Иммунология

Начиная с 1980-х гг. со стороны специалистов различных областей медицины наблюдается повышение интереса к иммунологии как науке и клинической дисциплине. Нейроиммуноэндокринная регуляция процессов жизнеобеспечения организма признана в мире основополагающей. Преподавание студентам иммунологии в нашей стране началось в 1971 г. под руководством академика РАН Р.В. Петрова на курсе неинфекционной иммунологии с основами иммуногенетики. Первая кафедра иммунологии II Московского медицинского института имени Н.И. Пирогова (II МОЛГМИ) под руководством Р.В. Петрова была создана в 1974 г. В 1982 г. был издан первый учебник иммунологии. Новые современные учебники по иммунологии и аллергологии были созданы под руководством академика РАН Р.М. Хаитова, включая его учебник "Иммунология", выдержавший 4 издания. Логическим продолжением развития образования в области иммунологии и аллергологии стало формирование системы последипломного образования для медицинских работников. Одна из первых кафедр клинической иммунологии и аллергологии для обучения врачей была создана Р.М. Хаитовым в 1990 г. в Институте повышения квалификации ФМБА России. Эту кафедру он возглавлял до 2017 г. С 2021 г. по настоящее время кафедрой заведует член-корреспондент РАН М.Р. Хаитов. В настоящее время кафедра является структурным подразделением Академии постдипломного образования Федерального научно-клинического центра специализированных видов медицинской деятельности и медицинских технологий ФМБА России и базируется в ФГБУ "ГНЦ Институт иммунологии" ФМБА России. Со времени создания Р.М. Хаитовым кафедры клинической иммунологии и аллергологии в 1990 г. пройден большой путь. Усовершенствованы программы подготовки специалистов в ординатуре, программы профессиональной переподготовки, повышения квалификации по специальности "аллергология и иммунология", разработаны программы первичной и периодической аккредитации.

Введение. Агонисты паттерн-распознающих рецепторов используются для создания иммуностимуляторов и иммунологических адъювантов, позволяющих активировать врожденный иммунитет для получения требуемых защитных эффектов. Выбор агонистов, наиболее подходящих в конкретных клинических ситуациях, должен быть основан на понимании механизмов их действия, а для этого необходима детальная информация о биологических эффектах, оказываемых агонистами на клетки иммунной системы.

Цель исследования - сопоставить транскриптомы макрофагов человека, активированных агонистами рецепторов NOD1 и TLR4 in vitro.

Материал и методы. Макрофаги человека, полученные путем культивирования моноцитов крови здоровых доноров с гранулоцитарно-макрофагальным колониестимулирующим фактором, стимулировали агонистами NOD1 и TLR4 в течение 1, 4 и 9 ч. Транскриптомы анализировали с помощью высокопроизводительного секвенирования РНК (RNA-seq) и полимеразной цепной реакции в реальном времени. В качестве дополнительных методов использовали анализ обогащения генов по функциональной принадлежности и анализ сайтов связывания факторов транскрипции.

Результаты. Главным различием транскриптомов макрофагов, активированных агонистами NOD1 и TLR4, стала индукция более мощного интерферонового ответа при активации агонистом TLR4. Среди защитных механизмов, запускаемых в макрофагах при стимуляции агонистом NOD1, необходимо отметить повышение экспрессии генов, кодирующих белки с антимикробными свойствами (аконитатдекарбоксилазу-1, антимикробные хемокины), медиаторы воспаления и белки, необходимые для индукции дифференцировки Th17-клеток.

Заключение. Полученные данные позволяют рекомендовать агонисты NOD1 для профилактики и лечения инфекций, вызванных внеклеточными формами бактерий и грибов.

Введение. Известно, что композиции аминокислот для парентерального питания проявляют иммуномодулирующее действие в отношении Т- и В-лимфоцитов, фагоцитов.

Цель исследования - изучить влияние композиций аминокислот на антибактериальные функции нейтрофильных гранулоцитов периферической крови человека (нейтрофилов) в различных экспериментальных условиях.

