экономический ущерб: в Евросоюзе прямые затраты на борьбу с АР составляют 1-1,5 млрд евро в год. У 40 % пациентов с АР впоследствии развивается более тяжелая инвалидизирующая патология - бронхиальная астма (смертность от нее составляет до 300 тыс. человек в год). Подходы к терапии АР включают фармакотерапию глюкокортикостероидами, блокаторами Н1-гистаминовых рецепторов и антагонистами лейкотриенов, а также аллерген-специфическую иммунотерапию. Тем не менее рост заболеваемости продолжается, а поиск новых способов профилактики и контроля данного заболевания остается актуальной задачей.

Согласно традиционному представлению, в патогенезе АР главную роль играют клетки иммунной системы: Th2-лимфоциты, В-клетки и эозинофилы, которые выделяют провоспалительные цитокины (главным образом ИЛ-4, ИЛ-5 и ИЛ-13) и другие факторы воспаления, формирующие основные проявления патологии. Однако с внедрением молекулярно-биологических методов исследования было накоплено множество доказательств участия эпителиальных клеток респираторного тракта и выделяемых ими провоспалительных цитокинов ИЛ-25, ИЛ-33 и TSLP (thymic stromal lymphopoietin) в патогенезе АР. В рамках данного обзора мы проводим обобщение и анализ роли триады вышеуказанных цитокинов в патогенезе АР.