Материал и методы. Нейтрофилы преинкубировали с композициями аминокислот Амин или Вамин 14, затем добавляли форбол-миристат-ацетат (ФМА) и методом проточной цитометрии оценивали "респираторный взрыв" в нейтрофилах. В другой модели нейтрофилы инкубировали с бактериями (St. aureus) в соотношении 1 : 10 или 10 : 1, отмывали, инкубировали с композициями аминокислот, еще раз отмывали, лизировали, высевали на мясо-пептонный агар для учета колоний, образуемых выжившими бактериями.

Результаты. Амин и Вамин 14 оказывали слабое иммуностимулирующее действие на "респираторный взрыв" в нейтрофилах, активированных ФМА. Добавление композиций аминокислот к нейтрофилам, фагоцитировавшим бактерии при соотношении нейтрофилы/бактерии 1 : 10, приводило к увеличению количества колоний, образуемых выжившими бактериями. При соотношении нейтрофилы/бактерии 10 : 1 исследованные композиции аминокислот усиливали бактерицидность нейтрофилов, вызывая уменьшение количества выживших бактерий, формирующих колонии. Прямое добавление композиций аминокислот усиливало образование колоний бактериями.

Заключение. Композиции аминокислот Амин и Вамин 14 усиливают рост бактерий, в том числе фагоцитированных нейтрофилами, при соотношении клетки/бактерии 1 : 10, но стимулируют бактерицидность нейтрофилов, фагоцитировавших St. aureus, при соотношении клетки/бактерии 10 : 1, а также в тесте индукции "респираторного взрыва" в нейтрофилах, активированных ФМА.

Введение. COVID-19, вызванный коронавирусом тяжелого острого респираторного синдрома 2 (SARS-CoV-2), распространился по всему миру и кардинально изменил нашу привычную жизнь. Хотя SARS-CoV-2 не обладает высокой летальностью по сравнению с возбудителями других вирусных заболеваний, такими как возбудитель атипичной пневмонии или возбудитель геморрагической лихорадки Эбола, он привел к развитию пандемии и к самому высокому числу смертей от инфекции за последние 20 лет. Основную роль в элиминации вируса из организма играют антитела, направленные против структурных белков SARS-CoV-2, в первую очередь против белка шипа (S-белка).

Цель работы - анализ гуморального иммунного ответа пациентов с COVID-19 на уровне IgG-антител к линейным и конформационным эпитопам основных структурных белков SARS-CoV-2 - нуклеокапсидного (N-белка) и белка шипа (S-белка).

Материал и методы. С помощью иммуноблоттинга и иммуноферментного анализа были определены и проанализированы уровни сывороточных IgG-антител к N- и S-белкам SARS-CoV-2 в 153 образцах сывороток, полученных от пациентов с диагнозом "COVID-19".

Результаты. Выявлены взаимосвязи между значениями коэффициента позитивности (КП) антител к N-белку и RBD-домену S-белка SARS-CoV-2 и возрастом пациента, потребностью пациента в кислороде и артериальной гипертонией. Мы показали: чем больше значение (КП) IgG-антител к RBD-домену S-белка, тем быстрее наступает выздоровление, что подтверждает роль RBD-домена как мишени для протективного иммунного ответа.

Заключение. Проведенное исследование показало, что для понимания течения заболевания COVID-19, прогнозирования развития у пациента пролонгированной формы и возможных осложнений, таких как переход на искусственную вентиляцию легких, необходим не только качественный, но и количественный анализ значений КП IgG-антител к линейным и конформационным эпитопам N- и S-белков SARS-CoV-2.

Введение. Эпидемия COVID-19 - крупнейшая пандемия в современной истории. Согласно данным Всемирной организации здравоохранения, на сегодняшний день официально зарегистрировано более 670 млн случаев заражения COVID-19, но, по мнению специалистов, реальное количество случаев COVID-19 значительно больше. Всеохватность пандемии вызвала необходимость самой массовой вакцинации в истории, но даже после начала кампании по вакцинации распространение заболевания радикально не уменьшилось. Всеобщая иммунизация популяции была выбрана в качестве одной из стратегий борьбы с пандемией. Одновременно с этим в научной литературе появляются противоречивые данные о влиянии специфического иммунитета на течение и исход заболевания.

Цель настоящего исследования - выяснить взаимосвязь между наличием специфического Т-клеточного и/или гуморального иммунного ответа на SARS-CoV-2 у COVID-наивных пациентов и исходом заболевания.

Материал и методы. Используя метод ELISpot, изучали наличие клеточного иммунитета к наиболее важным мишеням (S-, N-, M-белки) SARS-CoV-2 (дельта-вариант) у ранее наивных к вирусу пациентов (n = 97). С помощью мультиплексного анализа было проведено качественное определение IgG к различным эпитопам SARS-CoV-2. Выделена подгруппа с более строгими критериями включения, чтобы минимизировать влияние коморбидности и возраста пациента на исход заболевания (n = 40).

Результаты. На 8-й день заболевания у 100 % пациентов отсутствовал Т-клеточный иммунитет. Его формирование завершалось к 17-му дню заболевания. Выживаемость пациентов не зависела от наличия специфического гуморального и клеточного иммунитета против SARS-CoV-2. Отсутствие коморбидности (ожирение, диабет, нейродегенеративные заболевания, онкология) и молодой возраст пациента значимо не сказывались на результате.

Заключение. На основании результатов проведенного исследования нами не обнаружено достоверной зависимости между наличием гуморального или клеточного иммунитета и исходом заболевания у не иммунизированных ранее пациентов, как в общей группе пациентов, так и в группе пациентов с дополнительными критериями включения.

Введение. Имеющиеся сведения о взаимном влиянии СOVID-19 и тяжелой бронхиальной астмы (ТБА) противоречивы. Влияние терапии астмы на риск развития COVID-19 и тяжесть его течения изучены недостаточно.

Цель исследования - оценить частоту и тяжесть COVID-19 у пациентов с ТБА, получавших разные варианты лечения, а также влияние новой коронавирусной инфекции на течение ТБА.

Материал и методы. Под наблюдением в 2020-2022 гг. находились 99 взрослых амбулаторных пациентов [мужчин 35 (35%)/женщин 64 (65%)] с ТБА в возрасте от 18 до 81 года. Стандартную терапию (ИГКС/ДДБА ± ДДХЛ ± монтелукаст ± системные глюкокортикоиды) получали 49 пациентов (1-я группа); у 50 пациентов (2-я группа) применялось дополнительное лечение иммунобиологическими препаратами (омализумаб - 7 человек, меполизумаб - 14 человек, бенрализумаб - 12 человек, дупилумаб - 17 человек).

Данные о перенесенном COVID-19 и о вакцинации против новой коронавирусной инфекции были получены ретроспективно, из медицинских документов во время очных визитов и дистанционных контактов. Контроль ТБА оценивался при помощи русскоязычной версии теста ACQ-5.

Результаты. Заболеваемость COVID-19 была одинаковой в обеих группах (63 и 66 %, p > 0,05). Число госпитализаций по поводу новой коронавирусной инфекции было ниже среди пациентов с ТБА, которые дополнительно получали иммунобиологические препараты (24 %), по сравнению с пациентами, у которых применяли только стандартную терапию (46 %, р < 0,05). Перенесенный COVID-19 приводил к ухудшению контроля у половины пациентов с ТБА в 1-й группе и у трети пациентов во 2-й.

Заключение. Использование иммунобиологических препаратов в дополнение к стандартной терапии у пациентов с ТБА не приводит к более частому возникновению и тяжелому течению COVID-19. В ряде случаев новая коронавирусная инфекция может вызывать обострение ТБА.

Введение. Инфекция, вызванная SARS-CoV-2, создала значительную нагрузку на систему здравоохранения стран по всему миру. В связи с этим в условиях продолжающейся циркуляции SARS-CoV-2 изучение возможных предикторов неблагоприятного течения и исхода заболевания, а также развития тромботических осложнений является актуальной и важной задачей.

Цель исследования - изучение экспрессии генов, кодирующих АСЕ2, рецептор врожденного иммунитета TLR7, цитокины ИФН-α, ИЛ-1β и ФНО, в лейкоцитах периферической крови у пациентов пожилого возраста с COVID-19, а также ассоциации экспрессии указанных генов с риском развития тромботических осложнений, оцениваемых по уровню D-димера.

Материал и методы. В исследование включено 50 пациентов пожилого возраста (65-77 лет) с подтвержденным диагнозом COVID-19, группа сравнения составила 15 человек (возраст 65-69 лет) без COVID-19. В качестве исследуемого материала использовали лейкоцитарную массу, полученную из образцов периферической крови. Экспрессию генов оценивали методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с обратной транскрипцией.

Результаты. Показано значительное снижение экспрессии гена ACE2 в основной группе относительно группы сравнения. Оценка молекул врожденного иммунитета показала повышение экспрессии генов TLR7, IFNA, а также генов TNF и IL1B по отношению к группе сравнения. Особую задачу исследования представляло сравнение исследуемых показателей с учетом прокоагулянтной активности, оцениваемой по уровню D-димера.

Показано, что высокий уровень D-димера (> 1 мг/л) у пациентов с COVID-19 ассоциирован с более низким уровнем экспрессии гена IFNA и повышением уровня экспрессии генов провоспалительных цитокинов TNF и IL1B по сравнению с подгруппой с низким уровнем D-димера (< 1 мг/л). В группе с низким уровнем D-димера экспрессия генов TNF и IL1B не отличалась от группы сравнения.

Заключение. Повышение уровня экспрессии гена TLR7 в сочетании со снижением экспрессии гена IFNA в подгруппе с высоким уровнем D-димера может свидетельствовать о дисбалансе факторов врожденного иммунитета у пациентов с COVID-19. Выявленное повышение экспрессии генов провоспалительных цитокинов TNF и IL1B ассоциировано с высоким риском тромбообразования (оцениваемому по уровню D-димера) и может быть одним из маркеров неблагоприятного исхода COVID-19.

Введение. С 2023 г. в России в рамках расширенного неонатального скрининга предполагается проведение обследования на врожденные иммунодефицитные состояния методом определения уровней эксцизионных рекомбинантных колец (TREC/KREC). При этом снижение уровней TREC/KREC до подпороговых значений наблюдается как при первичных, генетически обусловленных нарушениях иммунитета, так и при вторичных, возникших в результате внешних воздействий.

Цель - анализ выявленных случаев снижения уровней TREC/KREC у новорожденных до подпороговых значений и поиск возможных причин такого снижения, помимо первичных иммунодефицитных состояний.

Материал и методы. Уровень TREC/KREC определяли методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Для исследования использовали образцы сухих пятен новорожденных, полученных при проведении неонатального скрининга.

Результаты. С марта 2021 г. по сентябрь 2022 г. обследовано более 10 000 новорожденных. За этот период не выявлено ни одного новорожденного с истинным первичным иммунодефицитом. Выявлены 3 ребенка с подпороговыми уровнями KREC. Матери всех этих детей получали противоопухолевую химиотерапию с применением ритуксимаба. Ритуксимаб, предположительно, способен проникать через плацентарный барьер и вызывать снижение содержания В-клеток у плода. Аналогичные случаи описаны в литературе. Предполагается, что у выявленных пациентов развивалась В-клеточная недостаточность по этому же механизму.

Заключение. Пациенты с подпороговыми уровнями KREC требуют длительного наблюдения педиатра и иммунолога, комплексного лабораторного обследования уровня сывороточных иммуноглобулинов и субпопуляционного состава лимфоцитов, динамического контроля TREC/KREC.

Введение. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) - наиболее распространенная на территории Российской Федерации острая зоонозная вирусная инфекция. Заболевание вызывают хантавирусы, обладающие способностью в значительной степени модулировать иммунный ответ.

Цель - определение взаимосвязи фенотипических признаков лимфоцитов врожденного и адаптивного иммунитета с их цитотоксическими и иммунорегуляторными свойствами на разных стадиях развития инфекционного процесса при ГЛПС.

Материал и методы. Под наблюдением находились 65 пациентов с ГЛПС, у которых в каждый период заболевания проводилась проточная цитофлуориметрия клеток крови с определением фенотипических характеристик лимфоцитов врожденного и адаптивного иммунитета. 15 условно здоровых субъектов составили группу сравнения.

Результаты. Установлено, что к наиболее информативным отклонениям от показателей в группе сравнения при ГЛПС в лихорадочный период относится динамика со стороны числа цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ), экспрессирующих активационный маркер - лектиновый рецептор С-типа NKG2D (СD3⁺СD8⁺СD314⁺), а также регуляторных Т-клеток (Трег) преимущественно CD3⁺CD8⁺FoxP3⁺-фенотипа. В олигоурический период ГЛПС отмечено преобладание у ЦТЛ NKG2D⁺-фенотипа. В полиурический период зарегистрирован достоверный рост числа НКТ на фоне снижения общего числа Т-лимфоцитов (преимущественно Т-хелперов) и NKG2D⁺-НК.

Заключение. Полученные результаты, помимо прикладного значения, позволяют выдвинуть гипотезу о патогенетическом значении экспрессии NKG2D-рецепторов ЦТЛ и возможности взаимосвязи этого механизма с особенностями процессов перепрограммирования самих ЦТЛ в НКТ, формирования СD8⁺-Трег, развития иммунологической памяти.

Введение. Наследственный ангионевротический отек (HAО) - первичный иммунодефицит с дефектом в системе комплемента, который может иметь тяжелые, угрожающие жизни клинические симптомы в виде абдоминальных атак и ангионевротических отеков. В статье подробно описано исследование, наблюдение и лечение большой карачаевской семьи, в которой 10 человек имели подозрение на НАО I типа.

Цель - выявить мутацию в гене SERPING1, кодирующем С1-INH, у членов семьи с идентичными симптомами.

Материал и методы. В исследование были включены 8 пациентов с ангионевротическими отеками и абдоминальными атаками. На основании сбора жалоб, осмотра и исследований биообразцов крови членов семьи (изменение уровня С4, концентрации C1-INH и функциональной активности С1-INH) проводили прямое секвенирование по Сэнгеру. Одновременно с помощью валидированных опросников проводили объективную оценку тяжести симптомов НАО.

Результаты. Впервые в 7-м экзоне гена SERPING1 у всех обследуемых пациентов был обнаружен новый вариант c.1127_1130dup [p.(Val378Phefs*48)] в гетерозиготном состоянии, который косегрегирует с недостаточным уровнем и активностью С1-INH.

Заключение. Полученные данные расширяют представление о новых вариантах мутаций в гене, кодирующем С1-INH (SERPING1), из более чем 700 уже известных, которые могут привести к снижению синтеза белка или его функциональной недостаточности. Выявление мутаций в гене SERPING1 позволяет сократить период установления пациенту диагноза НАО.

Введение. Определение серологического статуса пациентов в отношении SARS-CoV-2 необходимо для оценки клинического течения COVID-19 и эпидемиологической обстановки в целом, а также для выработки стратегии ревакцинации населения. Хотя существует большое количество тест-систем для определения антител к SARS-CoV-2, их точность, чувствительность и специфичность сильно варьируют. Тест-системы различаются в зависимости от используемой платформы и набора антигенов, что затрудняет интерпретацию и сопоставление результатов.

Цель - определить диагностические характеристики тест-системы MILLIPLEX^® SARS-CoV-2 Antigen Panel 1 IgG для мультиплексного иммунофлуоресцентного анализа (МИФА) уровня антител к SARS-CoV-2 на приборе FlexMap 3D (Luminex, США) в биообразцах сыворотки крови людей, как перенесших COVID-19, так и вакцинированных против COVID-19.

Материал и методы. В исследование включены 3 группы участников: лица с COVID-19 в анамнезе; лица, не имевшие COVID-19 в анамнезе и невакцинированные; вакцинированные лица. Для всех биообразцов выполнено определение уровня IgG-антител к SARS-CoV-2 с помощью иммуноферментного анализа (ИФА), МИФА, а также определение уровня вирус-нейтрализующих антител.

Результаты. В рамках исследования определено пороговое значение для подтверждения наличия IgG-антител к S1-субъединице S-белка (белка шипа) SARS-CoV-2 методом МИФА - 3267 MFI, а также оценены чувствительность и специфичность данного метода, которые равны 0,78 и 0,92 соответственно. Разработана линейная регрессионная модель для пересчета значений MFI в BAU/мл. Определен серопротективный уровень антител к S1-субъединице S-белка SARS-CoV-2 - 5192 MFI.

Заключение. Определение уровня IgG-антител с помощью МИФА обладает высокой диагностической чувствительностью и специфичностью. Данный метод позволяет оценивать серопротективность по уровню антител к S1-субъединице S-белка SARS-CoV-2. Кроме того, полученные результаты могут быть сопоставлены с международными единицами измерения BAU/мл по формуле:

m - 492,770 + 31,320 × b ⇔ b = - 15,733 + 0,032 × m,

где b - величина в BAU/мл, m - величина в MFI.